上皮间质转化相关基因在口腔鳞癌中的相关性及其与临床病理特征的关系研究

口腔鳞状细胞癌COSCC)是口腔领面部最常见的恶性肿瘤，鳞癌晚期患者的5年生存率很低，死因多头肿瘤的复发和转移。肿瘤上皮一间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)是一个复杂的过程，包括上皮细胞极性丧失、细胞骨架结构重建、获得间质细胞表型使其侵袭和迁移能力增强，在肿瘤的演进中起重要作用，其中E-c;ad缺失是其主要标志}'}oSlug和Snail是调控肿瘤EMT的重要转录因子，通过与E-cad的启动了结合抑制其转录LzJ。肿痛的EMT需要降解细胞外基质(CECM)，基质金属蛋自酶}MMPs)2,9能有效降解ECM,叫一使血管和淋巴管荃底膜降解，促进肿瘤的侵袭和转移。本研究采用免疫组化}h法检测}7例口腔鳞癌中E-cad,MMl'2,9和Snail,Slug的表达及其意义。材料和方法1标本来源收集内蒙占医科人学附属医院2005--2009年U腔鳞状纸咆癌石蜡包埋组织57例(术前均未做过任何治疗)，男42例，女15例;生龄38}8I岁，平均58.5岁;其中原位癌24例，浸润癌33例(高分化14例、中分化11例、低分化8例);经颈淋巴结清扫术证实伴淋巴结转移者13例，无淋巴结转移者20例:标本均经有经验的病理医师阅片后确诊。对照组为正常日腔翁膜组织10佰}，均取自囊肿旁及牙槽骨整形手术时切除的正常薪膜组织。其中男4例，女6例;年龄23-67岁，平均40.7岁2主要试剂MMP-2单克隆抗体(}匕京中杉金桥生物技术有限公司)，Snail,Slug多克隆抗体(武汉博奥森生物利技有限公司)。h}-cad,ib1M1'-9单克隆抗体、S-P超敏试剂盒,DAB显色剂(福州迈新生物技术开发有限公司)。3实验方法免疫组化SP法标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋常规切片。操作按SP试剂盒说明书进行。己知阳性片做阳性对照,PBS代替一抗作阻哇对照。4结果判定方法染色部位:E-cad为膜着色，Snail,Slug为核或浆着色，MMP-2,MMP-9浆着色。①按染色强度计分:0分为无色，1分为淡黄色}2分为棕黄色，3分为棕褐色;②按阳性细胞所占的百分比例计分:光镜下任取5个高倍视野(X400)进行细胞计数，至少计数200个细胞，0分为阴性，1分为阳性细胞}10%,2分为阳性细胞数11%}50%a}3分为阳性细胞51%}75%a}4分为阳性细胞)75%。当染色强度和阳性细胞百分比的乘积)3，记为免疫反应阳性，否则为阴性5统计学方法采用SPSS13.0软件进行统计分析，采用行x列表x'检验:E-Cad与Snail,Slug,MMP-2,MMP-9者之间的相互关系采用四格表相关分析，以。=0.05作为检验水准，P<0.05有统计学意义。结果1 E-cad表达与曰腔鳞癌临床病理特征的关系口腔鳞癌组1},-cad}‘日性表达率低于对照组，差异具有显著性(x2=12.973尸<0.05);口腔高、中、低分化鳞ate.病例其阳性率分别为42.86070,45.45%.12.50%，差异有显著性(x'-=6.311,P<0.05)淋巴结转移病例阳性表达率为15.38，无转移病例为45.00，二者相比差异有显著性(xZ=4.547}P<0.05)o浸润癌病例阳性表达率为36.36}/0，原位癌病例为66.67%，二者相比有显著性差异(x'-=5.105}P<0.05)提示h}-cad的表达与分化程度及侵袭、颈淋巴结转移有关(图1、表1)。2 Snail}Slu。表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系对照组Snail.Slug的阳性表达率分别为40.00%,30.00u腔鳞癌组Snail,Slug阳性表达率分别为75.43%,82.46%，显著高于对照组(x2Snail=S.l02}P<0.05;x}Slug=12.303}P<0.05)oSnail,Slug}}b'h表达与分化程度无关CP>0.05);Snail的阳性表达与口腔鳞癌的浸润和转移无关CP>0.05);Slug阳性表达率在浸润癌病例和淋巴结转移病例高于原位癌和无淋巴结转移病例，差异有ov著性(x==5.076}x2=4.080}P<0.05)(图2，表1)。3 11MP-9表达与口腔鳞}却lm床病理特征的关系w照组\1}1P-2,LIMP-9的」粉性表达率各为20.00%,30.00%，口腔鳞癌组阳性表达率各为71.93%,78.95%，差异具有显著性(xzNIMP-2=9.797,x2MMP-9=10.033,P<0.05)oMMP-2,b1MP-9阳J胜表达与口腔鳞癌的分化程度无关(P>0.05),MMP-2.MMP-9在浸润病例的阳性表达率分别为78.79%,75.76%，原位癌病例为41.67%,45.83%，差异具有显著性Cx=MMP-2=8.229,x`M'-VIP-9=4.138,P<0.05)oMMP-2.MMP-9在转移病例的阳性表达率高于无转移病例，二者相比差异具有显著性(xzMMP-2=6.346,xZMMP-9=5.192,P<0.05}(图3，表1)。4 E-cad与Snail.Slu:和MMP-2,MMP-9之间相关性分析口腔鳞癌中E-cad的表达与Snai},Slug的表达均呈负相关Cr=-0.71,r-=-0.62,P<0.05)9与TVINiP-2的表达无柑性Cr=-0.36,P>0.05)，与VI11MP-9的表达呈负相关(P<0.05}(表2)。讨论1局部浸润和远处转移是导致口腔鳞癌生存率低的主要因素，EiVIT现象是鳞癌浸润和转移的关键-步，它是上皮细胞获得间质表型成成纤维样特性时出现的暂时的、可逆的生物学过程，}:=ca<1一卜调是其最主要的标志。E-cad是一种与细胞间粘附密切相关的钙依赖糖蛋白，)’一泛分布于土皮细胞膜表面，其主要功能是保持细胞间勃附、维持细胞极性和组织结构的完整性。已有研究表明在日腔鳞癌进展过程}},E-cad表达下调会导致肿瘤细胞间载附减弱，使其从良性、非侵袭J胜向恶性、侵袭性表型转化厂3-,-E-f.ad的表达与肿瘤的分化程度密切相关+.r,。本研究亦显示E一。ad在不同红}_织学分级的鳞癌表达不同;在侵袭和转移病例中，E-cad的表达急剧下降，提示E-cad表达降低使I.J腔鳞癌细胞更容易发生侵袭甚至转移，说明E-cad在抑制口腔鳞癌的侵袭和转移过程中起重要作用，可能成为预示口腔鳞癌预后的重要标记物。本研究中也显小部分侵袭转移病例并无E-cad表达的完全缺失，甚至无缺失。提示这些肿瘤的进展存在其它机制。2Snail家族是一类锌转录因子，包括Snaii1,Snail2CSlug)，能促进EMT的发生，在恶性肿瘤进展中发挥重要作用〔s-iol。它通过与E-cad启动子区的E-hox结合，下调E-cad表达。体外转染Snail使I-I腔鳞癌细胞系SCC-9高表达，能诱导EMT的发生「"};Cox-2通过影响NF-KB和Snail通路调控胃癌中E-cad的表达水平‘21;Slug和1}}'-KB可抑制肺非小细胞癌中E-cad的表达并增高Ulna}n}ln的表达[131。在本组病例观察到Snail}Slug在不同分化程度的口腔鳞癌之间阳性表达率无显著性差异;Snail的阳性表达在转移病例和无转移病例间无显著性差异，提示Snail一可能参与E'_VIT的起始过程;Slug在淋巴结转移病例和浸润癌病例的阳性率明显高于无转移病例与原位癌病例，表明Slug表达的升高可促进口腔鳞癌的转移，Slug可能是维持EMT的重要因子。本研究结果还显示Snail,Slug与E-cad的表达呈负相关，提示三者在口腔鳞癌EMT的发生中共同发挥作用。3MMPs是一类Zn'+和Caz+依赖的内源性蛋自水解酶，是降解和破坏EC1VT和基底膜的重要囚子。MMP-}9在口腔鳞癌侵袭转移中所发挥的作用已被多项研究证实[14-16]。正常情况下MM,P-2,9都在细胞质中表达，本研究中MMP-2,9在细胞核与细胞质都有表达，虽然有研究发现MMP-2在细胞核中的表达网，但MMPs在细胞核中的表达不被人们所重视，MMP-2,9在细胞核中的表达提示其可能通过另一种作用方式来促进口腔鳞癌的发展。本组研究中MMP-Z,9在淋巴结转移病例和浸润癌病例的阳性率明显高于无转移病例与无浸润病例，说明MMP-2,9和口腔鳞癌浸润转移中起着促进作用。但在与E-cad的相关性分析研究中发现MMP-9与E-cad的表达呈负相关，MMP-2与11;-cad的表达相关性不大，提示MMP-2可能通过其它机制调控口腔鳞癌EVI}h的发生。4肿瘤的侵袭转移是多因素相互作用、共同参与的结果。木组实验发现E-cad与Snail.Slug.MMP-},T}}l111P-9在h腔鳞愿的授袭和转移过程中存在相互调节机制，但确切调节机制尚需进一步研究，联合检测E-cad,Snail,Slug.MMP-2.MMP-9对预测口腔鳞癌的生物学行为和预后判断有较大的参考价值。参考文献Kaur G,carnelio S,Rao N,et al Expression of E cadherin in primary oral squam。 us ceIl ()arcin。ma and metastatic lymph nodes:an im-munohl乩0chemical stLldyEJ] Indlan J Dem Res,2009,20(1):71-76