宫颈癌中PTEN和Bcl-2的表达及意义
发表时间：2014-02-18 浏览次数：575次
宫颈癌是危害妇女生命与健康的主要恶性肿瘤之一,其发病率居女性生殖器恶性肿瘤的首位,在导致女性死亡的肿瘤中宫颈癌居于第2位。本研究拟用免疫组化EliVisionTM检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌组织中PTEN和Bd-2表达情况,探讨二者与宫颈癌的生物学行为,为宫颈癌的临床治疗和预后提供科学依据。
1 临床资料
1.1 一般资料 随机选取2009年1月-2011年12月武安市妇幼保健院妇科收治的宫颈癌手术切除子宫标本50例,平均年龄48.6岁,患者术前均未行放化疗及激素治疗;按2000年FIGO标准进行临床病理分期及组织分级:I期22例,Ⅱ期28例;高分化12例,中分化18例,低分化20例;有淋巴结转移21例,无淋巴结转移29例;宫颈鳞癌41例,宫颈腺癌9例。同时选取门诊就诊并行宫颈锥形切除术CIN患者31例,平均年龄47.2岁;CINI~Ⅱ17例,CINⅢ14例。另选择同期因子宫肌瘤或子宫脱垂而手术切除子宫的正常宫颈组织标本20例,平均年龄41.2岁。
1.2 试剂与方法 常规免疫组化S-P试剂盒、Bcl-2和PTEN抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用SP免疫组化法,按试剂盒说明书进行操作,取已知乳腺癌组织切片作为阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.3 组织芯片的制作 每一组织标本均由2位病理专家作2次诊断,并在HE切片上根据典型病理部位作标记即组织定位;制作微阵列蜡块,先用空白石蜡块,选用特殊工具在空白蜡块上均匀地打出小孔(直径1.0mm),然后根据HE片上精确范围在供体组织蜡块相应位置获取所要组织芯片放人受体蜡块阵列孔中,并记录组织编号,所有组织整齐排列,制成组织芯片蜡块。对组织芯片蜡块连续切片,制成组织芯片,均设有平行对照。
1.4 结果判断 Bc1-2和PTEN阳性定位于细胞浆和细胞核,以各种抗体在细胞浆和核内出现棕黄色颗粒为阳性信号。按照每张切片均随机观察5个高倍视野(×400),阳性细胞数<5%为(-),5%~25%为(+),>25%~50%为(++),)50%为(+++)。以(+)~(+++)均视为阳性表达,(-)视为阴性表达。
1.5 统计学处理 应用SPSS12.0统计软件处理,计数资料采用X2检验。相互关系用等级相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Bcl-2和PTEN在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织表达情况 在正常宫颈组织中,Bcl-2和PTEN表达率为8O%(16/20)。在CIN中Bcl-2表达率为77%(20/31),PTEN表达率为52%(16/31);在宫颈癌组织中,Bcl-2表达率为82%(41/50),PTEN表达率为32%(16/50)。各组间Bcl-2和PTEN表达率均有显著性差异(P均<0.05)。
2.2 Bcl-2和PTEN在宫颈癌中的表达与临床病理指标的关系 见表1。
2.3 Bcl-2和PTEN在宫颈癌组织中的相关性分析Bcl-2和PTEN在宫颈癌组织中的表达呈明显正相关,表明二者在宫颈癌的发生、发展中起到协同作用。见表2。
3 讨论
Bd-2家族中Bd-2基因蛋白是从滤泡型非霍奇金B细胞淋巴瘤中发现的,最早认为Bd-2是一种原癌基因,后来经过大量实验证实Bd-2基因蛋自没有促进细胞增殖和细胞恶性转化的作用,现在普遍的观点认为Bd-2是作为一种细胞凋亡的抑制剂,通过抑制生理性和病理性细胞凋亡,在肿瘤的发生、发展过程中有着重要的作用[1]。凋亡也称程序化细胞死亡,是机体在发育过程中或在某些因素作用下,通过细胞内在基因及其产物的调控而发生的细胞死亡。与细胞生长一样,细胞凋亡受基因的控制[2]。Bcl-2作为最早发现的凋亡抑制因子,其抑制凋亡的作用通过抑制氧自由基的产生和抗氧化作用,阻断氧化作用对细胞内部成分的破坏;还可以阻断游离钙离子和干扰细胞色素的释放,调节细胞凋亡;通过抗核酸酶的作用,保护细胞免受核酸酶的作用保护DNA,抑制DNA断裂[3]。本研究结果显示,Bcl-2在正常宫颈组织、αN和宫颈癌组织中的表达率是一个逐渐升高过程,说明Bd-2在这个过程中起到凋亡抑制作用。在宫颈癌组织中,随着临床分期、组织分级的升高与伴有淋巴结的转移,Bcl-2表达增强,说明Bd-2在宫颈癌组织中高表达预示着宫颈癌患者预后不良,有助于对宫颈癌的预后评估。
PTEN是在1997年发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于10q3号染色体上,其是临床病理科免疫组化检测运用比较广泛的实验指标之一,它的主要作用通过突变导致PTEN的磷酸酶活性降低,发挥抑制细胞生长,参与黏附、转移等各个方面发挥抑癌作用[4]。PTEN低表达发生于人类多种肿瘤,如乳腺癌[5]、食管癌[6]、胃癌[7]等。本实验显示PTEN蛋白在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中阳性表达率呈逐渐下降的趋势,说明PTEN蛋白表达下降或缺失,推动对细胞生长、增殖的负调控作用[8]。PTEN在宫颈癌中的低表达与淋巴结转移和分化程度有关,说明PTEN表达的高低反映其的恶性程度,PTEN低表达证实预后不良。对Bcl-2和PTEN两种基因蛋白进行相关性分析,显示呈明显负相关(P<0.05),PTEN在正常宫颈组织中高表达,在CIN和宫颈癌组织中低表达,而Bcl-2则正好相反,Bcl-2和PTEN基因蛋白在宫颈癌中的高表达和失活、缺失表达有利于细胞的生长和肿瘤的形成,说明两种蛋白与宫颈癌的发生密切相关,共同协同作用促进宫颈癌的发展。随着宫颈癌的恶性程度增高,Bcl-2和PTEN基因蛋白也呈同步上升和下降趋势,通过对宫颈癌和CIN组织中两者的联合检测,可以判断其发展趋势和恶性程度,为临床治疗提供帮助。
总之,宫颈癌组织中Bd-2和PTEN的表达状态可反映出宫颈癌的发展规律,有助于为宫颈癌的治疗提供新思路。
4 参考文献
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