兔牙周组织在正畸力下bFGF变化的研究
发表时间：2010-09-02 浏览次数：494次
作者：张燎,诸葛春耕,陈杰,闫立军,夏庆银,亓红娟 作者单位：1. 泰安市口腔医院，山东 泰安 271000;2. 青岛大学医学院附属医院口腔科，山东 青岛 266012
【摘要】 目的 通过检测受正畸力后兔牙周组织压力侧bFGF的表达，了解兔牙受力过程中bFGF在牙周组织的变化情况。方法 将动物分为等量4组，其中一组作为对照，实验组以左、右侧上颌第一磨牙为研究对象，两牙之间施加50克左右的力，3个实验组分3次在受力24小时、1周、2周将动物处死，制备牙体-牙周组织标本，进行免疫组化染色(HI-SABC法)后检测、分析。结果 对照组bFGF染色呈弱阳性，受力24小时组与对照组无显著性差异，受力1周、2周组bFGF染色情况与对照组有显著性差异，3个实验组两两比较差异无显著性。结论 bFGF在正畸牙周组织改建中有一定作用。
【关键词】 牙周组织 bFGF 正畸力 兔
An evolution study on basic Fibroblast Growth Factor( bFGF) in the
Rabbit's periapex under the orthodontic powerZHANG Liao, ZHU GE Chun-geng, Chen Jie, YAN Li-jun, XIA Qing-yin, QI Hong-juan(Dept. of Orthodontics, Hospital of Stomatology, Tai'an City, Taian 271000， China)
Abstract: Objective: By examining the bFGF's expression of the periapex at the orthodontic teeth's pressure side to learn the bFGF's evolution under the power in different period. . Methods Divided 4 groups as equal by chance, one group for comparison. In experimental groups, we took the first molar of the maxilla at rabbits' nearside as experimental teeth, the other for anchorage teeth. There was about 50 gram between the two teeth. Three experimental animals would be killed after 24 hours, one week, two weeks. Preparing the experimental and comparial groups parafin specimen of tooth and periapex. Observing and examining specimen by adopting general immunity tissue chemical coloration. Analysis the variety rule of orthodontic teeth's periapex and mechanism of bFGF in the motion teeth. Results There was ebb masuline in normal periapex about bFGF. And there was no evident difference in pressure periodontal membrance after 24 hours, but had evident difference after one week and two weeks.The experimental groups had no evident difference each other. Conclusions BFGF had some effect in the course of the rebuilding and repairing of the periapex.
Key words: periapex; bFGF; orthodontic power; habbit
牙齿错牙合畸形是一种口腔常见病，在人类有较高的发病率。矫治错牙合畸形通常在错位牙或畸形颌骨上施加各类外力或者去除异常的肌力，从而使机体的颌骨、牙周等硬软组织内部产生生物力学反应，发生组织学改建，进而达到矫正错牙合畸形、恢复正常口颌功能。正畸牙的移动是一种包含着复杂生物学内容的生物机械运动，分为力学阶段和组织学阶段。然而，轻微的矫治力[1]对牙齿及牙周是否有害仍存在争论，一些学者认为正畸治疗对牙周组织有损害[2]，而Zachrisson等[3]则认为适宜矫治力对牙周健康无明显损害。临床观察及X线检查只能从表面反映牙周组织变化情况，而不能从根本上反映其机理，组织切片能够较好地反映组织内部变化状况。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)作为多肽生长因子中的一种，广泛存在于来源于中胚层及神经外胚层的细胞及多种肿瘤细胞中,并对绝大多数来自中胚层和神经外胚层的细胞具有促增殖活性。bFGF对牙周膜细胞增殖和细胞周期的影响，国内外都有报道[4，5]，有关bFGF与正畸牙移动、组织改建的关系方面也有研究。本研究采用兔作为对象，对兔牙施以轻微的矫治力从而取得牙齿受力后不同时期的组织标本，进行bFGF免疫组化染色，检测bFGF在牙周膜染色情况，分析探讨bFGF在正畸牙移动过程中的作用机理。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 分组 24只出生后150～180天未成年纯种新西兰白兔(由山东大学实验动物中心提供)，性别不限，体重2.2～3.0 kg，将24只兔随机分为等量4组，每组6只，其中1组作为对照。
1.1.2 主要试剂及仪器 bFGF免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。DAB显色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。显微镜(日本奥林巴斯)。
1.2 方法
1.2.1 矫治器的放置 麻醉成功后，将附有牵引圈的0.25 mm不锈钢丝结扎固定左、右侧上颌第一磨牙，牵引圈均留在腭侧，两牵引圈之间用镍钛拉簧(深圳以太人科技有限公司生产)施加矫治力，大小约50 g，对照组参考实验组但不施加矫治力。(图1)。
图1 矫治器放置情况1.2.2 免疫组化染色
(1)切片脱蜡至水。(2)热修复抗原。(3)正常山羊血清封闭。(4)滴加稀释后的一抗。(5)滴加生物素山羊抗小鼠IgG。(6)滴加试剂SABC。(7)DAB显色，自来水充分冲洗，蒸馏水洗涤。(8)淡苏木素液复染细胞核。
(9)脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。以PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.3 阳性结果判断 bFGF阳性反应部位细胞浆呈棕黄色，细胞核呈淡蓝色[6]。
1.3 判断标准(采用Bresalier等[7]半定量公式计算染色强度) 用双盲法在每张切片的压力侧随机选取10个高倍视野，根据细胞染色强度分为4级并分别记分：阴性，细胞或组织无显色(0);弱阳性，细胞或组织显色为浅黄色(1);中度阳性，细胞或组织显色为棕黄色(2);强阳性，细胞或组织显色为棕褐色(3)。记数每一强度的视野数，根据以下公式计算每张切片的平均染色强度记分;Is(intensity score)=∑{(0×F0)+(1×F1)+(2×F2)+(3×F3)},F=%×10。式中F为每一强度级别的视野数。
1.4 统计学检验 用SPSS10.0软件包处理，进行方差分析;实验组两两比较采用q检验。
2 结 果
对照组兔牙周组织中bFGF表达很弱，染色呈淡黄色，主要位于根尖区牙周膜的成纤维细胞及成骨细胞的胞浆内，网状细胞和血管内皮中也有轻度表达(图2);实验组兔牙周组织中bFGF表达增强，染色呈棕黄色，主要表达在成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞及骨髓腔基质细胞中，破骨细胞中也有较弱表达(图3，4)。采用Bresalier等半定量染色强度计数方法进行统计学分析，如表1所示。
图2 正常牙周膜bFGF染色(×200)图3 加力1周时牙周膜bFGF染色(×200)图4加力2周时牙周膜bFGF染色(×400)表1 四组兔牙牙周膜中bFGF染色情况计分(n=10)分组 0 1 2 3 x s p对照组 4 5 1 0 0.7 0.67524h组 1 6 2 1 1.3 0.823 0.0811周组 1 5 3 1 1.4 0.843 0.017*2周组 0 3 4 3 2.0 0.816 0.002* 经方差分析发现，四组别染色平均值差异有显著性，F=4.481，P=0.009，其中除1周组与对照组(P=0.017)，2周组与对照组(P=0.002)差异有显著性外，其余各组间两两比较差异均无显著性(P>0.05)。
3 讨 论
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是Gospodarowicz于1974年从牛脑垂体中提取的一种对3T3成纤维细胞有明显促增殖作用的多肽因子。它广泛存在于来源于中胚层及神经外胚层的细胞及多种肿瘤细胞中,对这些细胞有促增殖分化功能,并参与了胚胎发育、血管生成、损伤修复、神经再生、肿瘤生长等多项生理及病理过程[8]，bFGF对多种来源于中胚层的细胞如内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等具有明显趋化作用[9]。对于bFGF在医学其它领域(血管形成、软组织损伤修复、软骨、骨组织损伤修复、神经组织损伤修复等)的研究已经比较深入，关于bFGF的应用也有一些的报道。葛少华等[10]关于bFGF对牙周细胞生物学活性的影响的研究证实bFGF可促进牙周细胞的增殖，抑制细胞的分化成熟，从而促进牙周再生。Wang等[11]用脱钙骨和外源性bFGF联合修复缺损牙槽骨，结果表明bFGF还能促进牙周膜冠向生长。提示bFGF在牙周组织的生长修复过程中有促进作用。目前研究证实[12]，bFGF能促进牙周膜细胞的增殖，降低其碱性磷酸酶的活性，动物实验也发现，局部应用外源性bFGF能明显促进牙周膜、牙骨质和牙槽骨的修复重建。常少海等[13]利用大鼠作为研究对象发现：bFGF在正畸力作用下大鼠牙周组织中的表达明显强于对照组。
本项研究对正畸力作用下兔牙周组织中bFGF的表达检测发现，兔牙受到正畸力24小时牙周膜bFGF着色情况与对照组相比无显著性差别(P>0.05),可能与bFGF的产生及分泌途径有关，bFGF由细胞产生后作用于细胞才能发挥其生物学功能，bFGF的作用机制是通过与其靶细胞上的受体结合而发生作用，因此细胞内合成的bFGF必须分泌到细胞外才能发挥其生物学功能。已有的实验[14]推测bFGF可通过以下两条不常见途径分泌：其一是通过细胞膜的微小破裂而释放，其二是通过细胞的死亡而释放。这提示可能在炎症处期，牙周膜中的成纤维细胞、成骨细胞等以直接受损伤为主，尚未产生足够量的bFGF，或者产生的bFGF还没有分泌到细胞外，因此在受力24小时未检测到bFGF显著性变化;在受力1周及2周后检测到牙周组织中bFGF显著性改变(P<0.05)，这说明牙周膜组织受到持续的矫治力后，一方面，部分成纤维细胞、成骨细胞等破坏溶解释放出相对多量的bFGF，另一方面，成纤维细胞、成骨细胞及其他细胞产生和释放bFGF;实验组两两比较均无显著性差异(P>0.05)，此结果提示细胞受到刺激后产生bFGF总是维持在一个相对稳定的范围，而不是随着矫治时间的延长而持续升高，同时从另一个侧面也印证了Terranova VP[15]和Tweden KS[16]关于FGFs在促进牙周膜成纤维细胞的有丝分裂、增殖时， bFGF的有效浓度为0～20 ng/ml，最大效应浓度为10 ng/ml，并且在适宜的浓度下，更有利于促进细胞增殖、毛细血管增生以及其他组织的修复。
【参考文献】
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