Smac和Ki67在甲状腺癌中的表达和意义
发表时间：2010-02-09 浏览次数：479次
Smac和Ki67在甲状腺癌中的表达和意义作者：邓万凯，陈 健，郑红梅 作者单位：430079 武汉，湖北省肿瘤医院头颈外科 【摘要】 目的 观察Smac和Ki67在甲状腺癌中的表达，并探讨Smac表达与Ki67的关系及其临床意义。方法 应用免疫组织化学法检测87例甲状腺癌组织中Smac和Ki67的表达，分析Smac表达与临床病理因素和Ki67的关系。结果 Smac在甲状腺癌组织中的阳性表达率为71.3%（62/87），在所有的腺瘤旁组织中均见表达（20/20）；Ki67增殖指数为42.74±14.52。Smac在男性、年龄≥45岁、髓样癌和未分化癌、原发病灶超出包膜、以及Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期甲状腺癌患者中的表达明显降低（P＜0.05）。Smac阳性表达患者的Ki67增殖指数较Smac阴性表达者低［（40.70±14.68)vs(47.78±13.06)，P＜0.05］。结论 Smac和Ki67在甲状腺癌中的表达发生改变具有相关性，提示其可能在甲状腺癌的发生发展中发挥重要作用且两者可能具协同作用。 【关键词】 甲状腺癌； Smac；Ki67增殖指数；凋亡；增殖 Expression of Smac and Ki67 in Thyroid Carcinoma and Its Clinical Significance DENG Wankai,CHEN Jian,ZHENG Hongmei Department of Head and Neck Surgery,Hubei Cancer Hospital,Wuhan 430079,China Corresponding Author:CHEN Jian,Email:chenjian2003@yahoo.com.cnAbstract：Objective To investigate the expression of Smac and Ki67 in thyroid carcinoma and the correlation of Smac and Ki67,the clinical significance as well.Methods Immunohistochemical staining of Smac and Ki67 expression was performed by the standard streptavidinperoxidase(SP) technique for the paraffin sections of 87 thyroid carcinoma.The relationship between the Smac expression and the clincopathological parameters or Ki67 proliferation index was analyzed.Results The positive rate of Smac in thyroid carcinoma was 71.3%(62/87),all of the normal thyroid tissues expressed Smac(20/20).Ki67 proliferation index in thyroid carcinoma was 42.74±14.52.Smac expression was significantly lower in patients of male,over 45 years old,medullary and anaplastic thyroid carcinoma,stage Ⅱ,Ⅲ and Ⅳ,and in those with invasions over capsular(P＜0.05).The Ki67 proliferation index in negative expression of Smac was significantly higher than that in positive expression of Smac［(40.70±14.68)vs (47.78±13.06),P＜0.05］.Conclusion Smac and Ki67 expression in thyroid carcinoma were significantly different from those in normal tissues,and they had significant correlation,which suggest that they may play an important role or even have synergic action in carcinogenesis and development of thyroid carcinoma. Key words：Thyroid carcinoma; Smac; Ki67 proliferation index; Apoptosis; Cell proliferation 甲状腺癌是头颈部常见的恶性肿瘤，但在全身恶性肿瘤中的比例不到1%，好发于女性和青少年患者，有统计显示其在美国的发病率呈上升趋势[1]。Smac是王晓东等2000年在线粒体中发现的一种蛋白，可释放到胞浆中促进凋亡的发生[2]。Ki67是一种与增殖细胞相关的核抗原，与肿瘤的增殖、浸润、转移潜能和预后密切相关[3]。本文应用免疫组化SP法检测Smac和Ki67在甲状腺癌和腺瘤旁正常组织中的表达，探讨其在甲状腺癌发生发展中的作用及两者的相关性。1 资料和方法 1.1 资料 随机收集我院2004～2006年病理科存档的甲状腺癌标本87例，每例均有详细的临床病理资料，所有病例术前未进行放疗、化疗和免疫治疗。其中男23例，女64例，年龄11～73岁，平均年龄49.4岁。按病理类型分为：甲状腺乳头状癌71例，滤泡癌3例，髓样癌7例，未分化癌6例；根据淋巴结情况分为：有淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者39例；按2002年UICC第六版的TNM分期标准分为：Ⅰ期51例，Ⅱ期12例，Ⅲ期13例，Ⅳ期11例。另随机选取同期甲状腺腺瘤腺叶切除术后瘤旁至少0.5cm甲状腺组织标本20例作为对照。 1.2 试剂 鼠抗人Smac/Diablo单克隆抗体（Cell Signaling Technology，美国），兔抗人Ki67单克隆抗体（Lab Vision公司，美国），即用型SP试剂盒（北京中杉生物公司），DAB染色试剂盒（北京博奥森生物公司）等。 1.3 方法 87例患者手术切除标本存档的石蜡组织块，4μm连续切片，苏木精伊红染色。SP法检测甲状腺癌组织和腺瘤旁甲状腺组织Smac、Ki67的表达。方法简述如下：石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；柠檬酸缓冲液（pH6.0）95℃修复10min；3％H2O2室温孵育10min，磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗后滴加非免疫性动物血清室温孵育15min，加一抗（抗Smac抗体1∶200，抗Ki67抗体1∶100），4℃孵育过夜；PBS冲洗后滴加生物素标记二抗37℃孵育10min，辣根过氧化物酶标记抗生物素三抗37℃孵育15min,PBS冲洗后DAB显色，冲洗，苏木精复染，封片，显微镜观察并拍照。已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。 1.4 结果判定 （1）Smac染色的判断标准[4]：以胞浆染为淡黄至棕黄色定义为阳性细胞，随机选择5～10个高倍镜视野（×400），每个视野计数500个细胞，阳性细胞数超过30%的组织切片视为阳性标本。（2）Ki67增殖指数[3]：以胞核染为淡黄至棕黄色定义为阳性细胞，随机选择5～10个高倍镜（×400）视野进行计数，每个视野计数500个细胞，计算Ki67阳性细胞数占总细胞数的百分数，即为Ki67增殖指数。 1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，计量资料行t检验，计数资料行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 Smac和Ki67在甲状腺癌组织中的表达 Smac表达于细胞浆内，呈淡黄色至棕黄色分布，见图1a。87例甲状腺癌组织中阳性表达者62例，阳性率为71.3%，20例瘤旁正常组织均为阳性表达。两者差异有统计学意义（P＜0.05），即Smac在甲状腺癌中的表达较正常组织低。 Ki67表达于细胞核，呈淡黄色至棕黄色分布,见图1b。87例甲状腺癌组织中Ki67增殖指数为(42.74±14.52)，20例瘤旁正常组织少见Ki67表达。 2.2 Smac表达与临床病理指标的关系从表1可以看出，Smc表达与性别、年龄、病理类型、原发病灶和临床分期明显相关（P＜0.05），即Smac在男性、≥45岁、乳头状癌和滤泡癌、原发病灶超出包膜以及Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期甲状腺癌患者中的表达明显降低。表1 Smac表达与临床病理指标的关系 2.3 Smac和Ki67表达的关系 Smac阳性表达组Ki67增殖指数为(40.70±14.68)，Smac阴性表达组为(47.78±13.06)，两组经t检验差异有统计学意义（P＜0.05），即Ki67表达在Smac阳性表达组低。3 讨论 细胞凋亡和增殖的平衡是生物个体正常生长发育的基础，细胞增殖过度和(或)细胞凋亡受阻是肿瘤形成过程中的重要机制。Smac是近期发现的一种促凋亡蛋白，在凋亡信号刺激下与细胞色素C（cyt c）一同从线粒体中释放，可通过结合并活化apaf1以及结合并解除凋亡抑制蛋白（IAPs）对caspase3、7、9的抑制作用而发挥作用[2,4]。当前有研究利用Smac的促凋亡活性，构建载体过表达Smac增敏免疫制剂或化疗药物诱导的多种癌细胞的凋亡[45]。 Smac在癌组织中表达相关的文献已有报道，但鲜见其在甲状腺癌组织中的表达及其表达与各种临床病理特征的关系方面的文章。Yoo等[6]研究发现Smac在不同的癌或肉瘤组织中的表达各异，在多种癌和肉瘤组织中的表达下降甚至不表达。Bao等[7]采用RTPCR和SP法检测发现肝癌中Smac mRNA和Smac蛋白表达明显降低（约40%）。Mizutani等[5]证实Smac在肾细胞癌中的表达下降，且与分期相关，无Smac表达的患者预后更差；通过转染Smac cDNA至肾细胞癌细胞增强了TRAIL和顺铂介导的细胞毒作用。ArellanoLlamas等[8]研究发现Smac在宫颈腺癌的表达较宫颈鳞癌多，进一步分析发现Smac在局部复发的宫颈鳞癌患者中的表达较高，可作为预后指标。本研究证实71.3% (62/87)的甲状腺癌组织中Smac阳性表达，进一步分析表明Smac表达与性别、年龄、病理类型、原发病灶和临床分期明显相关，提示Smac表达可能在甲状腺癌的发生发展中发挥重要作用。Tirrò等[9]在进行甲状腺癌细胞对化疗药耐药机制的研究中发现，泰素作用48h后仍存活的甲状腺癌细胞中Smac表达下降，且仅有极少量的Smac从线粒体中释放出来，而过表达Smac可促进泰素的细胞毒作用，该项研究既证实了Smac的促凋亡作用，也对某些甲状腺癌患者的治疗提供了新的思路。 Ki67是当前研究较广泛的细胞增殖指标之一，参与肿瘤的发生发展，可表达于除G0期外的所有细胞周期时相中。Ki67表达与甲状腺癌组织关系的研究已有报道，但其意义尚未肯定。成继民等[10]研究发现Ki67在甲状腺癌组织中表达升高，与病理类型相关。Tisell等[3]研究发现Ki67在甲状腺髓样癌中表达升高，与患者有无转移、复发、年龄和预后密切相关。Mar等[11]认为Ki67在甲状腺滤泡状腺癌和滤泡状腺瘤表达并无差异，不足于帮助区分出有轻度包膜或血管侵犯的滤泡状腺癌。本研究发现Ki67在甲状腺癌组织中的增殖指数增高，且与Smac表达呈负相关，提示两者可能在甲状腺癌发生发展中可能具有协同作用。 综上所述，Smac在甲状腺癌组织中的表达下降，可能通过抑制IAPs的活性降低甲状腺癌细胞的凋亡，其与Ki67增殖指数增高可能具有协同作用，促进肿瘤的发生发展；且Smac表达下降与性别、年龄、病理类型、原发病灶和临床分期明显相关，检测其表达有助于判断其临床病理特征。【参考文献】［1］ Mitchell I,Livingston EH,Chang AY,et al.Trends in thyroid cancer demographics and surgical therapy in the United States[J].Surgery,2007,142(6): 823828.［2］ Du C,Fang M,Li Y,et al.Smac,a mitochondrial protein that promotes cytochrome cdependent caspase activation by eliminating IAP inhibition[J].Cell,2000,102(1): 3342.［3］ Tisell LE,Oden A,Muth A,et al.The Ki67 index a prognostic marker in medullary thyroid carcinoma[J].Br J Cancer,2003,89(11):20932097.［4］ Hasenjager A,Gillissen B,Muller A,et al.Smac induces cytochrome c release and apoptosis independently from Bax/BclxL in a strictly caspase3dependent manner in human carcinoma cells[J].Oncogene,2004,23(26):45234535.［5］ Mizutani Y,Nakanishi H,Yamamoto K,et al.Downregulation of Smac/DIABLO expression in renal cell carcinoma and its prognostic significance[J].J Clin Oncol,2005,23(3):448454.［6］ Yoo NJ,Kim HS,Kim SY,et al.Immunohistochemical analysis of Smac/DIABLO expression in human carcinomas and sarcomas[J].APMIS,2003,111(3):382388.［7］ Bao ST,Gui SQ,Lin MS.Relationship between expression of Smac and Survivin and apoptosis of primary hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2006,5(4):580583.［8］ ArellanoLlamas A,Garcia FJ,Perez D,et al.High Smac/DIABLO expression is associated with early local recurrence of cervical cancer[J].BMC Cancer,2006,6:256.［9］ Tirrò E,Consoli ML,Massimino M,et al.Altered expression of cIAP1,survivin,and Smac contributes to chemotherapy resistance in thyroid cancer cells[J].Cancer Res,2006,66(8):42634272.［10］成继民,贺占国,刘艳丽.CerbB2和Ki67在甲状腺肿瘤中的表达及临床意义[J].解放军医学杂志,2004,29(2):142143.［11］Mar CK,Eimoto T,Nagaya S,et al.Cell proliferation marker MCM2,but not Ki67,is helpful for distinguishing between minimally invasive follicular carcinoma and follicular adenoma of the thyroid[J].Histopathology,2006,48(7):801807.
