子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN蛋白的表达

作者:庞朗,韦毓,冯秀英

作者单位：广西柳州市妇幼保健院病理科，广西柳州545001

        【摘要】  目的 探讨子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN蛋白表达的关系。方法 采用免疫组化SP法检测正常子宫内膜、内膜增生、不典型性增生和子宫内膜样腺癌组织中PTEN蛋白的表达。结果 不典型性增生和子宫内膜样腺癌组中PTEN蛋白阳性表达率分别为50.00%、45.46%，两组中PTEN阳性表达均低于正常子宫内膜和子宫内膜增生组（P<0.01）。癌组中PTEN阳性表达的缺失与组织学分级（P<0.01）、肌层浸润深度或伴有转移（P<0.05）及临床分期（P<0.01）有关，肿瘤的复发与PTEN的表达缺失有关（P<0.05）。结论 PTEN表达缺失涉及了子宫内膜样腺癌的发生、发展过程，并与肿瘤的复发密切有关，检测PTEN可作为子宫内膜样腺癌的早期诊断、判断肿瘤生物学行为的一个指标。

【关键词】  癌 子宫内膜样；免疫组织化学 PTEN

　　Expressions of PTEN protein in endometrial adenocarcinoma and lesion tissues of precancers

　　PANG Lang, WEI Yu, FENG Xiu-ying

　　Department of Pathology, Liuzhou Maternity and Infant Health Institue, Liuzhou, Guangxi 545001, China

    Abstract:  Objective  To investigate the expressions of PTEN protein in endometrial adenocarcinoma and lesion tissues of precancers.  Methods  An immunohistochemistry SP method was used to detect the expressions of PTEN protein in normal endometrium tissues, endometrial hyperplasia tissues, atypical endometrial hyperplasia tissues and endometrial adenocarcinoma tissues.  Results  The positive expression of PTEN protein in atypical hyperplasia and endometrial adenocarcinoma groups were 50.00% and 45.46%, respectively. The positive expressions of PTEN in the two groups were lower than those in the normal endometrium and endometrial hyperplasia groups (P<0.01). In adenocarcinoma group, the loss of PTEN expression was associated with the histological classification (P<0.01), depth of skin invasiveness or metastasis (P<0.05) and clinical stage (P<0.01). The relapse of tumors is related to the loss of PTEN expression (P<0.05).  Conclusion  The loss of PTEN expression is involved in the genesis and development of endometrial adenocarcinoma, and is associated positively with the relapse of tumors. PTEN can be used as a marker for early diagnosis of endometrial adenocarcinoma and prediction for tumor biological behavior.      　　Key words:  carcinoma, endometrioid; immunohistochemistry; PTEN

    肿瘤的本质在于细胞周期调节机制失控，导致细胞异常增殖所致，PTEN作为编码具有磷酸酶活性产物的抑癌基因对细胞周期G1期的负调控起着关键的作用。我们采用免疫组化技术检测子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN蛋白，旨在探讨PTEN表达异常在子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征之间的相互关系，为临床早期诊断、治疗和评价预后提供依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  病例来源

　　选自广西柳州市妇幼保健院病理科1996年6月～2002年6月的子宫内膜病变标本，全部病例均经病理诊断证实。病理诊断、分类参照WHO的分类标准进行［1］。其中子宫内膜增生组30例（18例为单纯性，12例为复杂性），年龄40.7±8.5岁；子宫内膜不典型性增生组20例，年龄45.6±9.8岁；子宫内膜样腺癌组55例，年龄50.3±10.3岁。另取因其他妇科疾病而手术切除的30例正常子宫内膜标本为对照组，年龄35±12.6岁。选择的对象均无术前激素替代治疗及放、化疗史。癌组术后组织学分级、分期按FIGO（1988）标准［2］，其中Ⅰ级27例，Ⅱ级20例，Ⅲ级8例。55例癌组病例随访至2006年8月，随访45例，随访率81.81%，10例失访，随访45例中11例肿瘤复发（24.44%）。

1.2  方法

　　免疫组化染色采用SP法。PTEN多克隆抗体，稀释度为1∶50。试剂与SP试剂盒均购于北京中杉生物公司。操作按说明书进行，切片均经EDTA（pH 9.0）作微波抗原修复，以PBS取替一抗作阴性对照，用已知正常子宫内膜PTEN阳性组织切片作阳性对照。

　　1.3  结果判断

　　每张切片随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞。PTEN正常阳性表达定位于胞质，10%以上瘤细胞胞质出现棕黄色颗粒为阳性标记；<10%或无着色者为阴性。

　　1.4  统计学处理方法

　　计数资料采用χ2检验，用SPSS10.0统计软件包进行处理。

　　2  结果

　　2.1  PTEN蛋白在各组中的表达

　　PTEN在各组中的表达情况见表1。结果显示：PTEN蛋白在正常子宫内膜组织中均为阳性表达，从正常子宫内膜－子宫内膜增生－不典型性增生－子宫内膜样腺癌，PTEN的阳性表达率呈逐渐下降的趋势(χ2=42.30，P<0.01)。不典型性增生组和癌组之间PTEN蛋白的表达均高于正常子宫内膜组和子宫内膜增生组，差异有高度显著性（P均<0.01）。不典型性增生组和癌组之间PTEN蛋白的表达差异无显著性（χ2=0.12，P>0.05）。表1  PTEN在各组中的表达 (略)

　　2.2  PTEN蛋白的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系

　　PTEN的表达随着子宫内膜样腺癌组织学从高分化向低分化进展，其阳性表达率逐渐下降，PTEN的阳性表达缺失与组织学分级（P<0.01）、子宫肌层浸润程度和淋巴结转移有关（P<0.05）。在临床分期中，Ⅰ期与Ⅱ～Ⅳ期相比差异有高度显著性（P<0.01）。在45例癌组随访病例中，肿瘤复发者与PTEN蛋白的表达缺失密切有关（P<0.05），见表2。表2  癌组中临床病理参数与PTEN表达的关系  (略)

　　3  讨论

    已知在细胞增殖信号传导中，活化的PI3K可将PIP2磷酸化成磷脂酰肌醇3,4,5- 三磷酸（PIP3），PIP3本身或进一步激活整合素相连激酶（ILK），促使PKB/Akt磷酸化。PTEN作为磷脂酰肌醇（PI）三磷酸酶，通过拮抗PI3K信号导致PIP3的肌醇环中D3位点的去磷酸化并由此灭活下游信号，从而抑制PIP3/Akt（PKB）信号传导途径。而在细胞粘连依赖信号中，PTEN通过其脂质磷酸酶活性调节FAK和Shc的磷酸化而影响细胞的粘连和迁移，抑制肿瘤细胞的浸润和转移。目前认为在肿瘤细胞形成的六项基本要素：逃逸凋亡、足够的自生生长信号、对抗生长信号不敏感、促进血管生长、浸润和转移和持续复制电位中，PIP3信号至少涉及此六项中前五种信号的调节。已知在G1中期，Cyclin E作为CDK2的正调控因子，与CDK2形成Cyclin E-CDK2激酶复合物，在CDC25A等的参与下活化，具有磷酸化NO23/B2蛋白、触发中心粒复制等多项重要功能［3］。而PTEN可促使p27与Cyclin E-CDK2复合物结合，从而显著抑制CDK2的活性并下调RB蛋白磷酸化水平从而介导G1期负调控细胞增殖［4］。此调节机理表明PTEN表达缺失或下降与细胞异常增殖、癌变的发生和肿瘤的转移和浸润密切相关。PTEN肿瘤抑癌基因的杂合性丢失和突变在子宫内膜样癌中已被证实是一个常见的事件［5］，探讨PTEN功能的改变是否先于子宫内膜样腺癌在癌前病变中出现以及在癌中作为一个临床评价预后的指标对于早期诊断和指导临床治疗是十分重要的。

    本组研究结果证实，随着正常子宫内膜、内膜增生、内膜不典型性增生到子宫内膜样腺癌病变演变过程的进展，PTEN蛋白的阳性表达率逐渐下降（P<0.01）。与从良性进展到癌前病变进而发展到恶性这样一个疾病的自然进展演变过程相一致，这种表达模式提示PTEN的正常表达是内膜腺上皮细胞正常分化调控中的关键调控因子之一，在子宫内膜样腺癌中的发生过程中PTEN蛋白表达的缺失是一个早期的事件并可在癌前病变中被检测出。癌组中PTEN蛋白的表达水平与组织学分级及浸润程度、转移和临床分期密切有关，提示PTEN的表达下降使得PTEN功能丧失，将促使内膜腺上皮细胞向肿瘤细胞转化，PTEN对细胞生长的负调控及对细胞凋亡、粘附和移动的控制减弱，进而促进细胞癌变的发生和肿瘤组织具有的侵袭和转移的能力［6,7］。

 综上所述，PTEN具有抑制子宫内膜上皮过度增生进而抑制癌变发生的作用，在子宫内膜癌前病变和子宫内膜样腺癌中检测PTEN蛋白，可作为临床早期判断子宫内膜不典型性增生病变的发展趋势，评价肿瘤预后的免疫学指标，并为今后临床开展PTEN靶向免疫、基因治疗提供帮助。

【参考文献】  　　［1］曹泽毅.中华妇产科学［M］.北京：人民卫生出版社，2004：2121-2124.

　　［2］顾美皎.临床妇产科学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：911.

　　［3］Montagnoli A, Fiore F, Eytan E, et al. Ubiquitination of p27 regulated by Cdk-dependent phosphorylation and trimeric complex formation ［J］. Genes Dev, 1999，13（19）：1181-1189.

　　［4］Cheney IW, Neutboom ST, Vaillancourt MT, et al. Adenovirus-mediated gene transfer of MMACI/PTEN in glioblastoma cells inhihits S phase entry by the recruitment of p27kipi into cyclinE/CDK2 complexes ［J］. Cancer Res, 1999,59(2)：2318-2323.

　　［5］Mutter GL, Lin MC, Fitzgerald JT, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial precancers ［J］. Natl Cancer Inst,2000,92(11)：924-930.

　　［6］Salvesen HB, Stefansson I, Kalvenes MB, et al. Loss of PTEN expression is associated with metastatic disease in patients with endometrial carcinoma ［J］. Cancer, 2002,94(8)：2185-2191.

　　［7］Tachibana M, Shibakita M, Ohno S, et al. Expression and prognostic significance of PTEN product protein in patients with esophageal squamous cell carcinoma ［J］. Cancer,2002,94（7）：1955-1960.