膀胱尿路上皮癌组织中Ezrin和Ecadherin的表达
发表时间：2009-11-12 浏览次数：383次
膀胱尿路上皮癌组织中Ezrin和Ecadherin的表达作者：王安，王晓，王军，杨波，张伟 作者单位：(荣成市人民医院泌尿外科，山东 荣成 264300; 青岛大学医学院附属医院泌尿外科) 【摘要】 目的 检测埃兹蛋白（Ezrin）和钙黏素E(Ecadherin)在膀胱尿路上皮癌组织中的表达情况,探讨其与膀胱尿路上皮癌侵袭转移的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测80例膀胱尿路上皮癌病理组织切片中Ezrin和Ecadherin的表达。结果 在54例无转移的膀胱尿路上皮癌组织中28例Ezrin异常表达(51.85%)，在26例有转移的癌组织中20例(76.92%)Ezrin异常表达；在54例无转移的膀胱尿路上皮癌组织中22例(40.74%)Ecadherin异常表达,而在26例有转移的膀胱尿路上皮癌组织中18例(69.23%)Ecadherin异常表达。无转移的膀胱尿路上皮癌组织中二者异常表达均低于有转移者，差异有显著性(χ2=4.596、5.698,P<0.05)。Ezrin异常表达与Ecadherin异常表达呈显著的正相关性(r=0.898,P<0.05)。结论 Ezrin和Ecadherin与膀胱尿路上皮癌的浸润和转移密切相关,可以作为预测膀胱尿路上皮癌转移的重要肿瘤标志物。 【关键词】 膀胱肿瘤;埃兹蛋白;钙黏素E;肿瘤转移;肿瘤标记,生物学 埃兹蛋白（Ezrin）是ERM家族成员之一,通过连接细胞骨架和细胞膜,对细胞黏附、形态、分化、运动等起重要调节作用。近来研究表明，Ezrin可促进肿瘤转移[1,2]。Ezrin蛋白的C末端与细胞骨架的肌动蛋白相连,N末端则可通过与细胞表面黏附分子cadherin、CD44等连接,调节细胞细胞及细胞细胞外基质之间的黏附,从而影响肿瘤细胞侵袭性等生物学行为[3,4]。钙黏素E(Ecadherin)是一种钙依赖性的具有细胞与细胞黏附特征的黏附分子,在上皮细胞的细胞间连接中起重要作用。目前国内外大多数研究都侧重于Ecadherin在各系统恶性肿瘤侵袭及转移中的作用,而对Ezrin的异常表达在膀胱恶性肿瘤转移中的作用鲜有报道。本研究采用免疫组化法检测人膀胱尿路上皮癌组织中Ezrin和Ecadherin异常表达情况,旨在探讨它们在膀胱尿路上皮癌侵袭转移中的作用。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 标本 选取1995年1月～2006年12月青岛大学医学院附属医院泌尿外科手术切除并经病理证实为膀胱尿路上皮癌（BUC） 的肿瘤标本80例。80例膀胱癌病人中男64例, 女16例;年龄37～76岁,平均59.5岁。行 TURBt 术 28例,膀胱部分切除术42例, 膀胱全切术10例。肿瘤临床分期按TNM标准：Tis～T1者34例,T2～T4者46例。肿瘤病理分级按WHO分级标准：Ⅰ级18例,Ⅱ级28例,Ⅲ级 34例。就诊时有复发者22例。术后证实有淋巴结或局部转移者26例。正常对照组12例，包括良性前列腺增生症8例，输尿管囊肿3例，膀胱阴道瘘 1 例, 病人经膀胱手术时所取膀胱壁组织均经病理检查证实为正常膀胱黏膜组织。上述标本组织用40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,实验时连续切取厚 5、6 μm 的切片。 1.1.2 主要试剂 鼠抗人Ezrin(MS661)购自NeoMarkers公司,鼠抗人Ecadherin(ZM0092)、SP免疫组化超敏试剂盒和显色试剂盒(DAB kit)购自福建迈新生物技术公司。 1.2 方法 1.2.1 检测方法 按说明书步骤,采用免疫组化SP法染色。抗原修复采用微波法。以0.01 mol/L PBS液代替一抗作阴性对照,以Ezrin、Ecadherin蛋白阳性的正常膀胱黏膜组织作阳性对照。显微镜下随机选取5个视野,每个视野计数1 000个细胞。 1.2.2 免疫组化阳性结果判断 Ezrin阳性着色在膀胱尿路上皮癌细胞膜和细胞浆内,呈棕黄色颗粒,均一弥漫性分布。按染色强度和阳性表达细胞数,参考MATHEW等[5]分级标准: 无表达为（-）;阳性表达细胞<50%或染色较浅为（+）;阳性表达细胞≥50%且深染为（）。（）为异常表达。Ecadherin染色结果的判断标准:细胞膜出现黄色或棕黄色的细小颗粒着色为阳性细胞。参照GONZALEZ等[6]的判断标准,根据阳性细胞所占的百分率判断: 无着色为（-）;阳性细胞率<75%为（+）;阳性细胞率≥75%为（）。（）为表达正常；（+）～（-）为表达减弱或缺失，为异常表达。 1.2.3 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件包,采用卡方检验及Spearman等级相关分析。2 结果 2.1 Ezrin和Ecadherin在正常膀胱黏膜组织中的表达 在正常膀胱黏膜组织中,Ezrin和Ecadherin主要分布在膀胱黏膜上皮细胞胞膜,呈阳性棕黄色颗粒着色。Ezrin在正常膀胱黏膜组织中均为弱表达或表达缺失，钙黏素E在正常膀胱黏膜组织中均为强表达。 2.2 Ezrin在膀胱尿路上皮癌组织中的表达 Ezrin在部分膀胱尿路上皮癌组织胞膜中呈强阳性表达,也有部分在胞浆内呈弥漫性强阳性。在80例膀胱尿路上皮癌中有48例(60.00%)Ezrin异常表达,其中在54例无转移的癌组织中有28例(51.85%)异常表达,而在26例有淋巴结转移的膀胱尿路上皮癌组织中20例(76.92%)异常表达。Ezrin在无转移的膀胱尿路上皮癌组织中的异常表达率较有转移者明显减低,二者之间差异有显著性(χ2=4.596,P<0.05)。 2.3 Ecadherin在膀胱尿路上皮癌组织中的表达 与正常膀胱黏膜组织阳性对照比较，Ecadherin在膀胱尿路上皮癌细胞胞膜表达减弱,甚至缺失。在80例膀胱尿路上皮癌组织中,Ecadherin异常表达率为50.00%,其中在54例无转移的膀胱尿路上皮癌组织中异常表达率为40.74%(22/54),而在26例有淋巴结转移的膀胱尿路上皮癌组织中的异常表达率为69.23%(18/26)。Ecadherin在无转移的膀胱尿路上皮癌组织异常表达与有转移者比较亦明显降低，差异有显著意义(χ2=5.698,P<0.05)。 2.4 膀胱尿路上皮癌组织Ezrin表达与Ecadherin表达的关系 Ezrin在膀胱尿路上皮癌组织中高表达,在有淋巴结转移的原发癌灶中这种异常表达更明显,而Ecadherin在膀胱尿路上皮癌组织中表达减弱或者缺失。Ezrin在膀胱尿路上皮癌组织中的强阳性表达与Ecadhein的表达降低或缺失之间呈显著正相关关系(r=0.886,P<0.05)。3 讨论 侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征,是导致手术、放疗及化疗等治疗失败和病人死亡的最主要原因,也是一个极其复杂、多步骤的过程,包括癌细胞从原发部位脱落,结合并降解基底膜;癌细胞侵入血管、淋巴管;癌细胞在循环中运行和滞留;最后穿出血管、淋巴管并增殖形成转移灶。 研究表明,Ezrin在肿瘤的侵袭和转移中扮演重要角色[7,8]。Ezrin是ERM蛋白家族中研究较深入的细胞内骨架蛋白,通过其C、N末端分别与细胞骨架和细胞膜蛋白的结合,形成专门的膜区域结构,调节细胞活动如生存、黏附、迁移、侵袭,这些活动在肿瘤发展进程中都是非常重要的[9]。Ezrin可作为酪氨酸磷酸激酶的作用底物,在跨膜信号中发挥调节信号转导和细胞对信号的反应功能。KHANNA等[2]研究显示,促进细胞生存的MAPK和Akt的活性随着Ezrin的表达减少而降低。在肿瘤进程的晚期转移中,不是Akt而是MAPK途径增加了Ezrin低表达细胞的转移优势,这说明Ezrin可能调控多条信号通路来促进肿瘤转移。另外,YU等[1]研究显示,小GTP酶Rho和Ezrin相关的转移潜能有密切联系,通过影响细胞骨架肌动蛋白和细胞形,调控细胞的黏附和活动[8]。由此看出,Ezrin可能是多条信号通路的交叉点。Ezrin在不同组织中表达情况不一样。研究表明,Ezrin在前列腺癌和子宫内膜腺癌中表达高于其对应的良性病变,而在结肠癌中其表达低于正常组织[7,8]。本研究数据表明，Ezrin在膀胱尿路上皮癌中的表达明显高于良性病变,且有淋巴结转移者比无转移者更明显,两者差异有统计学意义,这说明Ezrin对膀胱尿路上皮癌发生淋巴转移有着重要的促进作用。 Ecadherin是钙依赖性细胞间连结的细胞黏附分子,它主要介导同种细胞间的黏附反应,并起细胞骨架作用,因此,它的表达程度及功能状态直接影响着肿瘤细胞的脱落和再附着。当Ecadherin活性正常时,肿瘤细胞就不易从原发灶上脱落,而Ecadherin失活则导致细胞间黏附作用下降和极性紊乱,促使肿瘤转移。本研究结果显示,Ecadherin在无转移的膀胱尿路上皮癌组织异常表达与有转移者比较明显降低,与有关研究结果一致[10]。 CHARPIN等[11]认为，Ecadherin作为一种钙黏蛋白介导的细胞黏附物质,在对乳癌侵袭与转移的影响上,可能仅作为一个非独立性因素而起作用,还存在其他更重要的因素。HISCOXS等[12]用免疫共沉淀方法研究显示,Ezrin和Ecadherin是结合在一起的；PUJUGUENT等[13]则报道，Ezrin可通过Rho蛋白调节Ecadherin在胞膜上的表达。这些研究表明，Ezrin可直接或间接与Ecadherin发生作用,从而参与调节细胞的黏附,其作用的分子机制还有待深入研究。 本研究观察到,Ezrin在膀胱尿路上皮癌组织中高表达,在有侵袭转移的原发癌灶中这种异常表达更明显,而Ecadherin在膀胱尿路上皮癌组织中表达减弱或者缺失,有局部侵袭转移者的异常表达率明显高于无侵袭转移者,两者之间呈显著的正相关。一方面,在机体正常情况下,Ezrin和Ecadherin发挥正常作用维持细胞形态;另一方面,随着肿瘤发生发展,Ezrin表达增强,致使肿瘤细胞运动能力增强,同时Ecadherin遭破坏,在细胞与细胞间的表达能力下降,导致细胞自肿瘤组织中脱落,进而引起肿瘤的转移[14]。这说明Ezrin和Ecadherin与膀胱尿路上皮癌的浸润和转移密切相关,可以作为预测膀胱尿路上皮癌侵袭转移的肿瘤标志物。【参考文献】 [1]YU Y, KUAN J, KHANNA C, et al. Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six1 as key metastatic regulators[J]. Nat Med, 2004,10(2):175256. [2]KHANNA C, WAN X, BOSE S, et al. The membranecytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis[J]. Nat Med, 2004,10(2):182188. [3]HUNT K W. Ezrin, a key component in tumor metastasis[J]. Trends Mol Med, 2004,10(5):201205. [4]CURTO M, MC CLATCHEY A I. Ezrin,a metastatic determinant [J]. Cancer Cell, 2004,5(2):113117. [5]MATHEW J, HINES J E, OBAFUNWA J O, et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas showing vascular invasion[J]. J Pathol, 1996,179(1):7483. [6]GONZALEA M A, PINDER S E, WENCYK P M, et al. An immunohistochemical examination of the expression of Ecadherin, α and β/γcatenins, and α2 and β1 integrins in invassive breast cancer[J]. J Pathol, 1999,187(5):523529. [7]MARTIN T A, HARRISON G, MANSEL R E, et al. The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis[J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2003,46(2):165186. [8]MCCLATCHEY A I. Merlin and ERM proteins: unappreciated roles in cancer development[J]. Cancer, 2003,3(11):877884. [9]BRETSCHER A, EDWARDS K, FEHON R G, et al. ERM proteins and merlin: integrators at the cell cortex[J]. Nature Rev Mol Cell Biol, 2002,3(8):586599. [10]宋振川,王桂兰,齐义新,等. MTS1及Ecadherin的表达与乳腺癌转移的关系[J]. 癌症, 2003,22(5):526528. [11]CHARPIN C, GARCIA S, BOUVIER C, et al. ECD quantitative immunohistochemistry assays in breast carcinomas[J]. J Pathol, 1997,181(3):294300. [12]HISCOXS, JIANG W G. Ezrin regulates cellcell and cellmatrix adhesion, a possible role with Ecadherin/bcatenin [J]. J Cell Sci, 1999,112(18):30813090. [13]PUJUGUENT P, DEL MAESTRO L, GAUTREAU A, et al. Ezrin regulates ECadherindependent adherens junction assembly through Rac1 activation[J]. Mol Biol Cell, 2003,14(5):21812191. [14]毛伟征,陈峻青,李玉军,等. 静脉浸润胃癌CD44v6, PKC及PCNA高表达与肝转移的关系[J]. 青岛大学医学院学报, 2002,38(2):149150.
