炎症牙髓保存活髓后细菌拷贝数检测

　　作者：毛小泉1,曾鸣1,张英爱2,徐普1　　作者单位：1.海南省口腔医学中心，2.中南大学湘雅医学院附属海口医院中心实验室，海南 海口　570208

　　【摘要】目的：探讨牙髓炎活髓保存术清除髓腔细菌的效率。方法：选用成功建立牙髓炎模型的新西兰大白兔20只，每只兔采用自身对照的方法，随机将2颗下颌前牙分为实验组和对照组，实验组在兔牙颊面颈部钻两孔，置入制备好的小儿头皮针，使用抗生素液冲洗髓腔并引流;对照组使用碘仿糊剂处理炎症牙髓。术后1、3、5、7 d各处死5只，收集标本保存-20 ℃冰箱待测。结果：第3、5、7 d实验组细菌拷贝数少于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：实验性牙髓炎进行冲洗引流后能有效清除炎症牙髓中的细菌。

　　【关键词】 牙髓炎;细菌;拷贝数

　　[ABSTRACT] Objective： To investigate the efficiency of bacteria removal for vitalpulp preservation in pulpitis. Methods：A total of 20 eligible rabbits pulpitis models were used for this sel-control study. Two submandibular anterior teeth in each rabbits were selected and assigned for experimental group and control group randomly. Pulp cavity was washed and drained with antibiotic for the experimental group while the control group was treated with iodoform paste. 5 animals were sacrificed on 1， 3， 5， 7 days after the experiment， vitalpulp samples were collected and stored in -20℃ refrigerator. Results：Number of bacteria copies detected in samples of the group were significant less than that of control group at all time except for those collected 1 day after the treatment (P<0.05). Conclusion：Bacteria in vitalpulp samples collected from experimental rabbits with induced pulpitis can be eliminated efficiently after draining.

　　[KEY WORDS] Pulpitis; Bacterium; Copy number

　　龋病、牙折、锲状缺损、磨损、牙隐裂以及治疗不当等均可引起牙髓直接暴露于口腔环境，使细菌直接侵入牙髓。由于细菌毒力、宿主抵抗力、病变范围和引流情况的不同，暴露于口腔菌群的牙髓可以长期处于一种炎症状态，也可以迅速坏死。牙髓中的细菌可产生多种有害物质，它们可直接毒害组织细胞，或引发炎症和免疫反应间接导致组织损伤[1]。本实验对牙髓炎进行活髓保存，使用PCR检测两组牙髓中变形链球菌拷贝数，明确细菌清除效率。

　　1　材料与方法

　　1.1　实验动物

　　新西兰大白兔，雌雄不限，20只，体重1.7～2.2 kg，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供。

　　1.2　主要试剂及药品

　　变形链球菌(由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供)，玻璃离子水门汀(GIC，日本Fuji公司),1%戊巴比妥(上海)，生理盐水，一次性牙科治疗盘，消毒棉球。口腔变形链球菌核酸检测试剂盒 (PCR-荧光探针法，由北京索奥生物医药科技有限公司提供)。

　　1.3　仪器设备

　　高速涡轮机(DHD-110，由上海医用仪器设备厂提供)，球钻(半径0.5 mm，日本松风公司)，快速牙科手机(日本松风公司)，PCR仪(Linegene-2)。

　　1.4　方法

　　随机将成功建立牙髓炎模型的20只兔子下颌前牙2颗牙齿中的1颗作为实验牙，另1颗作为对照牙，并记录。实验组在牙颊侧颈部钻2孔，分别接入制备好的小儿头皮静脉针，用结扎丝将小儿头皮静脉针固定于兔牙上;1支接空注射器，另1支接有庆大霉素的注射器，注射器和钻孔周围用玻璃离子密封;冲洗时，空注射器抽负压，另1支向髓室内注入抗生素。对照组清理开髓点，用75%酒精消毒，髓室内碘仿糊剂，玻璃离子充填。实验组每日使用抗生素液冲洗，直至处死动物。两组分别于1、3、5、7 d于耳缘静脉注入空气处死，用涡轮机将下颌切牙取下，福尔马林固定24 h，脱钙后各标本作5 μm厚的石蜡切片，HE染色，光镜观察。

　　1.5　统计学处理

　　使用SPSS for Windows 13.0统计软件包对数据进行单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　对照组第3天的细菌拷贝数与第1天比下降14倍，第5天与第3天比下降8倍;实验组第3天的细菌拷贝数与第1天比下降28倍，第5天与第3天比下降4倍。两组第7天均检测不到细菌。组间方差齐性检验(F=0.687，P=0.661)，表明方差齐;实验组第3、5、7天细菌拷贝数与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)，　兔实验性牙髓炎变形链球菌PCR检测结果

　　3　讨论

　　细菌及其代射产物是造成牙髓炎的主要原因，因此在牙髓炎治疗过程中能否有效消除细菌对牙髓的影响，关系到炎症牙髓能否顺利愈合，能否保存活髓。本文拟通过动物实验明确实验性牙髓炎保存活髓后，颈部引流对髓腔细菌的清除效率。

　　本组实验性炎症牙髓保存活髓后，使用 PCR检测牙髓组织内残留变形链球菌拷贝数，实验组细菌拷贝数明显低于对照组。原因可能是：实验组建立髓腔引流，一方面有利于选择敏感抗生素作冲洗液，加大局部组织抗生素浓度[2]，杀灭髓室内的细菌，死亡细菌在引流作用下被排出牙体外;另一方面冲洗起到机械清除细菌作用，残留细菌及炎症分泌物在持续引流作用下，不断排出牙体外，髓腔环境得到改善，牙髓组织自身防御能力增强，中性白细胞在活化、吞噬细菌的过程中发生呼吸爆发[3-6]，产生H2O2和HClO，迅速杀灭细菌，为细菌的清除提供了条件[7];中性白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和单核细胞介导的宿主吞噬细胞发挥功能[8]，促使纤溶蛋白激活物及其它酶的释放，髓室内发生纤维蛋白溶解，创造出加快纤维蛋白溶解的环境，进行自溶性清创[9];促进了细菌的引流清除，因此，髓室内细菌的量明显下降。对照组采用碘仿糊剂覆盖炎症牙髓，玻璃离子充填。碘仿缓慢释放游离碘，具有杀菌消炎和收敛作用，减少创面渗出物，保持创面干燥并且对组织无刺激性[10]，但髓腔内杀灭的细菌及炎症分泌物不能及时引流;髓室环境得不到明显的改善，牙髓组织自身防御能力不能有效发挥。髓室内的细菌既不能在外力作用下清除，也不能通过自身防御能力清除，因此进行PCR检测时细菌拷贝数明显多于实验组。

　　综上所述，在牙颊侧钻孔对炎症牙髓使用抗生素液冲洗，能有效清除炎症牙髓中的细菌。

　　【参考文献】

　　1　樊明文.牙体牙髓病学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2004：151-153.

　　2　毛小泉，谢文扬.兔感染伤口清创缝合的实验研究[J].海南医学院学报，2007,13(2)：19-20.

　　3　Canseven AG， Coskun S， Seyhan N.Effects of various extremely low frequency magnetic fields on the free radical processes， natural antioxidant system and respiratory burst system activities in the heart and liver tissues[J]. Indian J Biochem Biophys， 2008,45(5)：326-331.

　　4　Miedzobrodzki J， Panz T， Ptonka PM，et al. Platelets augment respiratory burst in neutrophils activated by selected species of gram-positive or gram-negative bacteria[J]. Folia Histochem Cytobiol， 2008,46(3)：383-388.

　　5　Seki Y， Sahara Y， Itoh E， et al. Suppressed neutrophil respiratory burst in patients with haemorrhagic stroke[J]. J Clin Neurosci， 2010,17(2)：187-190.

　　6　Wiemer AJ， Lokuta MA， Surfus JC， et al. Calpain inhibition impairs TNF-alpha-mediated neutrophil adhesion， arrest and oxidative burst[J]. Mol Immunol， 2010,47(4)：894-902.

　　7　　　Zhang R， Eriksson LA.Distinct hydroxy-radical-induced damage of 3′-uridine monophosphate in RNA： a theoretical study[J]. Chemistry， 2009,15(10)：2394-2402.

　　8　Durand EA， Maldonado-Arocho FJ， Castillo C， et al. The presence of professional phagocytes dictates the number of host cells targeted for Yop translocation during infection[J]. Cell Microbiol， 2010,12(8)：1064-1082.

　　9　Ramundo J， Gray M.Collagenase for enzymatic debridement： a systematic review[J]. J Wound Ostomy Continence Nurs， 2009,36(6 Suppl)：S4-11.

　　10　张红，白艳洁，权花淑.氢氧化钙碘仿糊剂消毒根管的疗效观察[J].中国实用医药，2009,4(6)：84-85