单核细胞趋化蛋白1与子宫内膜异位症相关性研究

　　作者：郭小明,王俊然　　作者单位：河北省唐山市妇幼保健院

　　【摘要】目的通过研究子宫内膜异位症(EM)患者血清、腹腔液及异位内膜组织中单核细胞趋化蛋白1(MCP1)水平的表达，探讨MCP1在子宫内膜异位症发病中的作用。方法 病例组选取诊断为EM的不孕症患者45例，以酶联免疫吸附测定法( ELISA)定量检测EM患者血清及腹腔液中MCP1的水平;用免疫组织化学方法测定异位内膜组织中MCP1的表达。对照组选取其他原因不孕症患者45例，比较2组MCP1水平。结果 EM组早期患者血清、腹腔液及异位内膜组织中MCP1水平明显高于晚期患者及对照组,差异有统计学意义(P<0.05);EM患者血清、腹腔液及异位内膜中MCP1水平明显高于对照组(P<0.05)。结论 EM患者血清、腹腔液及内膜组织中MCP1水平明显升高,提示MCP1在EM致病机制中起着一定作用。

　　【关键词】 子宫内膜异位症;单核细胞趋化蛋白1

　　子宫内膜异位症(EM)是育龄女性常见疾病，也是常见的不孕症原因。近几年对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)在EM的发病机制中的作用作了许多研究，但结论并不一致 。我们于2008年7月至2010年1月采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫组织化学方法检测EM和非EM患者血清、腹腔液及异位内膜组织中MCP1的浓度,旨在探讨MCP1在EM发病中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 病例组选取我院经腹腔镜诊断为EM的患者共45例，采用修订后的美国生育协会EM分期评分法(RAFS)[1]对EM进行分期: 早期(Ⅰ～Ⅱ期)26例, 晚期(Ⅲ～Ⅳ期)19例。年龄26～41岁，平均年龄(34±7)岁;月经周期平均(30±5) d。对照组选取其他原因不孕症患者45例。年龄25～40岁，平均年龄(34±6)岁;月经周期平均(30±5) d。两组年龄、月经周期比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组均经术后病理检查确诊,术前3个月未使用激素类药物,无盆腔炎症、无自身免疫异常、无其他内、外科疾病。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集：术前空腹抽取肘部静脉血3 ml，术中吸取腹腔液5 ml，置于无菌离心管中,室温下静置1 h,2 500 r/ min 离心30 min,取上清液于-20℃冰箱中保存待测。病例组取卵巢巧克力囊肿的囊壁组织，经病理组织学确诊，显微镜下可见到异位内膜组织;对照组取其宫腔内膜。

　　1.2.2 测定方法：采用ABSELISA 法定量检测血清及腹腔液中MCP1水平。人MCP1 ELISA 试剂盒(德国R&D公司产品) 由深圳晶美生物工程有限公司提供。操作方法严格按照试剂盒说明进行。用Biocell22010 型酶标仪(澳大利亚生产) 读取数据。采用免疫组织化学方法检测异位内膜组织中MCP1的表达。新鲜取材的异位内膜及子宫内膜均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋。兔抗人MCP1多克隆抗体、即用型免疫组化SABC试剂盒及DAB显色剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照说明书操作，并用磷酸盐缓冲液代替一抗做阴性对照。阳性染色为细胞浆中出现棕黄色颗粒。应用自动图像分析系统对免疫组织化学结果进行半定量分析。

　　1.3 统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件。计量资料±s表示, 采取t检验,P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 2组血清与腹腔液中MCP1浓度检测结果比较 病例组MCP1浓度较对照组明显升高(P<0.05)。病例组早期患者MCP1浓度较晚期患者明显升高(P<0.05)。

　　2组血清与腹腔液中MCP1浓度比较±s,ng/L

　　组别血清MCP1腹腔液MCP1

　　病例组(n=45)212±42*32±8*

　　早期(n=26)232±45*#39±8*#

　　晚期(n=19)185± 14#26±3*

　　对照组(n=45)159±9 9±5

　　注：与对照组比较，*P<0.05;与晚期组比较,#P<0.05

　　2.2 2组异位内膜组织MCP1表达检测结果比较 病例组MCP1表达较对照组明显增强(P<0.05)。病例组早期患者MCP1表达较对照组增强(P<0.05)。

　　2组异位内膜组织MCP1表达(平均光密度值 )±s

　　组别MCP1表达

　　病例组(n=45)0.27±0.02#

　　早期(n=26)0.28±0.03#*

　　晚期(n=19)0.23±0.02#

　　对照组(n=45)0.19±0.19

　　注：与对照组比较，*P<0.05;与晚期组比较,*P<0.05.

　　3 讨论

　　EM发病机制尚不确切, 经血逆流被认为是成因之一。近年来, EM 患者免疫功能异常日益受到重视, 其中 EM 患者腹腔液及外周血中出现高浓度的MCP1在 EM 的发病过程中起重要作用。现有研究表明MCP1是对单核及巨噬细胞强有力的趋化及活化性细胞因子, 在促使随经血逆流的子宫内膜细胞植入、生长、侵袭异位组织中起了重要作用

　　生理条件下，子宫内膜腺上皮和基质细胞均可分泌MCP1。MCP1在腺上皮内的表达明显高于基质细胞。相反，基质细胞在IL1、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IFNr等作用下可表达低组成性但高诱导性的MCP1[2]。MCP1在正常子宫内膜的表达有性激素依赖性，雌孕激素通过调节MCP1的表达而调解子宫内膜中巨噬细胞的迁移。本研究显示异位内膜较正常内膜高表达MCP1，提示异位内膜可能分泌大量MCP1，进一步诱导巨噬细胞活化和募集，参与激活免疫系统，并使EM炎性细胞浸润持久化，从而形成正反馈，扩大EM腹腔内无菌性炎性反应，促进EM的发生发展，并可参与EM不孕的发生。有关异位内膜MCP1表达的机制，目前还不十分清楚，有待进一步研究。

　　在EM的发病机制中, 经血逆流所致子宫内膜碎片异位种植已被人们所接受。虽然经血逆流是一个常见现象, 但 EM 的发生率却只有 10%～15%,这说明还有其它因素决定着女性对 EM 的易感性。大量证据表明，免疫功能及腹腔中内环境的异常在 EM 发病过程中起了重要作用。其中突出的表现是EM 患者腹腔液中含有明显增多的促炎细胞因子、趋化因子及炎性细胞侵润，最明显的是巨噬细胞数量和活性以及MCP1 浓度和趋化活性的增加, 且随病情严重程度而变化。 尤其在发病早期，MCP1 的浓度及趋化活性增加最明显[3,4]。Acci等[5]发现随着EM 病情的加重，MCP1 浓度也逐渐升高。在MCP1 浓度与疾病的严重程度之间有明显正相关。而重度 EM 患者经 GnRHa治疗后，MCP1浓度明显下降。Akoum 等[6]发现EM 患者外周血中MCP1浓度显著高于正常人群, 在 EM发病最初阶段尤其明显。

　　本次试验也证明了EM患者外周血及腹腔液中MCP1浓度显著高于对照组,且以早期患者更为明显。早期高浓度的MCP1通过直接刺激异位内膜细胞增殖,加速异位植入过程,同时增强了对单核巨噬细胞的趋化和活化作用 ,促进EM形成。这不仅证实 MCP1 主要参与 EM早期形成,而且还证实早期高浓度的 MCP1 可促进 EM进一步发展、恶化。MCP1 是与 EM 疾病病理生理机制相关的有重要影响的细胞递质。

　　【参考文献】

　　1 American society for reproduction medicine. Revised American Society for Reproductive MediCine classincation of endometriosis 1996.Fetil Steril,1997,67:817821.

　　2 Mrata M, Arata S, Nose K. Involement of reactive oxygen spesis in the induction of chemokine JE?MCP1 gene by phobol12myristate 13acetate in Balb 3T3 cells.Cell Struct Funct,1997,22:231238.

　　3 Yih S, Katabuchi H,Araki M，et al. Expression of monocyte chemoat tractant protein1 in peritoneal indometriotic cells.Virchows Arch,2001，438:7077.

　　4 Akoum A , Lemay A,McColl S,et al. Elevated concen tration and biologic activity of monocyte chemotactic protein1 in the peritoneal fluid of patients with endometriosis.Fertil Steril,1996, 66:17 23.

　　5 Arici A,Oral E,Attar E，et al. Monocyte chemotactic prote in1concentration in peritoneal fluid of women with endometriosis and its modulation of expression in mesothelial cells.Fertil Steril,1997,67:1065 1072.

　　6 Akoum A,Lemay A,McColl SR, et al. Increased monocyte chemotactic protein1 level and activity in the periphera l blood of women with endometriosis.Am J obstet Gynecol, 1996,66：175176.