胸苷磷酸化酶在口腔鳞癌中的表达

　　作者：冯红超， 韩蔚蔚　宋宇峰 作者单位：(贵阳医学院 口腔医学系 口腔颌面外科教研室， 贵州 贵阳 550004)

　　【摘要】 目的： 了解口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中胸苷磷酸化酶(TP)的表达情况，并探讨其与肿瘤发展和转移的关系。方法： 40例OSCC和14例正常口腔黏膜作为研究对象，采用免疫组织化学SP法检测TP的表达，并分析其表达与临床指标的关系。结果： OSCC组织中TP的表达高于正常口腔黏膜组(P<0.05)，其阳性表达率分别为65.00%和14.29%;在OSCC中TP的表达Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期病例(P<0.05)，淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论： OSCC组织中TP的高表达与肿瘤的发展和转移有关，但具体的机制及其在OSCC预后、治疗中的意义还需进一步的研究。

　　【关键词】 癌，鳞状细胞; 口腔肿瘤; 免疫组织化学; 肿瘤转移; 胸苷磷酸化酶

　　Expression of Thymidine Phosphorylase inOral Squamouscell Carcinoma

　　FENG Hongchao, HAN Weiwei, SONG Yufeng

　　(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Affiliated Hospital of Guiyang

　　Medical College, Guiyang 550004, Guizhou, China)

　　[Abstract] Objective: To study the expression of thymidine phosphorylase (TP) in oral squamouscell carcinoma (OSCC), and its relationships with the development and metastasis of OSCC. Methods: The expression of TP in tissue specimens of 40 cases of human OSCC (group OSCC) and 14 cases of normal oral mucosa (group NOM) was detected by using immunohistochemistry SP method, and the relationship between TP and the patients' clinical indexes was analyzed. Results: TP positive expression rate in group OSCC (65.00%)was significantly higher than that in group NOM (14.29%; P<0.05). Expression of TP protein was correlated with TNM stages and lymph node metastasis (P<0.05). Conclusions: The upexpression of TP protein might be involved in the growth and metastasis of OSCC. But the potential mechanism and significance of TP protein in the prognosis and treatment in OSCC need further research.

　　[Key words] carcinoma, squamous cell; mouth neoplasms; immunohistochemistry; neoplasms metastasis; thymidine phosphorylase

　　头颈部恶性肿瘤80%是鳞状细胞癌，易于发生局部复发和颈部转移，由于头颈颌面解剖的原因，完全手术切除存在一定困难，因此患者的预后往往较差，所以对其发展和转移的研究有重要的临床意义。在对其它肿瘤的研究中发现胸苷磷酸化酶(Thymidine Phosphorylase,TP)即血小板源性内皮细胞生长因子(plateletderived endothelial cell growth factor, PDECGF)在肿瘤的生长和转移中起一定作用。2008年通过免疫组织化学的方法研究口腔鳞状细胞癌(oral squamouscell carcinoma, OSCC)中TP的表达及与肿瘤发展、淋巴结转移的关系，现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　鳞癌组为选取2004-2007年贵阳医学院附属医院口腔颌面外科手术切除或活检并经病理诊断证实为OSCC的组织标本，40例，均为高分化鳞癌;正常组为取自无烟酒嗜好的外伤或正畸拔牙病人正常口腔黏膜，14例。研究对象临床资料见表1。肿瘤组根据UICC(2002)的TNM分类分期标准，其中Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期28例;淋巴结转移组22例，无淋巴结转移组18例。入选病例术前未经任何针对肿瘤的治疗。以上标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度4 μm。表1 研究对象的各项参数

　　1.2 染色

　　所有切片(正常组和鳞癌组)均按免疫组织化学SP法进行单染，鼠抗人TP单克隆抗体标记(福州迈新公司提供)，实验步骤参照试剂盒说明书进行操作，严格控制时间及温度，每组标本均以试剂公司提供阳性组织切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果判断

　　TP表达阳性和阴性根据细胞染色强度和染色阳性细胞所占总细胞比值两者积分之和来判断。染色强度积分为：不染色为0，轻度染色为1，中度染色为2，强染色为3;染色面积比分为：无细胞染色为0，<25%细胞染色为1，25%～50%细胞染色为2，>50%细胞染色为3;若2种积分之和>2，则为TP表达阳性，≤2则为表达阴性[1]。在400倍高倍镜下随机选择5个上皮或癌变视野进行判断，取平均值进行分析。普通HE染色：观察肿瘤的一般、病理分级，由3位高年资的病理科医师分别进行，取至少2位意见相同的结果进行统计分析。

　　1.4 统计分析

　　统计工具应用SPSS11.5版软件包，采用行χ列表资料χ2的检验。P﹤0.05有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 TP免疫组织化学染色特点

　　免疫组织化学单染切片上，TP阳性染色呈棕黄色或棕褐色颗粒，主要分布在细胞的胞浆和胞核，OSCC中有大量的TP表达，肿瘤细胞及间质细胞内均有表达(图1);正常组织内阳性细胞明显稀少(图2)。

　　2.2 不同口腔组织中TP的表达

　　OSCC及正常口腔黏膜组织中，TP的阳性表达率分别为65.00%、14.29%。TP在OSCC组织中表达显著高于正常口腔黏膜组织中TP的表达，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。表2 口腔鳞癌组织与正常口腔黏膜组织中TP的表达

　　2.3 OSCC中TP表达与各临床病理学参数间的关系

　　口腔鳞癌中TP的表达在与各临床病理学参数间的比较中，Ⅲ～Ⅳ期病例显著高于Ⅰ～Ⅱ期病例(P<0.01)，有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),而在年龄和性别的比较中，其差异不具有统计学意义(P>0.05)。见表3。表3 口腔鳞状细胞癌中TP表达和各项临床病理学参数间的关系

　　3 讨论

　　本组结果显示TP在OSCC组中的阳性表达明显高于正常口腔黏膜组;且在OSCC TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组TP的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期组;有淋巴结转移组TP的表达明显高于无淋巴结转移组。说明在OSCC中，TP为高表达，且与肿瘤进展及淋巴结转移相关，TP参与了OSCC的生长和转移过程，这与在其他肿瘤中的研究结果相一致[2，3]。

　　本组结果显示OSCC中TP阳性表达率在OSCC中为65%，这与其他作者的研究结果相一致[4]。在OSCC中，肿瘤细胞和间质细胞均有TP阳性表达，主要分布在细胞的胞浆和胞核，这与Gou等[5]在原发性肝细胞癌的检测结果一致。而Saito等[6]在大肠癌研究中发现TP阳性表达主要集中在肿瘤间质细胞而非肿瘤细胞，这说明TP在不同的肿瘤组织中表达的部位可能有所不同。

　　血小板源性内皮细胞生长因子(PDECGF)于1985年被发现其是45KDa的二聚体，有较强的趋化内皮细胞、诱导血管生成的作用，其基因定位于22号染色体的q13[7]。与其它血管生长因子(aFGF、bFGF和VEGF)不同，PDECGF不能与肝素结合。1992年, Furukawa等[8]发现PDECGF有40%氨基酸序列与大肠杆菌的TP序列一致，接着又证实PDECGF具有TP酶活性，现在人们已经把PDECGF和TP看作同一种因子，其在正常组织中少量表达。研究表明TP在肿瘤生长和转移中的作用是通过促进肿瘤新生血管形成实现的[9]。由于TP促进的新生血管发育不良且无序，毛细血管基底膜不连续，肿瘤细胞很容易穿过基底膜上的漏洞进入血循环;同时研究发现TP与具有很强降解基底膜及细胞外基质作用的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、 基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶9(MMP9)、高纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI1)等的表达有关，而基底膜及细胞外基质的降解、重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节，这说明TP还可能通过上述蛋白参与肿瘤的生长和转移[10]。

　　总之，本研究表明OSCC中TP存在高表达，并和肿瘤的TNM分期、淋巴结转移有关，说明其参与了OSCC的生长和转移，但其具体机制及在OSCC预后、治疗中的意义还需要进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]Zhou J, Tang Z, Fang J. The expression of plateletderived endothelial cell growth factor in liver cancer[J]. Chung Hua I Hsuech Tsa Chih, 2000 (11): 831-834.

　　[2]Hong SP, Shin SK, Bang S,et al. Prognostic value of thymidine phosphorylase expression for pancreatic cancer.[J]. Hepatogastroenterology,2009 (93):1178-1182.

　　[3]Kuramochi H, Hayashi K, Uchida K, et al. 5fluorouracilrelated gene expression levels in primary colorectal cancer and corresponding liver metastasis[J].Int J Cancer,2006 (3):522-526.

　　[4]Li C, Shintani S, Terakado N, et al. Microvessel density and expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and plateletderived endothelial growth factor in oral squamous cell carcinomas[J].Int J Oral Maxillofac Surg, 2005(5):559-565.

　　[5]Guo L, Kuroda N, Toi M, et al. Increased expression of plateletderived endothelial cell growth factor in human hepatocellular carcinomas correlated with high Edmondson grades and portal vein tumor thrombosis [J].Oncol Rep,2001(4):871-876.

　　[6]Saito S, Tsuno N, Nagawa H, et al. Expression of palateletderived edothelial cell growth factor correlates with good prognosis in patients with colorectal carcinoma[J].Cancer,2000 (1):42-49.

　　[7]Haraguchi M, Miyadera K, Uemura K, et al. Angiogenic activity of enzymes[J].Nature,1994 (6468):198-204.

　　[8]Furukawa T，Yoshimura A，Sumizawa T，et al.Angiogenic factor[J]. Nature，1992(356):637-668.

　　[9]Zhu GH, Lenzi M, Schwartz EL. The Sp1 transcription factor contributes to the tumor necrosis factorinduced expression of the angiogenic factor thymidine phosphorylase in human colon carcinoma cells[J].Oncogene,2002(21):8477-8485.

　　[10]Gotanda T, Haraguchi M, Tachiwada T, et al. Molecular basis for the involvement of thymidine phosphorylase in cancer invasion[J].Int J Mol Med,2006 (6):1085-1091.