急性冠脉综合征患者循环血中OX40L高表达的临床价值

　　作者：陈广华,严金川　　作者单位：江苏大学附属医院 心内科，江苏 镇江 212001

　　【摘要】 目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血淋巴细胞OX40配体(OX40L)表达及血清可溶性OX40L(sOX40L)水平变化的临床意义。方法 应用间接免疫荧光流式细胞术和ELISA分别对正常对照组 20例、稳定型心绞痛(SA)组20例、ACS组40例的外周血淋巴细胞OX40L表达及血清sOX40L水平进行检测，免疫透射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)。结果 ACS组外周血淋巴细胞OX40L表达明显高于SA组和对照组(P<0.01)，SA组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);ACS组血清sOX40L水平明显高于SA组和对照组(P<0.01)，SA组与对照组相比差异无统计学意义(P >0.05);ACS组血清CRP 水平明显高于SA组和对照组(P<0.01)，SA组与对照组相比差异无统计学意义(P >0.05)。血清sOX40L水平与CRP呈正相关(r =0.79，P<0.001)，血清sOX40L水平与冠脉病变复杂狭窄数呈正相关(r =0.72，P <0.001)。结论 ACS患者外周血淋巴细胞OX40L表达及血清sOX40L水平均明显升高，提示sOX40L在ACS的发生和发展中具有重要作用，可作为预测ACS的新指标。

　　【关键词】 OX40配体,动脉粥样硬化,急性冠脉综合征

　　Abstract：Objective To investigate the clinical implications of OX40 ligand (OX40L) on peripheral blood lymphocytes and changes in serum soluble OX40L(sOX40L) in patients with acute coronary syndromes(ACS).Methods Twenty control and 60 patients，including 20 with stable angina (SA)，40 with ACS enrolled in this study.Expression of OX40L on peripheral blood lymphocytes was analyzed by flow cytometry and sOX40L levels were measured by ELISA.Creactive protein (CRP) in serum was determined by immunological turbidity kit.Results Expression of OX40L on peripheral blood lymphocytes in ACS patients were significantly higher than those in SA patients and controls (P<0.01)，while no significant difference was found between SA patients and controls(P>0.05).The serum levels of sOX40L in ACS patients were significantly higher than those in SA patients and controls (P<0.01).SOX40L levels in SA patients showed no significant increase when compared to controls.The levels of CRP in ACS patients were higher than those in SA patients and controls (P<0.01)，and the level of CRP had a positive correlation with sOX40L level(r=0.79， P<0.01).A significant correlation was observed between sOX40L serum concentration and the number of complex lesions(r=0.72， P<0.01).Conclusion Expression of OX40L on peripheral blood lymphocytes and sOX40L serum concentration are elevated in patients with ACS.It suggests that enhanced level of serum sOX40L may play an important role in ACS，and may be a reliable prognostic indicator for it.

　　Key words:OX40 ligand;atherosclerosis;acute coronary syndromes

　　动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症疾病[12]，急性冠脉综合征(ACS)与炎症致AS斑块不稳定、破裂和继发血栓形成有关[3]。而T细胞与该炎症反应密切相关。体内有多种激活T细胞的受体/配体信号通路，OX40及其配体OX40L是其中重要的一种，OX40OX40L是一对互补跨膜糖蛋白，它们参与了AS的发生和发展[4]。本研究分别检测稳定型心绞痛(SA)、ACS患者及正常对照组外周血中淋巴细胞OX40L表达及血清sOX40L水平变化，以期揭示OX40L在ACS发病中的作用。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象

　　选择2007年10月到2008年3月在本科住院的患者60例，其中SA组 20 例，ACS组40例，ACS组包括不稳定型心绞痛(UA)20例，急性心肌梗死(AMI)20 例，另外选取年龄、性别相当的正常对照组 20 例，SA 、UA及正常对照组均经冠脉造影证实，AMI组均有心电图和心肌损伤生物学标志物的改变，并经过冠脉造影证实。病例排除标准：恶性肿瘤者，活动性肝病及肝肾功能衰竭者，合并周围血管疾病和脑卒中者，合并自身免疫性疾病者，近期服用抗生素或非甾体类消炎药者。各组性别、年龄、吸烟、血压、白细胞计数、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDLC)、甘油三酯(TG)等方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

　　1.2 标本采集及处理

　　所有受试者均在胸痛发生后6 h内抽取全血7 ml，其中2 ml注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，摇匀，3 000 r•min-1离心10 min，分离上清血浆，-70 ℃ 冰箱保存待测。另5 ml 也注入EDTA抗凝管，30 min内采用密度梯度法分离淋巴细胞，附壁收集淋巴细胞。

　　1.3 检测方法

　　1.3.1 淋巴细胞表达OX40L的检测 采用流式细胞仪(FASCALIBUR)间接免疫荧光法检测。将106 ml-1淋巴细胞悬于PBS中，2 000 r•min-1离心10 min，去上清，再1 500 r•min-1离心10 min，去上清，加50 μl第一抗体于样品管中，4 ℃孵育30 min，PBS洗2次，加入50 μl FITC标记的二抗，4 ℃孵育30 min，PBS洗2次，以1 ml PBS重悬细胞，立即上流式细胞仪检测，计数104个细胞，检测淋巴细胞OX40L表达的阳性率。鼠抗人的一抗以及FITC标记的羊抗鼠的二抗均来源于Pharmingen公司。表1 3组病例临床一般资料比较注：括号内为百分率

　　1.3.2 血清sOX40L检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA法)，试剂盒由美国ADL公司提供，其检测灵敏度为10 pg•ml-1。按照试剂盒说明书严格操作，用全自动酶标分析仪(Biocell，HT2)进行检测。

　　1.3.3 血清CRP的测定 采用免疫透射比浊法，试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，其检测灵敏度为0.01 mg•L-1。

　　1.3.4 冠脉造影 由2名心内科医师分析冠脉病变，对所有直径减少≥30%的冠状动脉进行评估，将其分为复杂狭窄和光滑狭窄两种。复杂狭窄特征为：形态不规则或边缘有扇形皱褶，病变边缘断裂、凸出，与血管壁成角，表面有溃疡形成，充盈缺损的冠状动脉内有血栓征象。无上述表现者为光滑狭窄。

　　1.4 统计学处理

　　采用SPSS13.0统计分析软件包进行统计学分析。计量资料用x-±s表示，组间均数的比较采用单因素方差分析;相关性分析采用Pearson检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 ACS组外周血淋巴细胞OX40L表达及血清sOX40L的水平 ACS组外周血淋巴细胞OX40L表达明显高于SA组和对照组(均P<0.01)，SA组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。ACS组血清sOX40L水平明显高于SA组和对照组(均P<0.01)，而SA组与对照组相比亦无明显差异(P>0.05)。见表2。

　　2.2 ACS组患者血清CRP 水平

　　ACS组血清CRP 水平明显高于SA组和对照组(均P<0.01)，而SA组与对照组相比无明显差异(P>0.05)，见表2。血清sOX40L水平与CRP水平呈正相关(r=0.79，P<0.001)，见图1。 表2 各组OX40L表达阳性率及血清sOX40L和CRP水平比较

　　2.3 血清sOX40L水平与冠脉病变复杂狭窄数的关系 sOX40L水平与冠脉病变复杂狭窄数呈显著正相关(r=0.72，P<0.001)。见图2。

　　3 讨 论

　　OX40OX40L是一对互补跨膜糖蛋白，OX40又称图2 血清sOX40L水平与冠脉病变复杂狭窄数关系图

　　为CD134，属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员，主要表达在CD4+ T淋巴细胞表面。OX40L(OX40配体)又称为CD134 L或gp34，属于TNF 家族成员，主要表达在B淋巴细胞、树突状细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等活化的抗原递呈细胞表面[5]。T淋巴细胞参与了AS病变的发生和发展，OX40与OX40L结合对促进活化后T细胞的存活、增殖起重要作用，极大地影响了AS的进程[6]。大量研究提示，OX40L已成为目前动物实验证据最充分的AS的易感基因[7]。Ria等[8]的研究发现，在AMI患者中，OX40L基因序列中的变异基因出现频率有显著性。国内学者发现，OX40L基因rs3，850，641位点A/G多态性中G等位基因可能是中国人冠心病发病的独立危险因素之一[9]。尽管动物实验及人体实验均证实OX40L基因与AS和冠心病密切相关，但对于淋巴细胞表达OX40L及血清sOX40L水平与ACS是否相关并不清楚。

　　本研究首次发现ACS患者淋巴细胞OX40L表达和血清sOX40L水平显著高于SA组和对照组，SA组和对照组相比无明显差异。大量研究证实，SA患者体内存在的多是稳定性斑块，局部炎症反应较轻;而ACS患者体内存在的多是不稳定性斑块，不稳定性斑块的纤维帽边缘有大量炎症细胞聚集，特别是激活的T淋巴细胞。OX40与OX40L结合对促进活化后T细胞的存活、增殖起重要作用。因此推测OX40与OX40L结合，参与了ACS患者不稳定斑块的破裂和继发血栓形成，极大地影响了ACS发生过程，提示OX40L可能对ACS有预测价值。

　　本研究还发现，ACS患者血清CRP水平显著高于SA组和对照组，而且血清sOX40L水平与CRP水平呈正相关，这和其他学者的研究结果[1011]相似。CRP是一种急性期炎症标志物，在ACS患者明显升高，一方面反映了体内的炎症反应，另一方面对ACS患者不良预后的发生也有预测价值[1213]。而血清sOX40L水平与CRP水平呈正相关，提示两者在反映体内炎症反应方面的一致性，也提示sOX40L可能对ACS患者的预后也有预测价值，但两者间的因果关系及相互作用机制仍需进一步研究。

　　本研究中，我们发现sOX40L水平与冠脉病变复杂狭窄支数呈正相关。有研究证实复杂狭窄更容易引起不稳定斑块破裂，导致血栓形成[14]。因此，我们认为sOX40L也可能是预测冠脉病变活动性的指标之一。

　　综上所述，OX40OX40L在细胞免疫和体液免疫中是一条重要的细胞信号转导途径。ACS患者体内存在的多是不稳定性斑块，在其纤维帽边缘有大量炎症细胞集聚，特别是激活的T淋巴细胞，使得OX40OX40L高表达，血清sOX40L水平升高，促进了不稳定斑块的破裂和继发血栓形成，因此血清sOX40L水平可能是冠脉病变活动性标志物之一，有望成为预测ACS及斑块稳定与否的敏感指标，并对预后有一定的预测价值。目前，阻断OX40OX40L的相互作用已成为治疗许多临床自身免疫炎症疾病的手段之一[1516] ，阻断OX40OX40L通路也有可能成为预防和治疗ACS的新手段。本研究病例数较少，存在一定的缺陷，要进一步验证OX40L在预测ACS及判断其预后中的价值，更多的研究工作仍有待深入。

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