乳腺癌组织中Ang2及VEGF的表达及意义

作者：雷杰    作者单位：075000 河北张家口，河北北方学院附属第一医院普外科,2. 实验中心电镜室     【摘要】  目的 研究乳腺癌组织中血管生成素（Ang2）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学SABC法，检测85例乳腺癌及42例乳腺纤维腺瘤组织中Ang2及VEGF的表达情况，并评价两指标与乳腺癌临床病理学因素之间的关系。结果 乳腺癌组织中Ang2阳性率（68.24%，58/85）明显高于乳腺纤维腺瘤（7.14%，3/42）(P<0.0001)，乳腺癌组织中VEGF阳性率（57.65%，49/85）也明显高于乳腺纤维腺瘤（4.76%，2/42）(P<0.0001)。Ang2和VEGF表达与患者年龄及肿瘤大小无明显关系（P＞0.05）。Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌和淋巴结转移阳性组的VEGF表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌和淋巴结转移阴性组(P<0.0001)。Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌组的Ang2表达阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌组（P=0.015）。淋巴结转移阳性组的Ang2阳性率明显高于淋巴结转移阴性组(P<0.0001)。Ang2和VEGF两指标的表达具有相关性(P<0.05)。结论 乳腺癌组织中Ang2及VEGF有异常表达，与乳腺癌的预后有关。

    【关键词】  乳腺癌 血管生成素 血管内皮细胞生长因子 免疫组织化学方法

    血管生成素（angiopoietin，Ang）和血管内皮生长因子(vascular endothelial  growth  factor,  VEGF)为目前已知的两个作用于血管内皮细胞的血管生成促进因子，在肿瘤的血管生成及发展中起着重要的作用[1]。我们应用免疫组化技术检测Ang2和VEGF在乳腺癌组织中的表达，并评价两因子与临床病理学特征的关系。

    1  资料和方法

    1.1  临床资料

    收集我院2004年9月～2006年12月间手术治疗、资料完整的乳腺癌病例85例，全部病例术前均未行放疗和化疗。患者均为女性，年龄32～74岁，平均年龄50.80岁，中位年龄51岁。有腋窝淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者37例；临床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期51例，Ⅲ期15例，Ⅳ期1例。乳腺纤维腺瘤42例，均为同期手术治疗病例。

    1．2  主要试剂

    兔抗人Ang2和VEGF多克隆抗体及SABC免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司，DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1．3  方法

    收集相应病例的存档蜡块，行5μm厚连续切片，取1张行HE染色，其余行免疫组化SABC方法染色。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每次实验均以公司提供的阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

    1．4  结果判断

    以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。在光镜下计数10个高倍视野（×400），平均阳性细胞数≥10%判断为阳性病例，＜10%为阴性病例。

    1．5  统计学方法

    应用SAS8.0软件行统计学分析，采用χ2检验，检验水准α=0.05。

    2  结果

    2．1  Ang2和VEGF在乳腺癌组织及纤维腺瘤中的表达

    乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中Ang2阳性率分别为7.14%(3/42)和68.24%(58/85)，两组比较差异有统计学意义（χ2=42.0313，P＜0.0001）。乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中VEGF阳性率分别为4.76%（2/42）和57.65%（49/85），两组比较差异有统计学意义（χ2=32.7157，P＜0.0001)。

    2.2  Ang2和VEGF在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌生物学特征的关系

    见表1。

    2.3  Ang2和VEGF在乳腺癌组织中表达的相关性

    Ang2和VEGF均表达阳性者45例， Ang2和VEGF均表达阴性者23例， Ang2表达阳性而VEGF表达阴性者13例，Ang2表达阴性而VEGF表达阳性者4例。经卡方检验差异有统计学意义（χ2=29.3883，P＜0.0001）。

    3  讨论

    实体瘤的生长、侵袭和转移离不开新生血管，肿瘤新生血管的存在不但为肿瘤生长提供了营养物质，带走代谢产物，还为肿瘤细胞的浸润及转移提供了通道[2]。肿瘤血管的形成受多种因素的调控, 其中血管生成素(Ang)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)与肿瘤血管的生成密切相关。

    血管生成素是近年来发现的重要血管生成调控因子，其家族成员Ang1和Ang2的共同受体是Tie2（酪氨酸激酶受体2）。Ang1促进血管内皮细胞出芽，促进血管重塑、成熟，维持血管的完整性，起稳定血管的作用。而Ang2的功能主要是通过竞争性抑制Ang1与受体Tie2结合，使血管内皮细胞同周围的支持细胞发生解离，形成不稳定渗漏性的血管，从而促进肿瘤血管的重构与形成，为肿瘤细胞的浸润及转移提供了通道。与Ang1相比，Ang2与肿瘤血管的生长、侵蚀能力关系更密切[3]。

    血管内皮细胞生长因子是另一个重要的促血管生成因子，它是一个高度特异的血管内皮细胞有丝分裂原，对血管内皮细胞有强烈的促分裂和趋化作用，能特异地刺激内皮细胞增殖，还具有促血管通透性作用，为血管内皮细胞的迁移和肿瘤细胞的转移表1  Ang2和VEGF在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌生物学特征的关系  提供基质[4]。

    本研究发现，乳腺癌组织中Ang2和VEGF的阳性率明显高于乳腺纤维腺瘤(P<0.0001)。Caine等[5]发现乳腺癌病人血浆中Ang2和VEGF的表达水平显著升高，Obermair等[6]发现乳腺癌的VEGF表达明显高于正常乳腺组织及纤维腺瘤，高冬玲等[7]报道乳腺癌组织中Ang2 的表达率显著高于正常乳腺间质组织和乳腺纤维瘤组织。说明良恶性乳腺病变组织的新生血管形成活性有显著差异，提示 Ang2和VEGF与乳腺病变的良恶性有关，可能成为临床上判断乳腺肿瘤生物学行为的指标之一。

    Sfiligoi等[8]发现高水平Ang2表达乳腺癌易发生腋淋巴结转移，并具有预后意义。Wang 等[9]研究发现Ang2表达与胃癌TNM 分期、淋巴结转移及远处转移显著相关。Gasparini等[10]报道肿瘤组织中VEGF的异常表达与乳腺癌的预后密切相关。Tsutsui等[11]报道Ang2和VEGF阳性表达的乳腺癌病人的无病生存时间明显缩短。我们的结果显示Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌组的Ang2和VEGF阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌组，淋巴结转移阳性组的Ang2和VEGF阳性率明显高于淋巴结转移阴性组，提示癌细胞通过产生Ang2和VEGF促进微血管形成而使其容易完成淋巴结转移，有重要的预后意义。

    我们的实验发现Ang2和VEGF两指标的表达具有显著相关性(P<0.05)，与Tsutsui等[11]的结果一致。当VEGF存在时，Ang2可拮抗Ang1促血管结构稳定的作用，消除血管基底膜和管周细胞对血管形成的限制，并增加内皮细胞对VEGF的敏感性，有利于血管出芽和生长。当VEGF缺乏时，Ang2抑制Ang1则有利于血管的消退[2,12]。

    同时检测乳腺癌组织中Ang2和VEGF的表达，选择多靶点拮抗肿瘤血管生成，对乳腺癌的治疗及预后有重要意义。目前，抗VEGF抗体（bevacizumab）在治疗结直肠转移癌中取得了非凡疗效，这是癌症抗血管新生治疗所取得的重要进步，该药已由美国食品药品管理局(FDA)批准用于结直肠转移癌的治疗[13]。Oliner等［14］以Ang2抗体治疗荷瘤小鼠，发现肿瘤血管内皮细胞增生受到抑制，同时肿瘤亦明显缩小。由于Ang2主要存在于肿瘤相关的组织及成年女性的生殖系统，因此靶向性好，全身副作用小，有良好的应用前景。

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