益气养阴清热化痰中药复方调节肺癌恶病质细胞因子的研究

作者：史会昌    作者单位：221002 江苏徐州医学院肿瘤防治研究所 　　【摘要】  目的 研究益气养阴清热化痰中药对晚期肺癌恶病质小鼠治疗反应状况。方法 建立晚期Lewis肺癌动物模型，随机分为非荷瘤对照组、荷瘤对照组、中药组和甲羟孕酮组。浓缩中药溶液和甲羟孕酮(16mg/kg·d)于造模5天后出现恶病质后每日灌服0.2ml，对照组0.2ml生理盐水灌胃，连续8天。观察小鼠体重、饲料消耗量；免疫组织化学法检测肿瘤组织TNFα、IL6的表达。结果 （1）小鼠生存状态：体重和饲料消耗量，中药组和甲羟孕酮组与荷瘤对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；中药组和甲羟孕酮组之间差异无统计学意义（P>0.05）。（2）免疫组化检测肺癌组织：中药组和甲羟孕酮组TNFα和IL6表达较荷瘤对照组有不同程度减少（表现为灰度值增加），差异有统计学意义（P<0.05）。结论 益气养阴清热化痰中药对TNFα、IL6表达有不同程度的抑制作用，在改善Lewis肺癌恶病质小鼠的生活质量上与甲羟孕酮的作用相似。

　　【关键词】  恶病质 细胞因子（TNFα、IL6） 中药复方

　　恶病质是晚期肿瘤的常见综合征，严重影响病人生活质量，而且影响治疗方案的实施，降低化疗敏感性，增加治疗的难度和相关治疗并发症的发生[1,2]。如何控制晚期肺癌恶病质症状、改善生活质量，笔者运用益气清热养阴中药治疗晚期肺癌恶病质小鼠，收到较好的疗效，为临床提供一定的理论基础，现报道如下：

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物及癌株  C57BL/6近交系小鼠， 6～8周龄，雌雄各半, 体重平均(18±2)g。均购自徐州医学院动物中心。鼠源性Lewis肺癌细胞（LLC）购自中科院上海细胞库。

　　1.1.2  药品与试剂  中药复方（徐州广济连锁药店中药房）；甲羟孕酮（山东临汾云鹏药业有限公司）；TNFα和IL6免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。

　　1.2  方法

　　1.2.1  动物模型的建立  取新鲜Lewis肺癌癌块，剪碎研磨经400目滤网过滤，制成单细胞悬液，用生理盐水将悬液稀释成5×106个/ml癌细胞原液。将60只小鼠雌雄各半，随机分为四组，非荷瘤对照组（HC）、荷瘤对照组（NS）、中药治疗组（TCM）和甲羟孕酮组（MPA）。在小鼠腋前线第6肋间胸膜腔，每只接种0.2ml   Lewis肺癌细胞悬液（5×106个/ml）。非荷瘤对照组注射等量的生理盐水。约于造模5天后进入恶病质状态（体重明显下降，摄食活动减少）。给予治疗组每日分别灌服浓缩中药溶液(2.575g/ml)及甲羟孕酮（16mg/kg·d）各0.2ml，其余两组0.2ml生理盐水灌胃，连续8天。

　　1.2.2  观察指标  （1）小鼠生存状态：体重：在每日上午8∶00～10∶00测量每只小鼠的体重，精确到1/100g。饲料消耗量：每日上午8∶00～10∶00定量给予每组小鼠饲料，24h测量盒内剩余的饲料量，计算小鼠的饲料消耗量，精确到1/100g。饲料摄取量=前1天饲料量-次日饲料量。（2）TNFα和IL6的表达按免疫组织化学试剂盒检测。

　　1.3  统计学方法

　　用SPSS 11.5软件包处理，数据以±s表示，统计学采用方差分析和t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2  结果

　　2.1  小鼠生存状态

　　除非荷瘤对照组外其余各组小鼠均出现体重下降、摄食减少、恶病质状态明显，病程中小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、精神萎靡、毛发脱落。药物治疗后有好转。

　　2.1.1  体重  除非荷瘤对照组外，其他两组小鼠均出现不同程度的体重下降，生理盐水组体重下降尤其明显。通过药物治疗后，中药组、甲羟孕酮组与之相比较体重下降有统计学意义（P<0.05），中药组与甲羟孕酮组比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。表1  各组小鼠体重（克）(±s，n=15)

　　分组用药前第1天接种后第5天用药后第4天用药后第8天TCM19.38±0.7219.21±0.7719.95±1.2320.68±1.55*NS19.40±0.5819.14±0.4718.55±1.1118.16±1.57MPA19.39±0.5319.12±0.4720.02±0.4320.34±0.50*HC19.34±0.5320.12±0.4720.88±0.4321.89±0.50

　　注：TCM组、甲羟孕酮组与NS组比较 ：*P<0.052.1.2  饲料消耗量  除非荷瘤对照组外，其他两组小鼠均出现不同程度的消耗量下降，中药组、甲羟孕酮组消耗量下降不明显,与荷瘤对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

　　2.2  免疫组化

　　中药组、甲羟孕酮组TNFα和IL6表达有不同程度减少（表现为灰度值增加），与荷瘤对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。表2  各组小鼠饲料消耗(±s，n=15)注：中药组、甲羟孕酮组与荷瘤对照组(NS)比较：* P<0.05表3  各组中TNFα和IL6灰度值的表达 注：中药组、甲羟孕酮组与荷瘤对照组比较：* P<0.05

　　3  讨论

　　恶病质发生的确切机制目前仍不很清楚，但有充分证据显示TNFα和IL6等细胞因子的介导具有关键作用[2，3]。在动物模型和临床病人血液和组织中均可以检测到TNFα和 IL6等细胞因子水平的升高[3，4]。本实验研究结果与此相同。经中药治疗后，TNFα和 IL6的表达均下降，与生理盐水荷瘤对照组比较，差异有统计学意义。皮质类固醇是临床最常应用的药物，对恶性肿瘤病人可增强其食欲，但却不能因此而增加体重和使肌肉恢复。甲羟孕酮口服治疗恶病质自1987年开始应用于临床，其提高食欲增加体重的疗效得到了充分的肯定，本研究亦证实了这一点。根据肺癌恶病质的中医基本病理变化，组成以清热益气养阴为主的中药复方，重在调整肿瘤晚期阶段的免疫紊乱，增加小鼠T细胞亚群，显著提高机体免疫系统功能，达到提高宿主的生活质量[5，6]。中药复方以黄芪、紫灵芝、黄芩、桑白皮、葛根、全栝楼、沙参、麦冬等组成。方中黄芪、紫灵芝益气健脾，黄芩、桑白皮、葛根、全栝楼清肺润肺，沙参、麦冬润肺养阴。全方共奏益气养阴，清肺化痰之功效。本实验研究表明中药对改善小鼠生存状态有较好作用，与甲羟孕酮作用相似。我们期待进一步的临床研究证实。

　　【参考文献】　　［1］ O'Gorman P, McMillan DC, McArdle CS. Impact of weight loss, appetite, and the flammatory response on quality of life in gastrointestinal cancer patients[J]. Nutr Cancer，1998，32(2):7680.

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