涎腺肿瘤中p53蛋白和血管内皮生长因子的表达及意义

    作者：刘蔚,陈林林,刘 勇，马行健，胡翰青    作者单位：南昌，解放军第九四医院口腔科;2.南昌大学口腔医院颌面外科;3.江西省人民医院病理科

    【关键词】  涎腺肿瘤; p53;血管内皮生长因子;免疫组织化学

     涎腺肿瘤是口腔颌面部除牙源性肿瘤以外的另一类特征性肿瘤，是危害人类健康的一大类疾病，临床上尚缺少早期判断肿瘤性质和评估预后的指标。近期有关p53和VEGF与涎腺肿瘤关系的研究也有一些报道，但存在分歧。本研究通过免疫组织化学方法检测54例涎腺良恶性肿瘤标本p53蛋白、VEGF的表达，探讨二者与涎腺肿瘤生物学特性的关系及其表达的临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  研究资料

    组织标本来源：选取南昌大学口腔医院和中国人民解放军九四医院颌面外科2000～2005年手术切除的涎腺肿瘤组织标本54例，术前均未经放疗或化疗，均具有完整病例资料。性别情况：男性21例，女性33例。年龄状况：6～74岁，平均45岁。组织学类型：多形性腺瘤18例、粘液表皮样癌18例、腺样囊性癌18例。

    1.2  方法

    采用SP法免疫组织化学方法。鼠抗人p53单克隆抗体、兔抗人VEGF多克隆抗体、免疫组化SP试剂盒、免疫组化酶底物显色剂DAB kit均购自北京中杉生物技术有限公司。每种抗体均设阳性及阴性对照。采用已知的乳腺癌组织切片作为阳性对照片。用PBS缓冲液代替一抗作为空白对照。

    1.3  结果判断

    p53以细胞核染色呈棕黄色为阳性细胞，VEGF以细胞浆或细胞膜内有棕黄色颗粒为阳性，均随机计数5个高倍视野，计数100个细胞的阳性细胞数。结合染色强度和阳性细胞百分比数综合评分。染色强度评分：基本未着色、染色与背景相似者为0分；着色浅、略高于背景者为1分；着色中度、明显高于背景者为2分；强染、着色深棕者为3分。阳性细胞百分率：无阳性染色肿瘤细胞为0分，≤25％为1分，26％～50％为2分，>50％为3分。两项计分相加，0～1分为阴性，大于2分为免疫反应阳性；其中2～3分为（+），大于4分为（++）。

    1.4  统计学方法

    所有数据处理采用SPSS12.0统计软件进行统计分析。计量资料用t检验、计数资料用卡方检验，不满足条件时用Fisher精确概率法。双变量等级资料的分析采用等级相关分析。所有检验水准均为0.05。

    2  结果

    2.1  免疫组化标记显示p53阳性信号主要位于细胞核，呈现棕色颗粒，胞浆不着色；VEGF阳性信号主要位于胞浆，呈现棕色颗粒，见图1～5。不同性质涎腺肿瘤VEGF、p53的表达见表1。由表1可知，多形性腺瘤与粘液表皮样癌、多形性腺瘤与腺样囊性癌中p53、VEGF的表达差异有统计学意义（P<0.05），粘液表皮样癌与腺样囊性癌中两者差异无统计学意义（P>0.05）。表1  不同性质涎腺肿瘤的p53、VEGF表达比较图1  腺样囊性癌中p53的阳性表达（SP×400）  图2  黏液表皮样癌中p53的阳性表达（SP×400）  图3  多形性腺瘤中VEGF的阳性表达（SP×400)  图4  腺样囊性癌中VEGF的阳性表达（SP×400）  图5  黏液表皮样癌中VEGF的阳性表达（SP×400）

    2.2  p53、VEGF与两种涎腺恶性肿瘤临床病理的关系。由表2可见不同肿瘤大小、不同肿瘤部位之间p53、VEGF差异无统计学意义（P>0.05）。而p53、VEGF在早期组（TNMⅠⅡ期）和晚期组（TNMⅢⅣ期）涎腺恶性肿瘤中差异有统计学意义（P<0.05）；且在有淋巴结或远处转移组中p53、VEGF表达显著高于无转移组(P<0.05)。表2  两种涎腺恶性肿瘤的VEGF、p53 与临床病理因素的关系

　　3  讨论

    3.1  VEGF表达与涎腺肿瘤

    目前普遍认为VEGF是作用最强的血管形成促进因子之一 [1]。VEGF及其家族成员在肿瘤血管生成及其他的生理、病理的血管生成中都是必不可少的诱导因子。资料表明在许多肿瘤组织中VEGF具有较高水平的表达，且与肿瘤预后密切相关[2，3]。高仕俊[4]等认为VEGF在ACC的亚型、侵袭及转移中发挥重要作用，可以作为临床预防复发、转移的一种检测手段。

    VEGF在本实验54例标本中有不同程度表达（0～ 96％）。本组实验显示腺样囊性癌与粘液表皮样癌中VEGF的表达显著高于涎腺多形性腺瘤。而两组涎腺恶性肿瘤中VEGF的表达与肿瘤的部位、大小无关, 淋巴结或远处转移阳性组中VEGF的表达显著高于阴性组，TNM分期晚期组显著高于早期组。提示VEGF的高表达与涎腺肿瘤的发生发展密切相关。

    3.2  p53与涎腺肿瘤

    p53基因有野生型和突变型两种存在方式，其中野生型p53是一种抑癌基因，它能引起细胞周期阻滞，诱导凋亡，促进分化，可降低突变细胞的发生几率。p53基因同时又是人类肿瘤中最常发生突变的基因，p53基因突变后表现为肿瘤抑制功能的丧失和致癌功能的获得。野生型p53蛋白半衰期短且在正常细胞中含量低，用一般的免疫组织化学方法难以检测出来。而p53基因突变后，半衰期明显延长，且稳定性增强。因此，一般通过免疫组化方法检出p53基因表达，即表示有基因突变[6]。

    近年来的许多研究发现，p53基因突变与涎腺肿瘤的发生发展有关[7、8]。本组实验表明，涎腺肿瘤中一般良性病变（多形性腺瘤）组织p53不表达，而两种恶性肿瘤（腺样囊性癌、粘液表皮样癌）中p53的阳性表达率分别为50％和38.9％，高于多形性腺瘤（P<0.05）。研究同时显示两种涎腺恶性肿瘤中，p53的表达与肿瘤的部位、大小无关，而在区域或远处转移阳性组p53的表达显著高于阴性组，临床分期晚期组显著高于早期组。提示p53的高表达与涎腺肿瘤的发生发展、转移（淋巴结或远处）密切相关，可作为判断涎腺肿瘤预后的参考指标。

    3.3  p53、VEGF在涎腺肿瘤的相互关系

    在本实验中，p53表达水平随着VEGF表达程度的增高而增加，两者呈显著正相关。这些结果说明突变型p53的表达在涎腺肿瘤血管生成过程中具有重要意义，在VEGF介导的肿瘤血管形成中起协同作用。提示p53基因可能通过VEGF调节血管形成过程。Pal S等[9]研究证明野生型p53能够与SP1转录因子形成复合体，阻止SP1与VEGF启动子结合，从而抑制VEGF转录激活，下调VEGF表达，抑制血管生成，突变型p53则无此作用。本组实验结果从免疫组化水平支持上述观点。但亦有研究发现肿瘤p53蛋白表达与VEGF表达之间没有相关性，这显然与病例的选择有一定关系，也提示肿瘤血管生成除p53基因外还可能有其他肿瘤基因的调控，包括一些原癌基因和抗癌基因以及激素、生长因子、细胞因子的调节，而表现为多因素参与的复杂生化过程，有待于进一步研究阐明。

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[3] 郭仁德.血管内皮生长因子与肿瘤的研究进展[J].医学综述，2002，8（2）：6870.

[4] 高仕俊,杨小玲.32例涎腺腺样囊性癌病理学与血管内皮细胞生长因子表达的关系[J].肿瘤防治研究，2001，28（4）：276277.

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[9] Pal S,Datta K,Mukhopadhyay D.Central role of p53 on regulation of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor(VPF/VEGF) expression in mammary carcinoma[J].Cancer Res,2001,61(18):69526957.