急性冠脉综合征患者内皮祖细胞及C反应蛋白的变化
发表时间：2012-04-01 浏览次数：416次
作者：高洁,李杰 作者单位：新疆维吾尔自治区人民医院心内科，新疆 乌鲁木齐
【摘要】目的：观察急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中内皮祖细胞(EPCs)及C反应蛋白的变化。方法：入选40例ACS(不稳定型心绞痛18例、急性心肌梗死22例)患者与20例行冠状动脉造影术排除冠心病的正常人(正常对照组)，取所有研究对象外周血100μl分别加入CD34-PE、AC133-异硫氰酸荧光素(FITC)荧光抗体使与EPCs表面CD34、AC133抗原结合，通过流式细胞仪检测PE、FITC阳性细胞的数量。同时检测高敏C反应蛋白(hsCRP)浓度。结果：与正常对照组比较，不稳定型心绞痛、急性心肌梗死患者外周血中EPCs数量显著增多[(0.48±0.04)%比(0.84±0.31)%比(1.57±0.62)%，P<0.001]，hsCRP浓度明显升高[(0.63±011)mg/L比(7.8±0.59) mg/L比(11.2±0.46) mg/L，P<0.001]，且上述指标在急性心肌梗死组明显高于不稳定心绞痛组(P<0.001)，所有患者外周血中EPCs数量与hsCRP浓度正相关(r=0.82，P<0.001)。结论：急性冠脉综合征患者外周血中内皮祖细胞数量显著增多，可能与炎症因子激活骨髓干细胞分化为内皮祖细胞，参与血管修复有关。
【关键词】 冠状动脉疾病,内皮细胞,C反应蛋白质
Abstract：Objective： To investigate changes of levels of endothelial progenitor cells (EPCs) and C-reactive protein(CRP) in peripheral blood in patients with acute coronary syndrome (ACS). Methods： A total of 40 ACS patients [18 cases with unstable angina pectoris (UAP) and 22 cases with acute myocardial infarction (AMI)] and 20 normal subjects (normal control group) who were excluded coronary heart disease by coronary angiography were enrolled. 100μl peripheral blood of each subject was obtained， and CD34-PE， AC133- fluorescein isothiocyanate (FITC) fluorescent antibodies were added to combine with CD34 and AC133 antigens on surface of EPCs respectively. Number of PE and FITC positive cells was detected by flow cytometer. And concentration of high sensitive C-reactive protein(hsCRP) was measured. Results：Compared with normal control group， there were significant increase in UAP patients and AMI patients， in number of EPCs [(0.48±0.04)% vs. (0.84±0.31)% vs. (1.57±0.62)%] and concentration of hsCRP [(0.63±011)mg/L vs. (7.8±0.59) mg/L vs. (11.2±0.46) mg/L] in peripheral blood P<0.001 both. Levels of above indicators in AMI group were significantly higher than those of UAP group (P<0.001). Number of EPCs in peripheral blood was positively correlated with concentration of hsCRP in all patients (r=0.82， P<0.001). Conclusion： Number of EPCs significantly increases in peripheral blood of ACS patients，its possible cause may be myeloid stem cells differentiated into EPCs after stimulation from inflammatory factors， and then takes part in vascular repair.
Key words： Coronary artery disease; Endothelial cells; C reactive protein
近年来的研究发现骨髓、脐血和外周血中存在能分化为内皮细胞并参与血管新生的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)，于是在20世纪末，人们提出了用EPCs治疗冠心病的构想。本研究通过计数急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中EPCs，探讨缺血、损伤、应激、炎症及冠心病相关危险因素对冠心病治疗和预后的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选择我院2007年4月至11月收住的60例行冠状动脉造影术患者为研究对象，其中40例(男25例、女15例)诊断为ACS(包括不稳定型心绞痛18例、急性心肌梗死22例),20例(男13例、女7例)冠脉造影排除冠心病者为正常对照组。两组均排除：恶性肿瘤、外周血管病变、增生性视网膜病变患者;炎症、急性出血、有输血史及服用他汀类或促红细胞生成素药物者，绝经前妇女。
1.2 一般临床资料
收集所有患者基本资料： 性别、年龄、血压。详细了解病史：高血压病、糖尿病、冠心病、脑血管疾病、肾脏病、吸烟史、冠心病家族史。进行常规实验室检查：空腹及餐后血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯、尿酸、心肌钙蛋白、高敏C反应蛋白(hsCRP)。
1.3 EPCs的检测
自肘前静脉采集外周血标本并置于乙二胺四乙酸(EDTA)管抗凝。循环EPCs定义为表达CD34及AC133的单个核细胞，双染色阳性。采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人AC133单克隆抗体及PE(一种染剂)标记的鼠抗人CD34单克隆抗体(美国Pharmingan 公司) 与采集的血样本共育15 min，使标记CD34+、AC133+ 细胞。应用流式细胞仪( Elite，Beckman2Counter美国)计数CD34+、AC133+ 细胞数目。EPCs的数目以每50000个单核细胞中CD34+、AC133+ 细胞所占的比例表示。
1.4 统计处理
用SPSS 16.0统计软件作数据处理，计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，用多因素逐步回归方法分析CD34+、AC133+ 细胞的影响因素。用偏回归分析和协方差分析判定CD34+、AC133+ 细胞数量和冠状动脉病变严重程度的关系。
2 结 果
2.1 入选患者临床资料
三组患者在年龄、性别、人体质量指数、血压、吸烟、饮酒、空腹血糖和血脂水平、高血压病病史、糖尿病病史等方面均无显著差异。
2.2 外周血CD34+、AC133+ 细胞与危险因素的关系
多因素逐步回归方法分析显示外周血CD34+、AC133+ 细胞与有关危险因素无关，见表1。表1 CD34+、AC133+ 细胞与心血管危险因素的关系
2.3 CD34+、AC133 + 细胞数量与急性心肌缺血损伤的关系
与正常对照组比较，不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组EPCs数目均明显增加(P<0.001)，且急性心肌梗死组较不稳定型心绞痛组增加更明显(P<0.001)，见图1，表2。
2.4 ACS与hsCRP浓度的关系
与正常对照组比较，不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组hsCRP浓度均明显升高(P<0.001)，且急性心肌梗死组较不稳定型心绞痛组升高更明显(P<0.001)，见表2。
2.5 CD34+、AC133 + 细胞数量与hsCRP浓度的关系
三组患者外周血中EPCs数量与hsCRP浓度呈正相关(r=0.52,0.82,0.78，P<0.05～<0.01)，见表2。图1 三组患者流式细胞仪结果表2 各组患者CD34+、AC133 +数量与hsCRP浓度关系
3 讨 论
在正常情况下内皮损伤和EPCs修补之间存在动态平衡，EPCs可通过刺激受损血管的再内皮化来维持内膜完整性或参与调节缺血区域的血管形成和血管生成，从而改善缺血器官的功能。血管损伤时，骨髓EPCs释放至外周血，分化、增殖、迁移并整合至内皮缺损部位，参与内皮修复过程[1,2]。
体外培养的结果证明[1]： CD34+flk-1+ AC133+细胞随着增殖分化成为CD34+flk-1+ AC133-的成熟内皮细胞。因此，以通过CD34、flk-1及AC133定性及定量分析外周血及组织内的血管EPCs。
本研究通过计数ACS(急性心肌梗死、不稳定型心绞痛)患者及冠状动脉造影阴性患者CD34+、AC133 + 细胞数量及检测hsCRP浓度，讨论探讨急性缺血、损伤、炎症及冠心病相关危险因素与外周血EPCs数量的关系。
本组ACS患者血清EPCs数量、hsCRP浓度显著高于正常对照组患者，外周血EPCs数与血清hsCRP浓度呈正相关，进一步证实炎症及急性内皮损伤可增加外周血中EPCs数量。
近期研究发现炎症反应参与了ACS的发生及发展[3]，本研究发现急性心肌梗死及不稳定型心绞痛患者hsCRP及白细胞水平明显升高，且与EPCs数呈正相关。进一步证明炎症因子不仅参与动脉粥样硬化斑块的破裂及血栓形成，同时激活骨髓干细胞分化为EPCs，参与血管内皮修复。但hsCRP如何促进EPCs释放的机制目前仍不明确。考虑到EPCs在血管形成中的作用，可以推断用EPCs的动员剂VEGF、粒巨噬细胞集落刺激因子 [5]等提高EPCs的数量和功能活性有可能使冠心病病人病情好转。
徐全胜等发现冠心病患者外周血内皮祖细胞数明显减少[6]，Vasa等[7]发现冠心病患者EPCs数量和活性明显降低，并与有关危险因素呈负相关。Kondo T等[8]发现戒烟能够迅速增加慢性吸烟者外周血中的EPCs数量。但是，本研究中外周血EPCs与患者年龄、高血压病病史、空腹血糖、血清尿酸浓度、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等冠心病危险因素无明显相关性，考虑与样本量较小有关，应进一步增大样本量了解冠心病相关危险因素对外周血EPCs的影响。
【参考文献】
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[8] Kondo T，Hayashi M，Takeshita K，et al.Smoking cessation rapidly increases circulating progenitor cells in peripheral blood in chronic smokers[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,200424(8)：1442-1447
