紫癜性肾炎患者血清中TNFα、TGFβ1和IL6表达

　　作者：陈冬平　　作者单位：上海长征医院肾内科，上海

　　【关键词】 紫癜性肾炎;肿瘤坏死因子(TNF)α;TGFβ1;白细胞介素(IL)6;酶联免疫吸附试验

　　过敏性紫癜是一种常见的毛细血管变态反应性出血性疾病，临床特点为非血小板减少性紫癜，而紫癜性肾炎为其严重并发症，预后较差。有研究显示炎性细胞因子在紫癜性肾炎患者中表达异常。肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL6)是促炎细胞因子，在过敏性紫癜发病中有重要作用〔1〕;而转化生长因子β1(TGFβ1)是具有激素样活性的多肽，存在于巨核细胞和血小板a颗粒内，在紫癜发生发展过程中具有一定促进作用〔2〕。本文拟观察紫癜性肾炎患者血清中TNFα、TGFβ1和IL6的表达并探讨其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床材料 2008年1月至2009年12月我院确诊紫癜性肾炎患者53例，其中男29例，女25例，年龄24～68(平均42.1)岁，检测前均未接受激素及免疫抑制剂治疗。另选取40例过敏性紫癜患者的血清和40例正常成人血清作为正常对照组。3组性别构成、年龄、体重等因素无显著差别，具有可比性。

　　1.2 TNFα、TGFβ1和IL6的检测 紫癜性肾炎组及过敏性紫癜组患者在确诊次日早晨空腹抽取静脉血10 ml，经枸橼酸钠抗凝后，以3 000 r/min离心10 min，留取血浆，于零下20℃冰箱中冻存备用;正常对照组采血及保存方法同上，并均在取血后1个月内集中检测。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中TNFα、TGFβ1和IL6表达。具体步骤：①包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5～20 μg/ml)各0.3 ml加于微反应板每个凹孔中，37℃水浴2～3 h，贮存冰箱。②洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温20)洗3次，每次5 min。③加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2 ml，37℃，作用1～2 h。重复洗涤1次。④加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2 ml，37℃作用1～2 h。重复洗涤1次。⑤加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔，(O.P.D或O.T)，室温作用30 min(另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂)。⑥加终止剂：每凹孔加2 mol/L H2SO4或2 mol/L枸橼酸0.05 ml。⑦记录结果：目测或用酶标比色计测定OD 492 nm值。

　　1.3 统计学方法 计数资料用x±s表示，应用SAS6.12统计软件进行两组间t检验，多组间方差分析及线性相关分析。

　　2 结 果

　　2.1 TNFα、TGFβ1和IL6在各组中的表达 紫癜性肾炎组患者血清中TNFα、TGFβ1和IL6的表达较正常对照组和过敏性紫癜组明显增高(P<0.01,P<0.05)，过敏性紫癜组与正常对照组间血清中TNFα、TGFβ1和IL6的表达亦有显著差异(P<0.05)，见表1。表1 各组TNFα、TNFβ1和IL6表达水平比较(x±s)与正常对照组比较：1)P<0.01，2)P<0.05;与过敏性紫癜组比较：3)P<0.05

　　2.2 紫癜性肾炎组不同类型患者TNFα、TGFβ1和IL6表达的比较 紫癜性肾炎组中重型TNFα、TGFβ1和IL6的表达明显高于轻、中型(P<0.05)，见表2。表2 紫癜性肾炎组不同类型患者TNFα、TGFβ1和IL6表达水平比较(x±s)

　　2.3 紫癜性肾炎组患者血清中TNFα、TGFβ1和IL6表达的关系 经线性相关分析显示，紫癜性肾炎组中TNFα和IL6呈正相关(r=0.51,P<0.05)。而紫癜性肾炎组中TNFα和 TGFβ1、TGFβ1和IL6的表达未见明显相关性(P>0.05)。

　　3 讨 论

　　过敏性紫癜临床常见，紫癜性肾炎是免疫复合物介导的系统性小血管炎，血管壁因免疫损伤而通透性升高，血液淋巴渗出，同时可引起皮肤黏膜、内脏器官等多部位病变。有观点认为免疫复合物在多脏器小血管壁和肾小球基底膜上沉积，激活补体释放各种细胞活性因子、过敏素，诱发无菌性小血管炎症，增加其通透性，从而导致包括肾脏在内的多脏器炎症反应〔3〕。TNFα是由单核巨噬细胞分泌的具有多种生物活性的多肽调节因子，既参与机体的免疫防御功能，又作为机体的炎症、损伤、甚至休克发病的重要介质，过敏性紫癜患者可通过Ⅰ、Ⅲ型变态反应，损伤毛细血管内皮细胞，使TNFα分泌增加〔4〕。IL6是由活化的单核巨噬细胞、活化的T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞和肾小球系膜细胞等产生，其主要的生物功能有诱导B细胞分化和IgG的分泌，刺激各种细胞增殖，诱导巨核细胞成熟，使炎症时血小板数量增高，促进过敏性紫癜的发展〔5〕。适量的TNFα参与机体的正常免疫调控，但过量的TNFα则作为一种炎性介质和休克介质，参与免疫病理损伤，而过敏性紫癜急性期时TNFα表达增高〔6〕。TGFβ1是经双硫键联结的具有多种生理功能的多肽，是转化生长因子β的一种异构体，在多种疾病发生发展中具有重要的作用。

　　本实验结果提示TNFα、TGFβ1和IL6在紫癜性肾炎发生发展中具有重要作用。由于分型与病情轻重有关，而TNFα、TGFβ1和IL6在重型中高表达，因此，其表达增高，可能提示预后不良，早期联合检测TNFα、TGFβ1和IL6可能对判断紫癜性肾炎病情有一定价值。IL6和TNFα呈正相关性，提示二者可能存在协同作用。由于肾炎后形成的免疫复合物、内毒素均可刺激单核巨噬细胞系统和血管内皮细胞不断产生TNFα和IL6等因子，通过直接启动炎症反应或通过刺激其他炎症介质的释放，触发级联反应，导致患者血清中TNFα和IL6水平明显升高。在紫癜性肾炎发生发展中，细胞因子的明显变化，主要源于TNFα作为核心因子起的作用，并诱导IL6释放。因此，治疗中可以针对IL6及TNFα的协同作用进行阻断，或根据患者的免疫状态，调控炎症反应进行治疗。

　　总之，紫癜性肾炎患者血清中TNFα、TGFβ1和IL6表达增高，3种蛋白可能参与紫癜性肾炎的发生发展，TNFα和IL6具有协同效应，联合检测TNFα、TGFβ1和IL6的表达可能对判断病情严重程度有一定意义。

　　【参考文献】

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