吲达帕胺冻干口腔崩解片在Beagle犬体内药物动力学研究

　　作者：王金 吴志刚 杜青 作者单位：(1.河北北方学院医学院药学系，河北 张家口 075000;2.河北医科大学药剂教研室，河北 石家庄 050019)

　　【摘要】 目的：研究自制吲达帕胺冻干口腔崩解片和市售吲达帕胺片在Beagle犬体内的药物动力学行为及其相对生物利用度。方法：6只Beagle犬，随机分为两组，分别单剂量口服自制吲达帕胺冻干口腔崩解片和市售吲达帕胺普通片，剂量均为5.0mg。1周后交叉给药。采用HPLC法测定给药后不同时间的血药浓度。结果：供试制剂自制吲达帕胺冻干口腔崩解片和参比制剂吲达帕胺普通片的主要药动学参数：达峰时间tmax分别为(1.59±0.04)h和(2.71±0.32)h，达峰时药物浓度ρmax分别为(6.10±0.32)和(5.89±0.44)μg·mL-1,t1/2分别为(15.04±0.48)h和(14.65±0.73)h，AUC0∞分别为(89.66±8.34)和(67.58±2.56)μg·h·mL-1。结论:统计学分析结果表明自制吲达帕胺冻干口腔崩解片的生物利用度要高于市售吲达帕胺普通片。

　　【关键词】 吲达帕胺;药物动力学;生物等效性;Beagle犬

　　Pharmacokinetics of Indapamide Lyophilized Oral Disintegrating Tablets in Beagle Dogs

　　WANG Jin1,WU ZhiGang1，DU Qing2

　　1.Department of Pharmaceutics,Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China;

　　2.Department of Pharmaceutics,the School of Pharmacy,

　　Hebei Medical University,Shijiazhuang,050017，Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective:To study the relative bioavailability and pharmacokinetic of Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets and indapamide tablets in beagle dogs.Methods:The Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets(test)or Indapamide tablets(reference)were orally administered to 6 beagle dogs at a dosage of 5.0mg.The crossover dosing was taken in one week after the first single dose.The Indapamide concentrations in the blood samples were determined by HPLC.Results:The main pharmacokinetic parameters of the test and reference tablets were as follows:tmax(1.59±0.04) and (2.71±0.32)h,ρmax(6.10±0.32) and (5.89±0.44)μg·mL-1,t1/2(15.04±0.48) and (14.65±0.73)h,AUC0∞(89.66±8.34) and (67.58±2.56)μg·h·mL-1.Conclusion:The results showed that the Indapamide lyophilized oral disintegrating tablets increased relative bioavailability.

　　【KEY WORDS】 Indapamide,Pharmacokinetics,Bioequivalence,Beagle dogs

　　吲达帕胺(Indapamide)为磺胺的衍生物，具有吲哚环结构，临床上广泛用于治疗中度高血压，但市售吲达帕胺片给长期卧床或吞咽困难的病人服用带来不便。本试验采用冷冻干燥法[1,2]制备了吲达帕胺冻干口腔崩解片，以提高药物的生物利用度及病人服用的顺应性。以市售普通片为参比制剂，进行吲达帕胺冻干口腔崩解片在Beagle犬体内的药动学和生物等效性评价。

　　1 材料与方法

　　1.1 仪器与试剂

　　Lab Alliance model 520液相色谱仪(美国Lab Alliance公司);CT ALPHA 24/LSC冷冻干燥仪(德国Christ公司);PEG6000(医药级，美国陶氏)。

　　供试制剂为自制吲达帕胺冻干口腔崩解片(规格每片2.5mg);参比制剂为吲达帕胺普通片(规格每片2.5mg，天津力生制药有限公司，批号：0605020);吲达帕胺对照品(中国药品生物制品检定所，批号：102570002);乙腈、甲醇均为色谱纯。

　　Beagle犬6只(上海新冈试验动物场)，雌雄各半，体质量(10.2±1.5)kg。

　　1.2 方法

　　1.2.1 吲达帕胺冻干口腔崩解片的制备

　　取吲达帕胺原料药2g，用少量乙醇溶解，缓慢加入到20g熔融状态的PEG6000中，边加热边搅拌，待乙醇挥发完全，快速冷却，干燥器放置过夜，即得吲达帕胺PEG6000固体分散体(1∶10);另取吲达帕胺PEG6000固体分散体5.5g，水解明胶0.5g，麦芽糖糊精25g，加水溶解并定容至100mL，定量分装于0.5mL的模具中，冷冻干燥，即得吲达帕胺冻干口腔崩解片(规格每片2.5mg)。

　　1.2.2 色谱条件

　　色谱柱：Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm)

　　流动相：磷酸盐溶液(2g磷酸二氢钾，3mL磷酸，3.5mL三乙胺溶于1000mL水)乙腈甲醇(55∶40∶5);流速：1.0mL·min-1;柱温：35℃;检测波长：240nm;灵敏度：0.01AUFS，进样量20μL，见图1。2009年10月王 金等：吲达帕胺冻干口腔崩解片在Beagle犬体内药物动力学研究第5期2009年10月河北北方学院学报(医学版)第5期

　　图1 高效液相色谱图

　　A 空白全血;B 空白全血加吲达帕胺对照品(5.00 g·mL-1);

　　C Beagle犬口服5.0mg吲达帕胺后2h全血样品。Ⅰ吲达帕胺，Ⅱ吲达帕胺代谢物

　　1.2.3 全血样品的处理[3] 精密量取全血样品0.4mL，置10mL具塞离心管中，加入无水乙醚4mL，漩涡3min。于1 000×g离心15min，精密量取3mL上清液至另一离心管中，40℃水浴中以氮气吹干，将残留物用100μL流动相漩涡振荡溶解，离心5min(1 000×g)，取上清液20μL，进样分析。

　　1.2.4 标准曲线的绘制 取空白全血0.4mL 6份，分别加入不同浓度的系列标准溶液50μL，使全血药物浓度分别为0.125、0.5、1.0、5.0、10.0、12.5μg·mL-1，按“1.2.3”项下全血样品处理后进样20μL，记录色谱峰面积。以吲达帕胺的峰面积为纵坐标，质量浓度(μg·mL-1)为横坐标，按最小二乘法进行回归，得回归方程为：ρ=19789X+1283.6，r=0.9992(n=6),线性范围0.125～12.5μg·mL-1。

　　1.2.5 回收率与精密度试验

　　取空白全血配制0.250、1.25、5.00μg·mL-13个质量浓度的样品，按“1.2.3”同法处理。并测定其回收率和日内、日间精密度，结果见表1和表2。结果表明，回收率与精密度符合要求。表1 全血中吲达帕胺的回收率测定表2 吲达帕胺日内、日间精密度测定

　　1.2.6 提取回收率 精密量取空白全血0.4mL于10mL具塞离心管中，制成0.250、1.25、5.00μg·mL-13个质量浓度的全血样品，按“1.2.3”处理记录色谱图及色谱峰面积;另取一批离心管，不加空白全血，其余操作同上平行进行，记录色谱图和峰面积，计算提取回收率。结果分别为68.21%(RSD=5.26%)、81.46%(RSD=3.84%)和79.65%(RSD=4.27%)。

　　1.2.7 给药方法及血样采集 Beagle犬6只，随机分为2组，每组3只，按照双周期交叉试验方法设计给药方案，给药前一周内禁服其它药物，试验前禁食12h，自由饮水，给药后4h统一进食。分别口服参比制剂吲达帕胺普通片(相当于主药5.0mg)或供试制剂自制吲达帕胺冻干口腔崩解片(相当于主药5.0mg)，给药前采血作为空白对照，给药后分别于0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h、10.0h、12.0h、16.0h、24.0h、36.0h、48.0h于股静脉采血，一周后交叉给药，同时间点采血。血样用肝素抗凝，于-20℃保存。

　　2 结果

　　2.1 全血样品测定及药动学参数 6只Beagle犬单剂量口服自制吲达帕胺冻干口腔崩解片和吲达帕胺普通片后，平均血药浓度时间曲线见图2。实验数据采用统计矩法[4]分析，以梯形法计算血药浓度时间曲线下面积(AUC048)，根据对数血药浓度时间曲线末端直线部分的斜率求算消除半衰期，ρmax和tmax为实测值，药动学参数见表3。表3 吲达帕胺冻干口腔崩解片和吲达帕胺片药动学参数

　　2.2 生物等效性分析 将受试制剂、参比制剂的AUC0∞和ρmax分别作对数转换，进行方差分析及双单侧t检验，计算90%置信区间。结果表明，自制吲达帕胺冻干口腔崩解片生物利用度比参比制剂吲达帕胺普通片高，相对生物利用度为132.6%,结果见表4。　表4 双单侧检验结果

　　3 讨论

　　吲达帕胺在体内分布广泛，在血液中与红细胞的结合率为80%，与血浆蛋白的结合率为76%[5]。所以，在测定体内吲达帕胺时通常采用的是全血提取法，这样可以避免蛋白沉淀法带来的损失。

　　考察不同溶剂提取全血中吲达帕胺的回收率，结果发现二氯甲烷和乙酸乙酯的提取回收率较低(仅为35%左右)，氯仿的提取回收率虽较高，但杂质很多，影响测定;而以10倍乙醚提取，杂质少且提取回收率高，故采用乙醚提取全血中的吲达帕胺。

　　固体分散体能够提高难溶性药物溶出速率和溶解度，提高药物的吸收和生物利用度。本试验将吲达帕胺与PEG6000形成固体分散体后再制得吲达帕胺冻干口腔崩解片，药物溶出速率加快，10min体外溶出量即大于标示量的65%[6]。本试验进一步考察药物在Beagle犬体内的动力学过程，非隔室模型药动学参数计算表明：自制吲达帕胺冻干口腔崩解片与市售吲达帕胺相比AUC增大，生物利用度提高;tmax提前，表明冻干口腔崩解片有速释效果;而ρmax无显著变化，表明药物不会因速释而产生血药浓度骤然升高所引起的不良作用。自制口崩片和市售制剂的半衰期分别为(15.04±0.48)h和(14.65±0.73)h，与文献报道的14～18h相符。

　　自制吲达帕胺冻干口腔崩解片置于口腔内十几秒即可溶解随唾液吞咽，质量可控，稳定性良好[6]，可以替代普通片用于长期卧床或有吞咽困难高血压患者的治疗。

　　【参考文献】

　　1 Seager H.Drugdelivery products and the Zydis fastdissolving dosage form[J].J Pharm Pharmcol,1998,50(4):375382

　　2 Sam C,Remon JP.Formulation and production of rapidly disintegrating tablets by lyophilisation using hydrochlorothiazide as a model drug[J].Int J pharm,1997,152(2):215225

　　3 Hang TJ,Zhao W,Liu J,et al.A selective HPLC method for the determination of indapamide in human whole blood:Application to a bioequivalence study in Chinese volunteers[J].J Pharm Biomed Anal,2006,40:202205

　　4 梁文权.生物药剂学与药物动力学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2004.266275

　　5 Caruso FS,Szabadi RR,Vukovich RA.Pharmacokinetics and clinical pharmacology of indapamide[J].Am.Heart J,1983,106:212220

　　6 王金，王静，方瑜，等.吲达帕胺冻干口腔崩解片的质量控制和稳定性研究[J].中国医院药学杂志。