宫颈癌中P16蛋白的表达及意义
发表时间：2009-09-29 浏览次数：531次
宫颈癌中P16蛋白的表达及意义作者：张明瑛，袁超燕 作者单位：445000 湖北恩施, 湖北民族学院附属医院妇产科 【关键词】 P16蛋白; 宫颈癌; 免疫组化 宫颈癌是最常见的妇科三大恶性肿瘤之一，近年来发病率呈不断增高的趋势。宫颈癌的发病与多种基因的改变有关，其中，抑癌基因的失活在肿瘤发生过程中发挥了重要作用。P16基因是近年来发现的一个新型抑癌基因，研究发现其表达异常与人类多种肿瘤的发生发展有关[13]。本研究采用免疫组织化学法检测了P16蛋白在30例宫颈癌和20例正常宫颈组织中的表达情况，以期初步探讨P16蛋白在宫颈癌发生发展中的可能作用。1 资料与方法 1.1 资料来源 所有宫颈组织标本均来自于湖北民族学院附属医院2004～2007年手术切除的临床资料完整的石蜡包埋组织。正常宫颈组织20例，宫颈癌30例。宫颈癌患者年龄23～56岁，中位年龄43岁。鳞癌26例，腺癌4例。按WHO组织分化标准：高、中、低分化各6、9、15例。按FIGO分期标准：临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别有11、14、5例。伴有淋巴结转移的有14例,肌层浸润者15例。10例患者术前行新辅助化疗，所有宫颈癌患者术前均未接受过放疗。 1.2 免疫组化检测 P16蛋白检测采用SP法。4μm厚切片，脱蜡，酒精脱水，3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，抗原修复，加鼠抗人P16单克隆抗体（工作浓度：1∶50），37℃孵育1h，再加生物素化的兔抗鼠二抗即用型，37℃孵育30min后，DAB显色并适时终止，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片。 采用已知表达阳性的前列腺组织作为阳性对照，用PBS液代替一抗作为阴性对照。 1.3 结果判断标准 P16阳性细胞为胞核和(或)胞浆中出现棕黄色颗粒者，低倍镜下选取5处典型肿瘤部位，高倍镜下各计数100个癌细胞，计算5个高倍视野中的阳性癌细胞百分数，阳性细胞≥5%定义为P16蛋白阳性表达[4]。 1.4 统计学方法 采用SPSS11.5统计软件包进行χ2检验或Fisher’s 确切概率法检验。P<0.05为差异有统计学意义。α=0.05为检验水准（双侧）。2 结果 2.1 P16蛋白在正常宫颈组织和宫颈癌中的表达表1 不同宫颈组织中P16蛋白的表达情况正常宫颈组织中，P16蛋白表达阳性率为80%，而宫颈癌中其阳性率仅为36.67%。两者比较，P=0.003，差异有统计学意义，见表1，图1。 2.2 宫颈癌中P16蛋白表达与部分临床病理特征的关系，见表2 高、中、低分化的宫颈癌，P16蛋白的阳性表达率依次为66.67％、55.56％、13.33％，三组总体比表2 宫颈癌中P16蛋白表达的临床病理意义较，P16蛋白的表达水平存在差异（P＝0.009），进一步两两比较发现，高分化组与低分化组间P16蛋白表达阳性率的差异有统计学意义（Fisher确切概率: P＝0.006），高分化组中P16蛋白的阳性表达率明显高于低分化组。 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期宫颈癌，P16蛋白的阳性表达率分别54.55％、28.57％、20.00％，三组比较，差异无统计学意义。 15例宫颈间质深层浸润的宫颈癌中，2例阳性表达P16蛋白，15例宫颈间质浸润<1/2的宫颈癌中，9例阳性表达P16蛋白。经统计学检验，P=0.008，有统计学意义，说明P16蛋白的阳性表达与宫颈癌间质浸润深度间有相关性，同理，P16蛋白的阳性表达也与宫颈癌淋巴结转移间有相关性。3 讨论 P16基因也称为多种肿瘤抑制基因1（multiple tumor suppressor gene 1,MTS1）,它编码的蛋白通过与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的抑制剂，通过与CDK4,CDK6结合，导致Rb蛋白的去磷酸化，阻止细胞由G1期进入S期，从而减慢细胞周期，使细胞增殖停止[5]。本研究发现宫颈癌中P16蛋白的阳性表达率为36.67％，明显低于正常宫颈组织中的表达水平，提示宫颈癌中存在P16基因的缺失，P16蛋白的表达下调，可能与宫颈癌的发生有关。 低分化的宫颈癌，恶性程度高，侵袭能力更强，更容易发生宫颈间质深层的浸润和盆腔淋巴结的转移，预后也越差。细胞分化程度反应肿瘤的生物学行为，而盆腔淋巴结的转移则提示肿瘤的侵袭程度。本研究发现P16蛋白在低分化、宫颈间质深层浸润、伴有区域淋巴结组中的表达明显低于高分化、宫颈间质浅层浸润、无淋巴结转移组中的表达，提示P16蛋白的表达下调与宫颈癌的恶性生物学行为密切相关，可能在宫颈癌的进展中发挥一定的作用，并且与肿瘤的不良预后有关，有可能成为疾病进展或检测预后的一个候选指标。 近些年来，有关P16蛋白在宫颈癌中的研究日益增多， Queiroz C等[6]研究认为免疫组化测定P16表达能够帮助识别HPV阳性的细胞及有可能向高级别宫颈病变进展的病变。 Ekalaksananan T等[7]认为P16结合HPV的检测在识别需要早期干预治疗的宫颈癌高危人群方面有意义。由此可见，检测P16蛋白在宫颈癌中的表达有重要的临床意义和实用价值，日后有必要进一步开展此方面的研究。【参考文献】 ［1］ 李红梅，于月成，宋天保,等. 卵巢上皮癌中P16和P27基因的表达及其临床意义[J]. 第四军医大学学报, 2006，27（1）：3033. [2] 僧靖静，赵高峰，卫利民,等. 胃癌组织中P16和Rb蛋白的表达[J]. 郑州大学学报（医学版）, 2004，39（4）：590592. [3] 董玉英， 王洁， 董福生, 等. 颊癌P16及P53蛋白表达与临床病理的相关研究[J]. 现代口腔医学杂志, 2006， 20（5）： 519522. [4] 倪灿荣，马大烈，戴益民. 免疫组织化学实验技术及应用[M]. 北京：化学工业出版社, 2006：323. [5] Immunohistochemical Expression of P16(INK4A) in Normal Uterine Cervix, Nonneoplastic Epithelial Lesions, and Lowgrade Squamous Intraepithelial Lesions[J]. Low Genit Tract Dis, 2007, 11(2): 98104. [6] Queiroz C，Silva TC，Alves VA,et al. P16(INK4a) expression as a potential prognostic marker in cervical preneoplastic and neoplastic lesions[J].Pathol Res & Pract, 2006,202(2):7783. [7] Ekalaksananan T. Pientong C. Sriamporn S, et al. Usefulness of combining testing for P16 protein and human papillomavirus (HPV) in cervical carcinoma screening[J]. Gynecologic Oncology, 2006,103(1):6266.
