原发性高血压患者血清CD40水平及脉搏波速率与CD40基因多态性的关系

　　作者：袁　铭，李成祥，曹艳杰，郭文怡，王海昌 作者单位：陕西省西安市西京医院心内科，陕西 西安　710032

　　【摘要】 目的：探讨原发性高血压患者CD40基因多态性与血清CD40水平及脉搏波速率的联系。方法：研究对象为432名原发性高血压患者。以酶联免疫反应法测定血清可溶性CD40(sCD40)水平。用Taqman聚合酶链式反应(PCR)方法测定CD40基因三种类型(A/G、C/T、T/C)，分析CD40基因多态性与血清CD40浓度、脉搏波速率(PWV)的联系。结果：有CD40基因A/G中的GA[GA：(43.4±4.2)pg/ml比AA：(29.6±1.6)pg/ml，GG：(39.8±6.5)pg/ml]、C/T中的CT[CT：(42.1±4.2) pg/ml比CC：(37.1±7.6)pg/ml，TT：(30.6±1.5)pg/ml]、T/C中的TT[TT：(43.3±5.3) pg/ml比TC：(32.3±1.3)pg/ml，CC：(30.7±3.7)pg/ml]等三种基因型的高血压患者的sCD40水平均较其他相应基因型显著升高(P <0.05～0.01);有A/G中的GG[GG：(9.5±0.3)m/s比AA：(9.0±0.1)m/s，GA：(8.8±0.1)m/s]、 C/T中的CC[CC ：(9.6±0.3) m/s比CT：(8.9±0.1)m/s，TT：(9.0±0.5)m/s]、T/C中的CC[CC：(9.3±0.2) m/s比TT：(9.0±0.1)m/s，TC：(8.9±0.1)m/s]等三种基因型的高血压患者的PWV均较其他相应基因型明显增快(P均<0.05)。结论： CD40的三种基因多态性与血清CD40浓度、脉搏波速率有关。

　　【关键词】 抗原,CD40,高血压;基因型;多态性，单核苷酸

　　Abstract：Objective： To study CD40 gene polymorphism of patients with essential hypertension (EH) related with serum level of CD40 and pulse wave velocity(PWV). Methods：A total of 432 EH patients were enrolled in the study. Enzyme linked immunosorbent assay method was used to measure serum level of soluble CD40 (sCD40). Taqman polymerase chain reaction (PCR) method was used to measure CD40 gene polymorphism (A/G，C/T，T/C). The relations of gene polymorphism of EH patients with serum level of CD40 and PWV were analyzed. Results：Compared with other corresponding genotypes，there were significant increase in sCD40 level in EH patients with CD40 GA genotype in A/G [AA：(29.6±1.6) pg/ml，GG：(39.8±6.5) pg/ml vs. GA：(43.4±4.2) pg/ml]，CT genotype in C/T [CC：(37.1±7.6) pg/ml，TT：(30.6±1.5) pg/ml vs. CT：(42.1±4.2) pg/ml]and TT genotype in T/C [TC：(32.3±1.3) pg/ml，CC：(30.7±3.7) pg/ml vs. TT：(43.3±5.3) pg/ml]，P<0.05～<0.01.Compared with other corresponding genotypes，there were significant increase in PWV in EH patients with CD40 GG genotype in A/G [AA：(9.0±0.1) m/s，GA：(8.8±0.1) m/s vs. GG：(9.5±0.3) m/s]，CC genotype in C/T [CT：(8.9±0.1) m/s，TT：(9.0±0.5) m/s vs. CC：(9.6±0.3) m/s]and CC genotype in T/C [TT：(9.0±0.1)m/s，TC：(8.9±0.1)m/s vs. CC：(9.3±0.2) m/s]，P<0.05 all. Conclusion： Gene polymorphisms of CD40 are related with serum concentration of CD40 and pulse wave velocity.

　　Key words：Antigens，CD40;Hypertension;Genotype;Single nucleotide，polymorphism

　　高血压病被认为是涉及基因及环境在内的多因素疾病，并与心肌梗死、中风等心血管疾病的发病率相关[1]。有证据表明[2]，免疫分子CD40在动脉粥样硬化中发挥重要作用，CD40可能是心血管疾病或其他发病危险因子的标志物[3,4]。本研究观测了原发性高血压患者血清CD40水平及其与基因多态性的关系，希望能够进一步明确CD40在高血压病中的作用。

　　1　资料与方法

　　1.1　研究对象

　　研究对象为原发性高血压患者432人，检测指标为三种单核苷酸多态性(SNPs)。根据世界卫生组织(WHO)1993年的修改标准，即收缩压大于140mmHg及/或舒张压小于90 mmHg作为高血压病的诊断标准。

　　1.2　方法

　　1.2.1　基因型测定：全部染色体DNA提取于全血样本的白细胞。采用Applied Biosystems公司(ABI，USA)TaqMan技术测定DNA多态性，分别是：启动子部分dbSNPID编码为rs1800686及rs752118的区域的两种SNPs，即A/G和C/T;另一个为在第一个ATG基因之前一个碱基处的T/C。仪器采用ABI的7900型聚合酶链反应(PCR)仪。

　　1.2.2　可溶性CD40的测定：血清可溶性CD40 (sCD40)使用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(Bender Med Systems，USA)测定。患者禁食12h后抽取静脉血清样本进行测定。

　　1.2.3　动脉硬化程度：采用脉搏波速率(PWV)测定主动脉硬化程度[5]。仪器为FCP-4731 (Fukuda Denshi Co.，Tokyo，Japan)。将 SV1+RV5 的电压作为左心室肥大的指标。

　　1.4　统计学方法

　　数据分析采用统计软件包Stat View 5.0版(SAS公司，USA) 。计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，采用t检验。P<0.05为差异有显著性。

　　2　结　果

　　2.1　一般情况

　　见表1。表1　原发性高血压患者一般资料

　　2.2　CD40基因多态性基因型分布频率

　　对应每一种多态性基因型，1/1 表示一种纯合型基因，1/2表示杂合型基因，2/2表示另一种纯合型基因，其分布频率符合Hardy-Weinberg定律。 见表2。表2　基因型分布

　　2.3　血清CD40浓度、PWV和心电图左室肥大与CD40基因多态性的联系

　　有CD40基因A/G中的GA、C/T中的CT、T/C中的TT等三种基因型的高血压患者的sCD40水平均较其他相应基因型显著升高(P<0.05～<0.01);有A/G中的GG、 C/T中的CC、T/C中的CC等三种基因型的高血压患者的PWV均较其他相应基因型明显增快(P<0.05)。说明CD40基因多态性与心电图左室肥大无联系。见表3。　表3　血清CD40浓度、PWV与CD40基因多态性

　　3　讨　论

　　单核苷酸多态性(single nucleic polymorphisms，SNPs)是人类基因组DNA序列变异的主要形式。本研究首次报道了CD40三种基因多态性与心血管疾病的关系。对于A/G多态性，和已有报道的中国人群中的同种基因多态性结果比较，频率比例相似[6];对于C/T多态性，本研究所报道的基因型频率也与以往的研究相似[7]。三种基因型的分布符合遗传学Hardy-Weinberg 平衡理论。

　　流行病学调查表明[7]，C/T基因型与冠心病相关。高血压病的发病机制涉及某些基因变异，最近频繁提出的一个假设就是个体发生的突变或功能的多态性与高血压病的发生发展有重要关联[1]。本研究分析了CD40的基因多态性，尤其是在有A/G型中的GA、C/T型中的CT及T/C型中的TT这3种基因型的高血压患者血清sCD40水平明显升高，提示sCD40从某种程度上或许可以预测高血压的发生。

　　另外，存在的三种基因型与PWV具有一定相互关系。PWV测量的是主动脉僵硬程度，是血管动脉粥样硬化的一个早期指标[8]。近来，PWV 一直被认为是与血管危险因子和心脑血管的流行密切相关[9,10]。早先有多项研究表明了CD40系统与动脉粥样硬化有密切相关性[11]。因此，PWV的相关结果与CD40以往的研究间接说明，两者具有动脉粥样硬化中期预测危险因子的重要作用。

　　本研究首次报道了CD40的三种单核苷酸基因多态性与心血管疾病的关系，发现CD40的基因多态性与老年原发性高血压的具有一定关联，进一步的相关分析有待以后研究探讨。

　　【参考文献】

　　[1]O′Sullivan C，Duggan J，Lyons S，et al.Hypertensive target-organ damage in the very elderly[J]. Hypertension,2003,42(2)：130-135.

　　[2]Mach F，Schonbeck U，Sukhova GK，et al.Reduction of atherosclerosis in mice by inhibition of CD40 signalling[J]. Nature,1998,394(6689)：200-203.

　　[3]Gotsman I，Sharpe AH，Lichtman AH.T-celll costimulation and coinhibition in atherosclerosis[J].Circ Res,2008,103(11)：1220-1231.

　　[4]傅宏杰，袁　铭.炎症和动脉粥样硬化的联系纽带——CD40/CD40L系统[J].心血管康复医学杂志，2011,20(2)：185-188.

　　[5]Safar H，Mourad JJ，Safar M，et al.Aortic pulse wave velocity，an independent marker of cardiovascular risk[J]. Arch Mal Coeur Vaiss,2002,95(12)：1215-1218.

　　[6]Yan JC，Wu ZG，Kong XT，et al. Relation between upregulation of CD40 system and complex stenosis morphology in patients with acute coronary syndrome[J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(2)：251-256.

　　[7]Tian CX，Li Y，Wang M，et al. Association between inflammatory cytokine CD40 gene polymorphism and risk of acute coronary syndrome[J].中华心血管病杂志，2008,36(3)：199-204.

　　[8]Zureik M，Bureau JM，Temmar M，et al. Echogenic carotid plaques are associated with aortic arterial stiffness in subjects with subclinical carotid atherosclerosis[J].Hypertension,2003,41(3)：519-527.

　　[9]Yamashina A，Tomiyama H.Arteriosclerosis and pulse wave velocity[J]. Nippon Rinsho,2004,62(1)：80-86.

　　[10]拓胜军，白宏兴，梁延宏，等.脉搏波传导速度与冠状动脉病变程度的相关性研究[J].心血管康复医学杂志，2010,19(4)：439-441.

　　[11]Urbich C，Dimmeler S.CD40 and vascular inflammation[J]. Can J Cardiol,2004,20(7)：681-683.