牙周炎患者口腔中的幽门螺杆菌

作者：高静 李毅 王庆才 万光勇 孙新六 李晓光    作者单位：泰安市中心医院，山东 泰安 271000

【摘要】  目的 初步探讨牙周炎患者口腔中的幽门螺杆菌（helicobacter pylori, Hp）与牙周炎的关系。方法 依据Hp特异的尿素酶C和cagA基因设计引物，建立PCR方法。检测37例牙周炎患者口腔中的Hp，同时设立牙周健康对照组，比较两组的检测结果。结果 尿素酶C基因在牙周炎组的阳性率为64.8%，健康组为38.5%；尿素酶C基因和cagA基因共同阳性率在牙周炎组为32.4%，健康组为7.7%；两组差异有统计学意义；且轻型牙周炎患者口腔Hp阳性率低于中、重型患者。龈下菌班Hp阳性率高于龈上菌班。结论 口腔是Hp的一个重要聚积地，Hp与牙周炎有相关性。

【关键词】  幽门螺杆菌 聚合酶链反应 牙周炎

　　Helicobacter pylori in mouths of patients with periodontitis

　　GAO Jing, LI Yi, WANG Qingcai，WAN Guangyong, SUN Xinliu， LI Xiaoguang

　　(Taian Central Hospital, Taian 271000，China)

　　Abstract： Objective: To investigate the relationship between Helicobacter pylori (Hp) and periodontitis. Methods: A polymerase chain reaction (PCR) assay with oligonucleotide primers homologous to a portion of the urease C and cytotoxinassociated gene A (cagA) of Hp was used to test for the presence of Hp in dental plaque. Thirtyseven patients with periodontitis and 38 healthy persons were studied to compare the results of the two groups. Results: In the periodontitis group, 64.8%of the tested samples was ureasc gene positive, and 32.4% was positive for both urease C and cagA genes. In healthy persons, 38.5% of the tested samples was urease C gene positive and 7.7% was positive for both urease C and cagA genes. There was a significantly difference between the two groups (P<0.01). The Hppositive rate of the major periodontitis was enhanced obviously to minor peciodontitis. The Hppositive rate of subgingival plaque was significantly higher than that of supragingival plague. Conclusion: These results suggest that oral cavity is an ecological micle of Hp.    　　Key words: Helicobacter pylori; periodontitis; polymerase chain reaction

　　1989年Krajden等［1］从口腔中首次成功分离出Hp，口腔作为Hp感染的第二个可能的聚集地引起人们的关注［2，3］。牙周炎是口腔科最常见的慢性疾病，是造成成年人丧失牙齿和老年人全口无牙的最主要原因。其病因十分复杂，牙菌斑是其最重要的致病因素，但牙菌斑中是否存在Hp，以及Hp是否与牙周炎的发病有关系，目前的研究报道很少，本研究旨在分析口腔Hp与牙周炎的关系，从而尝试为诊治牙周炎提供一条新的途径。

　　1  对象和方法

　　1．1  病例选择    　　选自泰安中心医院口腔科就诊的患者，分为牙周炎组和牙周健康组。诊断标准均按照卫生部规划教材《牙周病学》第2版所述进行诊断。牙周炎组37例，男20例，女17例，平均43岁（22～62岁），健康组39例，男21例，女18例，平均39岁（25～57岁）。两组研究对象均符合以下条件：①无重要系统性疾病；②3个月内未服用抗生素；③12个月内未接受牙周治疗；④全口牙不少于24个。

　　1．2  方法

　　1．2．1  取样和检查  从每位患者牙列的6个区段各取一个牙位，每人6个取样牙，以棉球隔湿，吹干后分别用消毒刮匙刮取龈上、龈下菌斑共12份标本，置于盛有无菌生理盐水的尖嘴离心管内，-40 ℃保存。

　　1．2．2  PCR试剂［宝生物工程（大连）有限公司］。

　　1．2．3  提取DNA  标本悬浮于100 μl样本处理液中，56 ℃孵育30 min,高速震荡10 s后置100 ℃水浴8分钟，再次高速震荡10 s，离心（12000 r/min,4 ℃）3 min。取上清用于PCR扩增。

　　1．2．4  PCR检测Hp  参考Bickley,Lage等的研究，引物根据尿素酶C基因和cagA基因进行设计。    　　尿素酶C基因：

　　引物1（UC1）5'GCC，AAT，AAA，TTA，GTT3'引物2（UC2）5'CTC，CTT，AAT，TGT，TTT，TAC3'    　　预期扩增片段为294 bp    　　cagA基因

　　引物1  5'AAT，ACA，CCA，ACG，CCT，AG3'

　　引物2  5'TTA，TTG，CCG，CTT，TTG，CTC，TC3'    　　预期扩增片段为400bp    　　20 μl反应体系内含有两对引物各20 pmol/L，每种寡核酸4 mmol/人，DNA模板4 μl,Tag DNA聚合酶2U及PCR缓冲液，反应在PCR扩增仪（美国PE公司）上进行，94 ℃预变性5 min,94 ℃变性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸2 min为一个循环，共计35循环，循环结束后72 ℃继续延伸7 min，以Hp标准标NCTC11637（中国预防科学院提供）的DNA提取液作阳性对照，采用PCR试剂盒内的阴性对照，用8%丙烯酰胺电泳鉴定PCR产物。每一位受检者12份牙菌斑中只要有1份Hp阳性，则该受检者口腔Hp检测结果统计为阳性。

　　1．2．5  统计学处理  使用SPSS10.0统计软件，各组间样本检出率的比较用卡方检验。

　　2  结果

　　2．1  牙周炎患者和牙周健康者口腔Hp的检出，结果见表1。由表发现，牙周炎组Hp感染阳性率明显高于对照组（P<0.01）。

　　表1  两组牙菌斑中Hp的PCR检测结果（略）

　　注：PCR：聚合酶链反应；U（+）：尿素酶C基因阳性；U+C（+）：尿素酶C基因及CagA基因均阳性。

　　2．2  龈上、龈下菌斑中Hp的分布    　　结果见表2，可看出龈下菌斑中Hp的检出率显著高于龈上菌斑（P<0.05）。

　　表2  Hp在龈上龈下菌斑的分布（略）

　　注：龈下菌斑显著高于龈上菌斑，P<0.01

　　2．3  各型牙周炎患者菌斑中Hp的检出率    　　结果见表3，轻度牙周炎患者Hp的阳性率为41.7%，中度牙周炎为76.5%，重度牙周炎为75%，各型牙周炎间Hp检出率有差异。

　　表3  各型牙周炎Hp的检出率（略）　　　3  讨论    　　Hp是公认的慢性活动性胃炎的致病菌，是消化性溃疡的重要致病因子，是胃癌发生的高危因子［4，5］。随着Hp在牙菌斑中不断地发现［6，7］，有人发现口腔疾病与胃肠疾病关系密切，因而怀疑Hp可能参与到某些口腔疾病的发生发展过程中。由于口腔与消化道在解剖生理学上的密切联系，Hp与牙周炎等一些口腔疾病的关系一直是热门话题。非胃病病人是否为Hp的携带者，其口腔中是否同样存在Hp，许多研究检测出人的口腔中存在Hp，其检测率从0～100%不等，检测结果差别很大，如Mgmadar等［8］从健康人菌斑中分离培养出Hp（100%），而且Mapstone等［9］报道的结果为23.8%，胡文杰等［10］报道胃病患者牙菌斑Hp阳性率为28.87%，无消化道症状牙周炎患者的菌斑中Hp的检出率为49.2%。我们的研究发现无消化道症状牙周炎患者的菌斑中Hp的检出率为49.2%，高于牙周健康对照组的14.3%。由此可见，口腔可能是人体Hp的第二个重要贮存地。

　　另外，口腔内环境的变化可能直接影响口腔内Hp的分布和孳生状态。有关资料显示牙周炎患者龈下菌斑Hp检出率为60%，高于牙周健康者，由此提示牙周组织破坏，牙周内环境变化除降低口腔抵抗外力外，还可能是Hp孳生的原因之一。Hp是一种微需氧的革兰氏阴性兼性或专性厌氧菌，菌斑中有可能黏附于龈沟和牙周袋内组织表面，由于牙周袋内氧化—还原电势很低，龈沟液内蛋白酶增加等均有利于革兰氏阴性兼性或专性厌氧菌生长，致龈下菌斑数量急剧增加，菌斑的生态学和菌斑的发酵产酸及适宜的温度均有利于Hp的生长。    　　目前有关菌斑中Hp的检出与局限牙周状况的关系的报道很少。胡文杰［10］等发现牙菌斑中Hp的存在与牙周袋深度和炎症状况有关，从受检者多个存在炎症、中等深度的牙周袋处取样有可能提高Hp的检出率，本文做了更加详细的分析，将轻度、中度和重度牙周炎菌斑Hp的阳性率做了比较，发现轻度牙周炎与中度、重度牙周炎患者的Hp检出的阳性率之间有显著性差异(P＜0.01)。结果提示Hp感染与炎症的程度和活动性正相关，表明Hp感染与牙周炎有着直接关系，Hp的致病机制，在牙周病的发生和发展中起何作用，有待进一步研究。    　　综上所述，龈沟和牙周袋是适于Hp定植和生长的微生态环境，非胃炎患者口腔中有检出的Hp可能是口腔常驻菌，而非胃内返流到口腔的细菌。

【参考文献】   　［1］ Krajdens, FuksaM, Anderson J, et al. Examination of human stomach biopsies, saliva, and dental plaque for compy lobacter pylori［J］. J Chin Microbiol, 1989, 27(6):13971398.

　　［2］ ShanKaran K, DesaiHG. Helicobacter pytori indental plaque［J］. J Clin Castroentrerol, 1995, 21: 8284.

　　［3］ Nguyen AM, ElZaatari A, Graham DY. Helicobacter pjylori in the oral cavity. A critical review of the literature［J］. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod， 1995, 79: 705709.

　　［4］ Warren JR, Marshall BI. Unidentified curved bacilli on gastric epitheliumin active chronic gastritis［J］. Lancet, 1983, 1:12731275.

　　［5］ David A. The report of the Digestive Health Internaional update conference on Helicobacter pylori［M］. Gastroenterology, 1997, 113: S4S8.

　　［6］ Mapstone NP, Lynch DAF, Axon ATR, et al. The detection of Helicohacter pylovi in faces by Polymerase chain reaction［J］. Ir J Med Sci, 1992, 161:S29.

　　［7］ ShamesB, Krajdens, fuksaM, et al. Evidence for the occurrence of the same strain of compylori in the stomach and dental plaque［J］. J Clin Microhiol, 1989, 27:2849.

　　［8］ Majmudar P, Shah SM, DhuajibHpy KR, et al. Incidence of helicohacter pylori from human faeces［J］. Lancet, 1992, 340:11945.

　　［9］ Mapstone Np, Lynch DAF, LewisfA, et al. Identification of helicobacter pylori DNA in the mouths and stomachs of patients with gastritis using PCR［J］. J Chin Pathol， 1993, 46: 540543.

　　［10］ 胡文杰，曹采方，孟焕新，等．牙周炎及胃病患者牙菌斑中的幽门螺杆菌［J］．中华口腔医学杂志，1999,34（1）：4951.