survivin、p27和cyclin D1在胃腺癌组织中的表达及其临床意义

作者:李鹏,杨桂芳

作者单位：温州医学院第一附属医院 病理科，浙江 温州 325000

   【摘要】  目的:探讨survivin、p27和cyclin D1在胃腺癌组织中的表达及其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法:用免疫组织化学S-P法检测73例胃腺癌及20例正常胃黏膜组织中survivin、p27和cyclin D1的表达情况。结果:①胃腺癌组织中survivin和cyclin D1蛋白表达阳性率分别为46.6%（34/73）和60.3%（44/73），明显高于它们在正常胃黏膜组织中的表达率0%（0/20）和25%（5/20）(P<0.01，P<0.01); p27在胃腺癌组织中蛋白表达阳性率为41.1%(30/73)，明显低于它在正常胃黏膜组织中的阳性表达率95.0%（19/20）(P<0.01)。②survivin、p27和cyclin D1均与胃腺癌组织分化程度无明显相关性（均P>0.05）;survivin与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈正相关(均P<0.05); p27与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈负相关(均P<0.01)；cyclin D1仅与胃腺癌的浸润深度相关（P<0.05）。③胃腺癌中survivin的阳性表达率与p27呈负相关(P<0.05)，而与cyclin D1的阳性表达率呈正相关(P<0.01); p27的阳性表达率与cyclin D1无明显相关性（P>0.05）。结论:survivin、p27和cyclin D1基因在胃腺癌的发生、发展中起着不同程度的作用；联合检测survivin、p27和cyclin D1可能对胃腺癌恶性程度的判定及胃腺癌的预后评估提供帮助，并对进一步治疗提供一定的依据。

【关键词】  胃腺癌 survivin；p27 细胞周期蛋白D1 免疫组织化学

    Expression of survivin，p27 and cyclin D1 in gastric adenocarcinoma and  its clinical significance  LI Peng*, YANG Gui-fang.* Department of Pathology, the Frist Affiliated Hospital of Wenzhou Medical college, Wenzhou，325000

    Abstract:  Objective: To investigate the protein expression of survivin, p27 and cyclinD1 in gastric adenocarcinoma and study the relationship between their expression and clinicolpathological features. Methods: Immunohistochemical method was used to analyze protein expression of survivin, p27 and cyclin D1 in paraffin embedded tissues from 73 cases of gastric adenocarcinoma and 20 cases of normal gastric mucosa tissues. Results:①The positive rate of survivin and cyclinD1 protein expression was 46.6%（34/73）and 60.3%（44/73）in gastric adenocarcinoma, higher than those in normal gastric mucosa tissues0%（0/20） and 25%（5/20）(P<0.01，P<0.01); The positive rate of p27 protein expression was 41.1%（30/73）in gastric adenocarcinoma, lower than that in normal gastric mucosa tissues 95.0%(19/20) (P<0.01); ②The expression of survivin, p27 and cyclinD1 all incorrelated with differentiated depth of gastric adenocarcinoma; The expression of survivin positively correlated with infiltrative depth, lymph node metastasis and clinicolpathological stage(P<0.01，P<0.01，P<0.01); The expression of p27 negatively correlated with infiltrative depth, lymph node metastasis and clinicopathologic stage(P<0.01，P<0.01，P<0.01); and the expression level of cyclin D1 only correlated with infiltrative deepness of gastric adenocareinoma (P<0.05). ③Significant relationships were found between survivin and p27 or cyclin D1(P<0.05，P<0.01), while no correlation was found between p27 and cyclin D1(P>0.05). Conclusion:The experiment suggest that survivin, p27 and cyclin D1 may play roles in the oncogenesis and progression of gastric adenocarcinoma, but to different extents, respectively. Combinated detection of Survivin, p27 and cyclin D1 may be helpful to judge malignancy and evaluate prognosis and treatment of gastric adenocarcinoma.

  Key words:   gastric adenocarcinoma; survivin; p27; cyclin D1; immunohistochemistry

    胃腺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展是一个多步骤、多阶段和多基因改变的过程。survivin为凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族的成员之一，其表达具有一定的肿瘤组织特异性，在多数肿瘤中存在高表达。 p27是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（cyclin dependent kinases inhibitors，CDKIS）家族中的一员，可通过抑制cyclin-CDK复合物的活性而抑制CDKs的活性，从而负性调节细胞周期，抑制细胞增殖。细胞周期素D1(cyclin D1)是细胞周期素D的一个重要亚型，其过度表达可导致细胞增殖失控，与多种肿瘤的发生和预后有关。目前在胃腺癌中survivin与p27的关系罕见报道，survivin与cyclin D1的关系国内外也少见报道。本研究用免疫组织化学方法检测胃腺癌组织中上述3个基因蛋白的表达，并进一步探讨这些蛋白表达与肿瘤临床病理特征之间的关系及它们之间的相互作用关系。

    1  材料和方法

    1.1  材料  选取武汉大学中南医院病理科档案材料中2001年至2005年间石蜡包埋胃腺癌标本73例，其中男52例，女21例，年龄24～82岁，平均（56.0±12.1）岁。据其分化程度分为：高分化17例，中分化27例，低分化29例。据其浸润深度分为：黏膜及黏膜下层15例，肌层及浆膜层58例。区域淋巴结转移38例，无转移35例。根据国际抗癌联盟（UICC）关于胃癌TNM分期分为：I期22例，II期16例，III期27例和IV期8例。所有患者术前均未接受放疗和化疗，均有完整的临床数据。另选择正常胃黏膜20例作为对照。

    1.2  方法  所有手术切除标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋后行4μm连续切片，每例均行苏木素-伊红(HE)染色和S-P法免疫组织化学染色，光镜观察。survivin即用型兔抗人抗体、p27和cyclin D1即用型鼠抗人抗体及S-P免疫组化试剂盒均购于福州迈新生物技术公司，S-P免疫组化染色按试剂盒说明书进行。所有切片均采用微波修复抗原，一抗置4 ℃冰箱湿盒内过夜，DAB显色。用已知阳性胃癌切片作阳性对照，用0.05%磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。

    1.3  结果判断  survivin阳性细胞为细胞浆或细胞核中出现棕黄色颗粒；p27和cyclin D1阳性细胞以细胞核中出现棕黄色颗粒为主，极少部分见于细胞浆。取10个高倍视野1000个细胞计数阳性细胞数。p27和cyclin D1均以阳性细胞<10%为阴性，≥10%为阳性；survivin以阳性细胞数≥5%为阳性。

    1.4  统计学处理方法  数据经SPSS 11.5统计软件处理，采用x2检验、Fisher确切概率检验。

    2  结果

    2.1  survivin、p27和cyclin D1在胃腺癌及正常胃黏膜组织中的表达  survivin和cyclin D1蛋白表达阳性率分别为46.6%（34/73）和60.3%（44/73），明显高于它们在正常胃黏膜组织中的表达率0%（0/20）和25%（5/20）(P<0.01，P<0.01); p27在胃腺癌组织中蛋白表达阳性率为41.1%(30/73)，明显低于它在正常胃黏膜组织中的阳性表达率95.0%（19/20）(P<0.01)（见图1～3）。

    2.2  survivin、p27和cyclin D1与胃腺癌临床病理特征的关系  survivin、p27和cyclin D1三者的表达率均与患者的年龄、性别及胃腺癌组织分化程度无明显相关性（均P>0.05）；survivin与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈正相关(均P<0.05)；p27与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈负相关(均P<0.01)；cyclin D1仅与胃腺癌的浸润深度相关（P<0.05）（见表1）。

 2.3  survivin、p27和cyclin D1在胃腺癌中的相关性分析  胃腺癌中survivin的阳性表达率与p27呈负相关(P<0.05)，而与cyclin D1的阳性表达率呈正相关(P<0.01)；p27的阳性表达率与cyclin D1无明显相关性（P>0.05）（见表2、表3）。

    3  讨论

    survivin是凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族的成员之一，其组织分布具有明显的细胞选择性，在终末分化的成人组织中不表达(胸腺、生殖腺除外)，但在大多数肿瘤组织中高表达[1-4]。由于survivin表达具有肿瘤组织特异性并与肿瘤发生、发展关系密切，因此其在恶性肿瘤的诊断与靶向性治疗中具有广阔的前景。本研究结果显示survivin在胃腺癌中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织（P<0.01），且survivin蛋白的高表达与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移状态及临床分期显著正相关，浸润深度越深、有淋巴结转移及临床分期越高，survivin蛋白的表达越高，此与Li等[5]研究结果基本一致，说明survivin在胃腺癌的发生、浸润及转移过程中均发挥着促进效应。检测survivin的蛋白表达对临床判断及预测胃腺癌生物学行为具有潜在价值。

    p27是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（cyclin dependent kinases inhibitors，CDKIS）家族中的一员，主要通过与CDK或cyclin-CDK复合物结合，抑制其活性，从而控制细胞G1/S的转变，抑制细胞增殖。倪耀忠等[6]研究发现，p27在胃癌组织中的表达明显降低，且随着癌旁组织不典型增生程度加重其表达强度明显减弱。本研究结果也显示，胃腺癌组织中p27的阳性表达率明显低于正常胃黏膜组织，提示p27低表达与胃腺癌的发生密切相关。对p27与胃腺癌临床病理特征关系的分析还发现，p27的低表达多见于浸润深度深，有淋巴结转移及临床分期高的病例，提示p27在胃腺癌的进展及转移中也扮演重要角色。p27蛋白减少可作为肿瘤恶性程度高的一个指标，检测p27蛋白的表达对临床预测胃腺癌的生物学行为也有一定的价值。

    cyclin D是一组控制真核细胞周期进展的重要蛋白分子，cyclin D1是其一个重要亚型。cyclin D1可结合细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-depen-dent kinase 4，CDK4）形成复合物cyclin D1-CDK4，使Rb蛋白磷酸化，解除Rb基因调控 G期停滞的作用，使细胞周期从G1期进入S期。cyclin D1过表达可加速细胞周期进展，甚至使细胞向恶性转化。本研究显示cyclin D1在胃腺癌中的表达率明显高于在正常胃组织中的表达率(P<0.01)，提示cyclin D1基因在胃癌发生过程中起促进作用。我们的研究还显示浸润深度深的胃腺癌组织cyclin D1蛋白表达高，提示cyclin D1过表达也可能参与了胃腺癌的发展过程。

    恶性肿瘤的发生、发展不仅表现为细胞增殖过强，而且与细胞凋亡减弱密切相关；细胞的癌变是多个基因表达共同协作的结果。我们的研究显示在胃腺癌组织中survivin表达阳性组p27的阳性表达率较阴性组明显降低，两者表达呈明显负相关(P<0.05)。吴清明等[7]研究小组关于p27基因转移对食管癌细胞生存素表达和端粒酶活性的影响研究中亦有类似发现。我们的研究也显示在胃腺癌组织中survivin与cyclin D1表达呈明显正相关(P<0.05)。survivin具有细胞周期依赖性表达的特性，Gonway等[8]证实处于S期及G2期细胞survivin mRNA分别提高6.2倍及40倍，说明survivin主要在S/G2期以后表达；p27可通过抑制cyclin-CDK复合物的活性负性调节细胞周期，使细胞产生G1阻滞，导致survivin表达下降；而cyclin D1能解除G1期停滞的作用，使细胞周期从G1期进入S期，上调survivin表达，这可能是p27及cyclin D1调节survivin表达的主要原因。此外，我们也分析了胃腺癌组织中p27与cyclin D1表达之间的关系，发现两者之间并无明显相关性（P>0.05），此结果是否提示p27与cyclin D1可能通过不同的途径参与胃腺癌的发生、发展过程，有待我们扩大样本量进行更深入的研究。

  综上所述，survivin、p27和cyclin D1在胃腺癌的发生、发展过程中起着不同程度的作用。p27基因失活或缺失及cyclin D1基因的激活导致survivin表达上调可能是促进胃腺癌发生、发展的重要途径。联合检测survivin、p27和cyclin D1可能对胃腺癌恶性程度的判定及胃腺癌的预后评估提供帮助，并对进一步治疗提供一定的依据。

【参考文献】  [1] Lehner R,Enomoto T,McGregor JA,et a1.Correlation of survivin mRNA detection with histologic diagnosis in normal endometrium and endometrial carcinoma[J].Acta Obstet Gynecol Scand,2002,8l(2):l62-l67.

[2] 李全红,姚嘉斐,胡淑敏,等．Survivin、P2 l WAFl/CIPl及 Cyclin Dl蛋白表达及与早期宫颈癌复发的关系[J]. 中国癌症杂志,2003,l3(6):495-499.

[3] Schultz IJ,Kiemeney LA,W illems JL,et a1.Survivin and MKI67 mRNA expression in bladder washings of patients with superficial urothelial cell carcinoma corelate with tumor stage and grade but do not predict tumor recurence[J].Clin Chem,2006,52(7):l440-l442.

[4] 褚文炎, 黄冠成, 李伟华. survivin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与bcl-2,bax表达的相关性[J]. 温州医学院学报,2007, 37(4):369-371.

[5] Li YH, Wang C, Meng K, et al. Influence of survivin and caspase-3 on cell apoptosis and prognosis in gastric carcinoma[J]. World J Gastroenterol, 2004,10(13):1984-1988.

[6] 倪耀忠, 姚钰, 张学淼,等. P27kipl在胃癌与癌旁黏膜中的 表达及意义[J]. 温州医学院学报,2002,32(03):96-97.

[7] 吴清明,张卫国,童强,等. p27kip1基因转移对食管癌细胞生存 素表达和端粒酶活性的影响[J]. 胃肠病学,2006,11(1):37-40.

[8] Conway EM, Pollefeyt S, Cornelissen J, et al. Three differen- tially expressed survivin cDNA variants encode proteins with distinct antiapoptotic functions[J]. Blood,2000,95(4):1435-1442.