Kiss-1蛋白Metastin和MMP-9在宫颈癌中的表达及相关性
发表时间：2011-05-16 浏览次数：354次
作者：谭春燕 作者单位：廉江市人民医院，广东 廉江 524400
【摘要】 目的：探讨Metastin和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白在宫颈癌中的表达及其相关性。方法：采用免疫组化方法检测10例正常宫颈、15例宫颈CIN、52例宫颈鳞癌组织中Metastin和MMP-9的表达，分析其临床意义及两者之间的相关性。结果：宫颈鳞癌组Metastin阳性表达率(40.38%)明显低于正常宫颈组和宫颈CIN组(分别为90%、73.33%;P<0.05)，且Metastin表达缺失与宫颈鳞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，与宫颈鳞癌的年龄、组织学分级无关(P>0.05);宫颈鳞癌组和CIN组MMP-9阳性表达率明显高于正常宫颈组。MMP-9蛋白高表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，与年龄、组织学分级无关(P>0.05);宫颈鳞癌中，Metastin与MMP-9蛋白表达呈显著负相关(r = -0.428，P<0.01)。结论：Metastin、MMP-9可能与宫颈癌的浸润和转移有关，且两者之间可能存在相互作用。
【关键词】 宫颈癌 MMP-9 Metastin Kiss-1 免疫组化
Expression of Metastin,MMP-9 Protein and Relation in CervicaI Carcinoma
TAN Chun-yan
(The People's Hospital of Lianjiang,Guangdong 524400,China)
Abstract: Objective To investigate the expression of metastin and matrix metailoproteinase(MMP-9) and their relationship in cervical carcinoma.Methods The expression of metastin and MMP-9 was examined by immunohistochemical method in 10 cases of normal cervical epilhelia,15 cases of cervical carcinoma in situ(CIN),52 cases of squamous celI carcinoma of cervix(SCC).The relationship between those expression outcomes and the characteristics of clinical pathology of cervical carcinoma was analyzed statistically.Results It was found that the positive rate of metastin expression in SCC group was significantly less than CIN and normal cervix epithelial tissue group(P<0.05),Loss of metastin expression was correlated with clinical stage and lymph node metastasis of SCC(P<0.05),but was not correlated with age of patients and histogical grade of SCC.The positive rate of MMP-9 expression in SCC and CIN group was significantly higher than normal cervix epithelial tissue group (P<0.05),High expression of MMP-9 was correlated with clinical stage and lymph node metastasis of SCC(P<0.05), but was not correlated with age of patients and histogical grade of SCC.The expression of metastin is negatively correlated with MMP-9 in SCC( r = -0.428,P<0.05).Conclusion This data indicated that metastin and MMP-9 expressions may be correlated with the infiltration and metastases of SCC, negative correlation of metastin and MMP-9 indicated that they may have some interaction.
Key words:Cervical carcinoma; MMP-9;Metastin;Kiss-1;Immunohistochemistry
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，它严重威胁着妇女的健康和生命。近年来宫颈癌的发病率有上升趋势，因此早期诊断宫颈癌，预测宫颈癌的侵袭与转移能力极为重要。我们采用免疫组化法检测Metastin和MMP-9在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中的表达，分析它们的临床意义及二者之间的关系，为评价宫颈癌组织侵袭、转移的潜能提出新的有效指标。
1 材料和方法
1.1 对象
收集我院2001年至2006年行手术治疗，术前未经过化疗、放疗及免疫治疗的52例早期宫颈鳞癌和15例宫颈CIN患者作为研究对象。所有病例均按宫颈癌HE病理切片诊断标准确诊和国际妇产科协会(RGO)标准分期。选取10例正常宫颈上皮作为对照。67例患者年龄24岁～68岁，平均43.76岁。52例早期鳞癌中组织学分级I级、II级和III级分别为14例、16例和22例;RGO分期I期和II期分别为20例和32例;有盆腔淋巴结转移为19例。
1.2 方法
1.2.1 试剂
免抗人Metastin单克隆抗体、MMP-9单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新公司，实验操作按试剂盒说明书进行。KiSS-1蛋白Metastin用已知染色阳性的胎盘组织切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。MMP-9用已知染色阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.2 染色特征及阳性结果判定
以细胞膜或细胞质出现棕黄色颗粒沉着为阳性细胞。依据染色阳性细胞所占细胞总数的百分数评分(A)：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分;按染色强度评分(B)：无色为0分，弱染色为1分，中等染色为2分，强染色为3分;总分(A+B)≥3分为阳性表达，<3分为阴性表达。
1.2.3 统计学处理
应用SPSS14.0统计软件进行。计数资料样本率之间的比较采用χ2 检验或Fisher’s确切概率法检验，相关比较采用Spearman等级相关分析统计学处理。取α=0.05为显著性检验水准， P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 Metastin在宫颈鳞癌中的表达及与临床参数的关系
在正常宫颈、CIN及宫颈鳞癌组织中Metastin的阳性表达率分别为90%，73.33%和40.38%。宫颈鳞癌中Metastin的阳性表达率与正常组及CIN组相比明显下降，差异有显著性意义(χ2=11.313,P<0.01);正常组和CIN组中Metastin阳性表达率的差异无显著性意义(χ2=1.042,P>0.05);CIN组和宫颈鳞癌组中metastin阳性表达率的差异有显著性意义(χ2=5.066,P<0.01)。Metastin表达减少与宫颈鳞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、组织学分级无关(P>0.05)。
2.2 MMP-9在宫颈鳞癌中的表达及与临床参数的关系
在正常宫颈、CIN及宫颈鳞癌组织中MMP-9的阳性表达率分别为20%，60%和71.15%。在宫颈鳞癌和CIN组中MMP-9的阳性表达率与正常宫颈组相比明显升高，差异有显著性意义(χ2=9.391,P<0.01);宫颈鳞癌和CIN组中MMP-9阳性表达率的差异无显著性意义(χ2=0.673,P>0.05);正常组和宫颈鳞癌组中MMP-9阳性表达率的差异有显著性意义(χ2=9.405，P<0.01)。MMP-9蛋白高表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、组织学分级无关(P>0.05)。
2.3 宫颈癌组织中Metastin和MMP-9表达的关系
经Spearman等级相关分析，宫颈癌组织中Metastin与MMP-9的表达呈显著负相关(r=-0.428,P<0.01)(见表1)。表1 Metastin 和MMP-9的表达与宫颈癌临床、病理特征的关系(略)
3 讨论
Kiss-1是新近发现的一种肿瘤转移抑制基因, Kiss-1蛋白Metastin与其受体GPR54 结合后引起一系列生理生化改变,从而抑制肿瘤转移[1]。Sanchez-Carbayo [2]等报道在膀胱癌, Kiss-1的表达与肿瘤的组织病理分期紧密联系在一起, 在转移性的膀胱癌Kiss-1是完全缺失的, Kiss-1的表达率提供了患者的预后信息, 提示可以通过Kiss-1的表达水平来预测患者的预后。 Dhor[3]等应用原位杂交分析Kiss-1在胃癌及临近的正常胃黏膜的定位表达情况, 发现低表达组脉管浸润、远处转移、肿瘤复发率更高, 总体生存率及无瘤生存率更低(P<0.01), 差异有极显著性差异意义。张淑兰[4]等发现Kiss-1在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织，而且Kiss-1在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达与手术病理分期和淋巴结转移明显相关。我们的研究结果表明在正常宫颈组织到CIN到宫颈癌进展过程中，虽然正常宫颈组和CIN组的Metastin表达率差异无显著意义。但宫颈癌Metastin表达率较正常组和CIN组都低，差异有显著意义。且宫颈癌中Metastin表达减少与宫颈鳞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，与年龄、组织学分级无关(P>0.05)，提示Metastin与宫颈癌的浸润和转移有关。
肿瘤细胞的浸润和转移是一个复杂的过程,首先要降解细胞外基质及基底膜,这一过程主要依赖于蛋白水解酶。MMP-9是一种重要的蛋白水解酶,对细胞外基质有广泛的降解作用,在肿瘤转移过程中发挥重要作用。Argüello-Ramirez 等[5]将宫颈癌的切除物培养48 h后，测定其中MMP-9的表达，发现在宫颈癌中MMP-9的浓度明显高于正常宫颈组和CIN组。Sheu[6]等研究发现MMP-9在宫颈鳞癌和高度上皮内瘤变中的表达显著高于正常宫颈上皮(P<0.01)，其表达与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤复发有关。我们的研究表明在正常宫颈、CIN及宫颈鳞癌组织中MMP-9的阳性表达率分别为20%，60%和71.15%。宫颈鳞癌和CIN组MMP-9的阳性表达率与正常宫颈组相比明显升高(P<0.01)。MMP-9蛋白高表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，与年龄、组织学分级无关(P>0.05)。与前人的研究结果相同。
Takino[7] 等研究MMP与Metastin之间的关系时，发现原MMPs能与kiss-1蛋白形成复合物，干扰kiss-1蛋白加工成Metastin。激活的MMPs能够裂解Metastin和kiss-1多肽，使其失去配体活性，显示MMPs对Metastin蛋白的负性调节作用。Yan[8]等的研究也表明 Kiss-1干扰MMP-9表达，二者之间存在相互调节。我们的研究表明宫颈癌组织中Metastin与MMP-9的表达呈显著负相关，提示在宫颈癌侵袭和转移过程Kiss-1和MMP-9可能存在相互作用。
恶性肿瘤的转移过程是非常复杂的, 浸润和转移是判断恶性肿瘤患者预后的重要指标。在宫颈癌的浸润和转移过程中, Kiss-1的表达缺失以及MMP-9的表达增加是促进肿瘤浸润和转移的重要因素。因此对Kiss-1及MMP-9 进行深入、广泛的研究,了解肿瘤浸润和转移的具体机制,可为肿瘤的临床治疗提供理论依据。
【参考文献】
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[4]张淑兰, 于艺,姜 涛,等.卵巢上皮性癌组织中Kiss-1基因及其受体GRP 54 mRAN的表达及其意义[J].中华妇产科杂志, 2005,40(10):689-692.
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