食管癌β连环蛋白、核因子κB的表达及意义

食管癌β连环蛋白、核因子κB的表达及意义作者：王蕾,刘惠民,梁 爽    【摘要】  目的 探讨βcat 和NFκB在食管癌组织中的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测78例食管癌和40例正常食管粘膜中βcat 和NFκB的表达情况。结果 βcat 在78例食管癌中的阳性率70.51%显著高于40例正常食管粘膜中的阳性率22.50%(P<0.05)。NFκB在78例食管癌中的阳性率58.97%显著高于40例正常食管粘膜中的阳性率15.00%(P<0.05)。βcat异常表达与食管癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)，NFκB的表达与肿瘤淋巴结转移、病理分期相关(P<0.05)。食管癌中βcat和NFκB的表达相关(P<0.05)。结论 βcat 和NFκB在食管癌中表达上调，两者可能共同参与了食管癌的转移，在食管癌的发生发展中起重要作用。    【关键词】  食管癌；βcat ；NFκB；转移    Expression of βcat and NFκB in Esophageal Carcinoma and Its Significance  WANG Lei,LIU Huimin,LIANG Shuang Department of Pathology,College of Medicine, Hebei University of Engineering,Handan 056029,ChinaAbstract：Objective   To study the expression of βcat and NFκB in human esophageal carcinoma and its significance.Methods  The expression of βcat and NFκB in 78 cases of esophageal carcinoma and 40 cases of normal esophageal were detected by immunohistochemical staining.Results  The positive expression rate of βcat in esophageal carcinoma was  70.51%,which was much higher than that in normal esophageal (22.50%)(P<0.05). The positive expression rate of NFκB in esophageal carcinoma was 58.87%,and which was  higher than that in normal esophageal  (15.00%)(P<0.05).The expression of βcat was closely correlated with the differentiation,TNM and lymph nodes metastasis(P<0.05),while NFκB positive staining was correlated with TNM and lymph nodes metastasis(P<0.05).The expression βcat and NFκB in esophageal carcinoma was correlated (P<0.05).Conclusion  βcat and NFκB is upregulated in esophageal carcinoma,both of them may play an important role in metastasis and proliferation during the occurance of esophageal carcinoma.    Key words：Esophageal carcinoma; βcat; NFκB; Metastasis     肿瘤的转移是一个复杂的过程,已知许多细胞间信息传递分子参与该过程,而近年来细胞内信号转导中的一些信号分子与肿瘤之间关系的发现使得该领域的研究更加活跃。本研究拟用免疫组化SP法检测人食管鳞状细胞癌中β连环蛋白（βcatenin，βcat）、核因子κB(nuclear factor kappa B， NFκB) 的表达，初步探讨两者与食管癌的临床病理关系。1  资料与方法    1.1  资料  收集2000～2006年在河北工程大学医学院病理学系进行病理检查的食管鳞状细胞癌石蜡包埋标本78例，所有病例根治性手术前均未行化疗或放疗。男53例，女25例。年龄39～79岁，平均年龄59.3岁，中位年龄58岁。淋巴结转移43例，非淋巴结转移35例。按WHO(1996)分类标准进行组织学分级：高分化24例，中分化24例，低分化30例。所有病例根据国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的TNM分期标准进行分期。另取胃镜检出的40例正常食管粘膜作为对照。    1.2  方法  (1)试剂：兔抗人NFκB p65多克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnolog，鼠抗人单克隆抗体βcat和即用型SP试剂盒均购自福州迈新公司。(2)步骤：采用免疫组化SP法，玻片经多聚赖氨酸行防脱片处理，微波抗原修复。染色过程按试剂盒说明操作。    1.3  结果判断  切片免疫组化染色以已知阳性的肺癌为阳性对照，以PBS代替一抗为阴性对照。染色均以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，两名病理医生在显微镜下计数10个高倍视野，按阳性细胞所占百分比并参考着色强度分级如下：（-）：阳性细胞数<10%；（+）：阳性细胞数10%～24%；（++）：阳性细胞数25%以上。    1.4  统计学方法  用SPSS10.0统计软件分析数据，采用χ2检验，检验水准α=0.05。2  结果    2.1  βcat、 NFκB在食管鳞状细胞癌中的表达  βcat阳性物质分布于细胞核或胞膜，NFκB阳性物质主要分布于胞浆。在78例食管癌中βcat、 NFκB阳性表达率显著高于正常食管粘膜（P<0.05），见表1。表1  食管癌和正常食管粘膜中βcat、 NFκB的表达    2.2  食管癌组织中βcat、 NFκB表达与临床病理指标之间的关系  βcat阳性表达与食管癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性（P<0.05），NFκB的阳性表达与肿瘤淋巴结转移、病理分期相关（P<0.05）。NFκB和βcat的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤的部位、大小无显著相关（P>0.05），见表2。表2  食管癌组织中βcat、 NFκB的表达与临床病理特征的关系    2.3  食管癌组织中βcat与 NFκB表达之间的关系  78例食管癌中βcat和NFκB共同阳性率为32.78%，均为阴性35.09%，βcat阳性、NFκB阴性为13.97%，NFκB阳性、βcat阴性为21.02%(χ2≈5.34，P<0.05），表明食管癌中βcat和NFκB的表达具有正相关性。3  讨论    在细胞内，βcat与cad胞内肽段结合形成复合体（cadherincatenin complex,ccc）。当βcat的酪氨酸磷酸化后即与ccc分离，游离的βcat作为信号转导分子参与Wnt信号通路。上皮钙黏蛋白(epithelialcadherin,Ecad)由于失去锚着连接，细胞黏附功能降低，导致细胞分散程度增加、移动加强和侵袭。部分βcat进入核内，与转录调控因子结合，使这些因子失去调控基因转录的作用，导致与细胞增殖有关的基因转录，使细胞过度增殖。因此，现在认为βcat是一种促癌因子［1］，它的功能异常是导致细胞向癌变方向发展的原因之一［23］。本研究发现βcat的表达与肿瘤的浸润深度、TNM 分期、分化程度及有无淋巴结转移有关。    核因子NFκB是具有多向性转录调节功能的核转录因子。当受到各种细胞外信号刺激时被激活，进入细胞核与靶基因上的特异性位点结合，发挥调节作用。田芳等［4］通过免疫细胞化学法和Western blot法发现，NFκB的亚单位p50、p65在食管鳞癌细胞系中的表达升高,并通过EMSA法证实了进入到核内的p50、p65具有与DNA结合并促进转录的能力。我们对78例食管癌石蜡标本研究发现NFκB在食管癌中的阳性率显著高于正常食管粘膜中的阳性率，且其表达与食管癌淋巴结转移相关，表明其参与了食管癌的发生发展。这与 Sasaki等［5］的研究相符。    已证明，糖原合成酶激酶3（GSK3）能使βcat磷酸化，同时 GSK3又是IκB激酶/IκBNFκB通路中的成员，能使某些蛋白因子泛素化而调节信号转导乃至细胞增殖。Wnt信号系统和NFκB信号系统通过GSK3进行了“交谈”［6］。本实验证实βcat与NFκB在食管癌组织中的表达有相关性。    总之，βcat与NFκB在食管癌中均过度表达且相关，两者可能在食管癌细胞转移上共同起作用，导致肿瘤细胞的转移。【参考文献】［1］ Peifer M.βcatenin as oncogene: the smoking gun[J].Science,1997,275(5307):17521753.［2］ Rimm DL,Caca K,Hu G,et al.Frequent nuclear/cytoplasmic localization of βcatenin without exon 3 mutation in malignant melanoma［J］.Am J Pathol,1999,154(2):325329.［3］ Chan TA,Wang ZH,Dang LH,et al.Targeted inactivation of CTNNB1 reveals unexpected effects of beta – catenin mutation[J].Proc Natl Acad Sci,USA,2002,99(12):82658270.［4］ 田芳,许培荣,侯卫红,等.NFκB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活[J].肿瘤防治研究,2006,33(1):1114.［5］ Sasaki N,Morisaki T,Hashizume K,et al.Nuclear factorkappaB p65 (RelA) transcription factor is constitutively activated in human gastric carcinoma [J].Clin Cancer Res,2001,7(12): 41364142.［6］ 黄华艺,查锡良.连环蛋白与肿瘤[J].中华病理学杂志,2000,29(3):227229.