两种实用脱位牙保存介质的效果比较

　　作者：田松波 刘艳萍 陈惠珍 张英怀 李会英 　　作者单位：050000 石家庄市，河北医科大学第二医院口腔科

　　【摘要】 　　目的 探讨2种保存介质及不同时间保存脱位牙对牙周膜细胞活性的影响。方法 采用正畸拔除的第1、2双尖牙共130颗，每组10颗，拔除后立即放入牛奶、生理盐水或对照处理。阳性对照组为牙脱位后立即计数牙周膜细胞;而阴性对照组为脱位牙干燥后计数牙周膜细胞。在不同的时间检测有活力的牙周膜细胞数量，并与对照组进行比较。结果 牛奶、生理盐水与阳性对照组比较，牙周膜细胞活性差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组、牛奶、生理盐水与阴性对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论 生理盐水、牛奶可作为脱位牙有效的保存介质，时间最长可达2 h。

　　【关键词】 牙撕脱 牙周膜 牙再植术

　　Effect of two practical preservation medium on the avulsed teeth 　　TIAN Songbo, LIU Yanping, CHEN Huizhen, et al.　　Department of Stomatology, The Second Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050000, China

　　【Abstract】 Objective To evaluate the effect of two preservation medium and different time on the activity of the periodontal ligament cells(PDLCs) of dislocated teeth. Methods A total of 130 first and second premolars extracted by orthodontic treatment were placed in different preservation medium and 10 teeth in each group. The medium included milk, normal saline and the controls. The PDLCs that were counted as soon as the teeth were dislocated were used as the positive control, whereas the PDLCs that were counted after the dislocated teeth dried were used as the negative control. The active periodontal ligament cells were detected at different time and compared with those in control group. Results There were no significant differences among milk, normal saline and the positive control group (P>0.05). Significant differences were found between positive control group, milk, normal saline and negative group(P<0.01). Conclusion The milk and normal saline can be used as preservation medium for the storage of dislocated teeth for 2 hours at the longest in this study.

　　【Key words】 tooth avulsion; periodontal ligament; tooth replantation

　　牙脱位尤其是前牙脱位，对患者的美观、语言及咀嚼功能都会产生严重的影响。由于患者不能及时就诊，延误了再植的时机，往往造成再植的失败。牙脱位后保持牙根上的牙周膜细胞(PDLC)的活性是急需的，而最主要的影响因素是牙槽外干燥贮存时间和牙槽外溶液贮存时间。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 采用因正畸需要而拔除的130颗第1、2双尖牙。要求根尖孔发育已经完成，无龋坏及牙周病变。130颗牙齿来自39例患者，其中男22例，女17例;年龄13～18岁，平均年龄15.6岁。

　　1.2 分组 试验对象随机分为试验组、阳性对照组和阴性对照组。试验组：放入不同保存介质中的脱位牙，分为2组，第1组为牛奶，第2组为生理盐水。阳性对照组：为不浸泡在保存介质中的脱位牙，拔牙后立即处理计数。阴性对照组：为自然干燥状态下保存的脱位牙。以上各组除阳性对照组外，又分为4个不同的时段组，分别为0.5 h组，1 h组，1.5 h组，2 h组。每组10颗。

　　1.3 保存介质 牛奶(市售);0.9%生理盐水。

　　1.4 试剂 胶原酶Ⅱ(Gibco公司)、Dispase消化酶(Gibco公司)、胎牛血清(华美公司)、台盼蓝、磷酸盐缓冲液(PBS)、SP免疫组化试剂盒(北京中山生物技术公司)。

　　1.5 方法 将拔除的新鲜牙用镊子夹住牙冠，将牙颈部1/3的牙周膜及牙龈软组织刮除。用生理盐水冲洗后，放入上述2组保存介质中;阳性对照组立即处理;阴性对照组干燥保存。保存到相应时间后，将脱位牙放入消毒的试管中，每个试管中加入2.5 ml用PBS配制的消化液，其中包括0.2 mg/ml胶原酶Ⅱ和2.4 mg/ml Dispase，消化30 min。消化结束后，加入10 μl胎牛血清。在800 r/min下离心5 min。用消毒的吸管移去上清液，加入0.2 ml PBS，进行细胞计数并调整细胞浓度到1×106/ml。取9滴细胞悬液加入试管，加1滴0.4%台盼蓝。在光学显微镜下观察并计数活细胞和死细胞数量。为了保证数据结果的统一性，实验标本的处理、消化、染色、计数均由1人完成。

　　1.6 统计学分析 应用SPSS 12.0统计软件，计量资料以±s表示，采用方差分析和q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 同一时间点，不同保存介质中有活性的PDLC观察在同一时间点牛奶、生理盐水之间及其与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组、牛奶、生理盐水中有活性牙周膜细胞数量，与阴性对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.01)。见表1。

　　2.2 同一种保存介质，不同时间点有活性的PDLC观察牛奶，生理盐水在不同时间点之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

　　表1 4组有活性的牙周膜细胞均值(略)

　　注：与阳性对照组比较，P<0.01;与阴性对照组比较，#P<0.01

　　3 讨论

　　3.1 PDLC的结构及生物学功能 PDLC是一种具有多向分化功能的群体细胞,PDLC具有趋化、粘附、增生、生物合成和分化为成骨细胞、成牙骨质细胞和形成矿化组织等多项生物学功能，在脱位牙再植中起关键作用[1]。

　　3.2 影响脱位牙再植成功的因素 再植牙最佳愈合方式是牙周膜愈合。脱位牙再植越早越好,越早越容易形成牙周膜愈合,根吸收发生越少。有研究表明下列4个因素对PDL愈合有显著影响，依次为:牙根发育阶段;牙槽外干燥贮存时间;立即再植;牙槽外溶液贮存时间[2，3]。脱位牙在口外滞留时间过长所导致的牙周膜细胞干燥,以及保存于不合适的介质中是PDLC破坏的主要原因。在正常的解剖和生理状况下,PDLC的重量渗透压浓度是320 mOsm,pH值为7.2[3]。当牙齿脱位后,PDLC所储存的能量开始使用,在脱位后5 min内耗尽。而且,由于暴露在空气中,失去了其正常的生理环境,开始发生细胞膜的扭曲、变形。据此,脱位牙再植成功的关键在于脱位牙上的PDLC是否在接近正常生理状况下保存并尽可能快的再植。牙再植时其保存环境接近重量渗透压浓度320 mOsm,pH接近7.2,则其新陈代谢愈接近正常, 细胞的扭曲和损伤愈小,从而再植后发生牙根吸收的可能性也小,预后越好。为了达到这一最佳状况,应尽量使牙根上的PDL细胞免受物理挤压,并且应用有离子及能量供应的保存液处理牙根,以维持它们的新陈代谢[4]。因此，牙脱位不能即刻再植时，可选择合适的保存介质，以期较好的保存牙周膜细胞的活性。

　　牛奶在事故现场或附近容易获得，是较好的保存介质。脱位牙保存在牛奶中可以获得较高数量的有活力的PDLC，可能是由于牛奶有生理性渗透压[5]，含有细胞所需的营养物质，很少有细菌的成份以及它的pH缓冲系统对活细胞适宜的原因。有研究指出用脂肪含量降低2%的牛奶取代全奶，效果更好。因为低脂牛奶保存细胞活力的能力比全奶要好。其能有效地保持PDLC活性3 h，使患者到达医院有足够的时间[6]。本试验观察到牛奶在2 h内能有效地保存PDLC活性，与阳性对照组比较PDLC活性差异无统计学意义(P>0.05)。

　　生理盐水也可作为保存脱位牙的非常有效的溶液，因为生理盐水的渗透压与人体一致，能够保持细胞的形态，维持细胞正常的新陈代谢。本试验观察到生理盐水在2 h内能有效地保存PDLC活性，与阳性对照组比较PDLC活性差异无统计学意义(P>0.05)。

　　本试验结果提示生理盐水、牛奶可作为脱位牙的保存介质。但生理盐水不易获得，而牛奶则比较容易获取。因此，牙脱位后不能即刻再植时，可选择牛奶作为脱位牙的保存介质。

　　【参考文献】

　　1 于世凤，汪说之主编.口腔组织病理学.第5版.北京：人民卫生出版社，2003.2832.

　　2 赵建国，柳邦友，陈伟红.牙再植术在难治性根尖周炎治疗作用的临床研究.河北医药，2007，29：1226.

　　3 Barret EJ，Kenny DJ.A vulsed permanent teeth:a review of the literature and treatment guidelines.Endod Dent Traumatol,1997,13:153.

　　4 Patil S,Dumsha TC,Sydiskis RJ.Determining periodontal ligament(PDL)cell vitality from exatrcuated teeth stored in saline or milk using fluorescien diacetate.Int Endod J，1994，27：13.

　　5 Patil S， Dumsha TC，Sydiskis RJ. Determining periodontal ligament (PDL) cell vitality from exarticulated teeth stored in saline or milk using fluorescein diacetate.Int Endod J，1994,27:15.

　　6 Courts FJ，Mueller WA，Tabeling HJ. Milk as an interim storage medium for avulsed teeth. Pediatr Dent，1983,5:183186.