恶性肿瘤患者治疗前后血清一氧化氮及内皮素
发表时间：2009-11-27 浏览次数：485次
恶性肿瘤患者治疗前后血清一氧化氮及内皮素作者：王翔军，赵安成 ［摘 要］ 目的：观察恶性肿瘤患者治疗前后血清一氧化氮(NO)、内皮素1(ET1)和血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平变化特点及临床意义。方法：血清NO的检测采用双抗体夹心ELISA法。结果：患者治疗前后血清NO、ET1水平均显著高于正常对照组(P＜0.01)，治疗前后相比差异有显著性(P<0．01)；患者治疗前后血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平均显著高于正常对照组(P<0．01)，治疗前后相比差异也有显著性(P<0．01)。结论：联合检测血清NO、ET1和血浆TNFα、sTNFR水平有利于疗效观察、指导治疗及预后判断，对肿瘤的筛选和诊断也有一定价值。 ［关键词］ 恶性肿瘤；一氧化氮；血清内皮素；肿瘤坏死因子；肿瘤坏死因子受体 一氧化氮(NO)作为一种重要的生物信使，在抗肿瘤免疫及促肿瘤生长、转移等方面有着双重作用［1］。NO主要参与机体正常生理活动，并具有细胞毒及免疫功能，是机体防御体系中的重要因子，尤其对肿瘤细胞的增殖、生长及死亡等方面影响较大。内皮素(ET)不仅是一种缩血管活性物质，而且具有多种生物学活性。1990年Ohkubo［2］发现，培养的人肾腺癌细胞能分泌ET2，表明其在肿瘤生长和分泌中起着重要的作用。以后许多研究表明，肿瘤细胞可产生内皮素1(ET1)，因而肿瘤患者的血中ET1的水平较高。肿瘤坏死因子(TNF)在机体的细胞免疫中具有重要的生物学作用，它可分为TNFα和TNFβ，其中TNFα起主要的生理学作用。相应的也有两种TNF受体(TNFR)，TNFR与细胞程序化死亡的诱导和信号传导有关［3］。血液中可和TNF结合并对TNF活性具有拮抗作用的蛋白称为可溶性TNF受体(sTNFR)，有sTNFRI和sTNFRII两种形式，分别对应与TNFα和TNFβ。sTNFR可与细胞表面的TNF受体(mTNFR)竞争而抑制TNF的生物活性。为了观察恶性肿瘤患者治疗前后血清NO、ET1和血浆TNFα、sTNFR水平变化，本研究采用硝酸还原酶法、放射免疫法及双抗体夹心ELISA法，对28例患者进行了血清NO、ET1和血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII的检测，旨在探讨其治疗前后水平变化特点及临床意义。1 材料与方法 1.1 研究对象 恶性肿瘤组：28例不同类型的恶性肿瘤患者均为本院住院患者，经影像学、B超、CT、胃镜及病理活检确诊。其中肝癌5例，胰腺癌1例，肺癌2例，乳腺癌5例，宫体腺癌3例，卵巢癌2例，大肠癌3例和胃癌7例，平均年龄(40.6±11.4)岁。正常对照组(NC)：30例均系本院健康工作人员，平均年龄(42.9±10.7)岁。 1.2 试剂及仪器 NO试剂盒由温州伊利康生物技术有限责任公司提供；ET1放免试剂盒为中国东亚免疫技术研究所产品；TNFα、sTNFRI、sTNFRII试剂盒均为深圳晶美生物工程有限公司产品；主要仪器：日立7170S全自动生化分析仪，西安262厂产2008T全自动γ计数仪，STAR IVD ELISA全自动酶免分析仪。 1.3 方法 检测方法：取受检者晨起肘静脉血液2份各3 ml，分离血清及血浆(EDTA抗清ET1的检测采用放射免疫检测法，严格按试剂盒说明操作；血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII的检测采用双抗体夹心ELISA法，严格按说明书操作，在酶标仪上选择波段，据待测样本的吸光度值在标准曲线上查出该标本的TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平对应值。治疗方法：手术后3个月；放疗0myx线60Gy/6周～70Gy/6周；化疗一个疗程(2个周期～3个周期)。统计学处理：检测结果均以±s表示，组间比较采用t检验。2 结果 2.1 28例恶性肿瘤患者治疗前后血清NO、ET1检测结果 见表1。 表1 28例恶性肿瘤患者治疗前后血清NO、ET1检测水平(略) 注：avs NCP＜0.01，b治疗前vs治疗后P＜0.01治疗前vs NC：NO(t=13.722，P＜0.01)，ET1(t=7.241，P＜0.01)；治疗后vs NC：NO(t=6.266，P＜0.01)，ET1(t=6.520，P＜0.01)；治疗前vs治疗后：NO(t=9.816，P＜0.01)，ET1(t=3.587，P＜0.01)。表中显示恶性肿瘤患者治疗前后血清NO、ET1水平，分别与NC组相比均显著性增高(P＜0.01)；治疗前后分别相比差异有显著性(P＜0.01)。 2.2 28例恶性肿瘤患者治疗前后血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII检测结果 见表2 表2 28例恶性肿瘤患者治疗前后TNFα、sTNFRI、sTNFRII后检测水平(略) 注：avs NC P＜0.01，b治疗前vs治疗后P＜0.01治疗前vs NC：TNFα(t=10.788，P＜0.01)，sTNFRI(t=11.719，P＜0.01)，sTNFRII(t=9.433，P＜0.01)；治疗后vs NC：TNFα(t=6.943，P＜0.01)，sTNFRI(t=10.685，P＜0.01)，sTNFRII(t=7.405，P＜0.01)；治疗前vs治疗后：TNFα(t=5.016，P＜0.01)，sTNFRI(t=5.617，P＜0.01)，sTNFRII(t=4.190，P＜0.01)；表中显示，恶性肿瘤患者治疗前后血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平与NC组相比均显著性增高(P＜0.01)；治疗前后分别相比差异有显著性(P＜0.01)。3 讨论 3.1 治疗前后血清NO、ET1水平与NC组比较 本研究结果显示，恶性肿瘤患者治疗前后血清NO、ET1水平与NC组分别相比差异均有显著性(P＜0.01)，NO、ET1处于高水平状态；治疗前后相比差异有显著性，治疗后NO、ET1仍高于正常人。NO是由一氧化氮合酶(NOS)利用L精氨酶(LArg)、氧和NADPH作为底物合成的。体内NO的合成不足或合成亢进均可导致疾病的产生［5］。本研究结果表明，NO参与了肿瘤的发生、发展，其升高可能与下述因素有关：NO为机体单核巨噬细胞抗肿瘤的主要机制，与肿瘤细胞共同培养时，诱导型NO合成酶(iNOS)被激活，NO合成增多［6］；可能与肿瘤负荷增大、内源性增多有关。恶性肿瘤患者血清NO浓度升高可能具有双重意义，高浓度时参与抗肿瘤免疫，促进肿瘤细胞死亡，低浓度时可促进血管生长与转移［1］。血清ET有三种类型，即ET1、ET2和ET3，本研究为ET1，其水平在治疗前后均显著高于NC组，且治疗后下降显著。ET与肿瘤的确切关系还不明确，ET可能是作为肿瘤细胞自分泌或旁分泌的生长因子参与肿瘤发生的过程。许多报道，基础量的NO能抑制血管收缩因子的反应，维持血管的舒张状态；基础量的ET具有强大的缩血管活性。两者具有拮抗作用，NO、ET1处于一种平衡状态。恶性肿瘤患者的这种平衡遭到破坏，而达到一处高水平状态。NO、ET1动态的失衡，可能促进了肿瘤的发生和发展。 3.2 治疗前后血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平与NC组比较 本研究结果显示，恶性肿瘤患者治疗前后血浆TNFα、sTNFRI、sTNFRII水平与NC组分别相比差异均有显著性(P＜0.01)，血浆TNF、sTNFR处于高水平状态；治疗前后相比也相差显著，治疗后血浆TNF、sTNFR水平仍高于正常人。TNFα主要由单核巨噬细胞和内皮细胞等产生，是具有多种生物活性的多肽调节因子，是机体免疫防御、炎症损伤、休克等发病的重要介质［7,8］。病理状态下，如肿瘤、感染、烧伤等，体内TNFα水平大都升高。适量的TNFα对机体有保护作用，过量时则对机体产生损伤作用。恶性肿瘤患者体内TNFα水平升高源于单核巨噬细胞的抗肿瘤作用与肿瘤内源性合成，TNFα能抑制肿瘤细胞，也可致炎症、细胞坏死、新血管和血栓的形成。TNF诱导的各种细胞反应是通过细胞表面两种特异性受体(mTNFRI、mTNFRII)相互作用而产生的。mTNFR可释放到血液中成为sTNFR，检测sTNFR的水平可作为推测淋巴细胞是否活化的指标［9］，静止期的T、B表面均不表达或很少表达TNFR，只有活化的T细胞、B细胞膜上才表达sTNFR。高浓度的sTNFR可抑制TNF活性，低浓度的sTNFR则可促进TNF的生物学活性。恶性肿瘤患者sTNFR继TNFα的升高而升高，其意义在于它可与血中TNFα结合而减少TNFα的活化。这是由于在肿瘤的发生发展中，sTNFR异常增多，减少了mTNFR的数量；同时还通过竞争性抑制TNFα与mTNFR结合，阻断其信号传导从而拮抗TNF的生物学作用。TNFα、sTNFR与其他细胞因子可构成复杂的免疫网络，参与了恶性肿瘤患者的病理生理过程。 3.3 NO、ET1、TNFα、sTNFR水平的相互关系 同时升高或降低，并且相互影响。当TNFα水平升高时能够诱导过量的NOS生成，可使血液中NO水平升高；TNFα水平升高时也可导致大量的ET产生；sTNFR水平也随TNFα的升高而增加。总之，本研究结果揭示了恶性肿瘤患者治疗前后体内NO、ET1、TNFα、sTNFR处于高水平状态，检测其水平变化有助于疗效观察和预后评估，也可作为恶性肿瘤的辅助诊断。参考文献： ［1］ Jenkins DS,Charles ic,Thomsen LL,et al.Roles of nitric oxide in tumor growth［J］.Proc Natl Acad Sei USA,1995,92：4392. ［2］ Ohkuo S,Itoh Y,Kimurac,et al.Nuclectide Seguence of a rabbit genomic DNA encoding mature endothelin3［J］.Nucleic Acids Res,1990,18(2)：374378. ［3］ Smith CA,Farreh T,Goodwin RG.The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins;activations costimulations nad deat［J］.Cell,1994,76：959. ［4］ 王明山，王贤理.NO检验方法的评价与临床意义［J］.中国检验医学与临床，2000，1(1)：48. ［5］ 杨克.NO与炎症及调节［J］.国外医学免疫学分册，1995，18(6)：305. ［6］ Moncada S,Palmer RMJ,Higgs EA.Nitricoxide,Physiology,Pathology and Pharmacology［J］.Pharmacol Rev,1991,43：109. ［7］ 孙永良，何南祥.TNF在感染性疾病诊断和治疗中的作用［J］.国外医学内科学分册，1992，19(1)：5. ［8］ 郝京生，贾东华，董玉环.TNF与感染性疾病［J］.国外医学微生物学分册，1995，18(1)：3. ［9］ 曹建平，姜志明，张晓晨，等.SLE患者sTNFR的水平及意见［J］.细胞与分子免疫学杂志，2000，16(4)：329331.
