雌、孕激素受体与妊娠滋养细胞肿瘤预后的相关性

　　作者：安瑞芳，张晓华，李 瑾，李艳萍 作者单位：1. 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西西安 710061;2. 咸阳市中心医院妇科，陕西咸阳 712000;3. 陕西省人民医院妇产科，陕西西安 710061

　　【摘要】 目的 探讨雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)在妊娠滋养细胞肿瘤(GTT)中的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学(SP)法检测34例GTT中ER、PR的表达情况，以正常早孕绒毛20例、葡萄胎首次清宫组织30例为对照。结果 在正常早孕绒毛、葡萄胎、GTT组织滋养细胞中，ER 的阳性表达率分别是85.00%、83.33%、44.12%，随着滋养细胞恶性程度的增加ER染色阳性细胞数及染色强度降低且差异有统计学意义(P<0.01);PR在正常早孕绒毛、GTT组织滋养细胞中无表达,在葡萄胎中表达很少，PR染色与滋养细胞恶性程度无关(P>0.05)。在GTT组织中，ER与临床病理特征密切相关(P<0.05)。结论 ER表达与GTT恶性程度相关，提示对ER的监测有助于判断疗效及预后，且为GTT的激素治疗提供了可行性的理论依据。

　　【关键词】 妊娠滋养细胞肿瘤;葡萄胎;雌激素受体;孕激素受体

　　and progesterone receptor in gestational trophoblastic tumorAN Ruifang1, ZHANG Xiaohua2, LI Jin3, LI Yanping2

　　(1. Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital,

　　Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061; 2. Department of Gynecology,

　　the Central Municipal Hospital of Xianyang, Xianyang 712000; 3. Department of Obstetrics

　　and Gynecology, Shaanxi Provincial Peoples Hospital, Xian 710061, China)ABSTRACT: Objective To explore the expression of estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) in gestational trophoblastic tumor (GTT) and their significance. Methods The expression of ER and PR in 34 cases of GTT was detected by immunohistochemical method; 20 cases of normal villi and 30 cases of hydatiform mole served as controls. Results The positive expression rate of ER in normal villi, hydatiform mole and GTT was 85.00%, 83.33% and 44.12%, respectively, and had positive correlation with the malignance degree of GTT. The positive expression rate of PR in normal villi, hydatiform mole and GTT was little. The expression of ER was closely related to these clinicopathological features of GTT (P<0.05). Conclusion The expression of ER was associated with the development and malignance of GTT. The monitoring of ER is valuable in judging the curative effect and predicting the prognosis of GTT. In addition, they could provide the theoretical foundation and experimental evidence for further hormone therapy.

　　KEY WORDS: gestational trophoblastic tumor; hydatidifore mole; estrogen receptor; progesterone receptor

　　妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic tumor, GTT)包括侵袭性葡萄胎、绒癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤，其恶性程度高、转移早，如果能早期诊断且给予及时有效治疗，不仅能够被治愈而且大部分患者的生育能力也能够被保存[1]。由于病因至今不明，所以早期确定GTT的性质、及时化疗、判断化疗效果及预测病变转归是治疗的关键。近年来，越来越多的研究表明雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)的低水平表达与多种人类肿瘤的发生发展、侵袭转移密切相关。本文采用免疫组化法检测ER、PR在GTT中的表达，旨在探讨二者与GTT预后的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 选择1996年12月至2006年12月西安交通大学医学院第一附属医院妇产科GTT组织标本34例作为研究组，其中侵蚀性葡萄胎24例，绒毛膜癌10例，GTT组织标本中化疗超过2个疗程者16例，未化疗及化疗少于或等于2次者18例。以正常早期妊娠(6～12周)人流绒毛组织20例、葡萄胎首次清宫标本30例作为对照组。患者年龄15～50岁，平均32岁。

　　1.2 主要试剂 鼠抗人ER单克隆抗体、鼠抗人PR单克隆抗体均为美国Santa Cruz生化公司产品;SP试剂盒为美国ZYMED公司产品。

　　1.3 标本的制备及免疫组化染色 取上述GTT患者首次清宫标本或切除的子宫标本上病灶所在部位组织，用100mL/L甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4μm，ER、PR的检测采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化酶法(strepvavidinperoxidase, SP)。阴性对照：以PBS代替第一抗体;阳性对照：用北京中杉金桥生物技术有限公司的ER、PR阳性片。

　　1.4 结果判断 ER、PR阳性细胞均呈黄色、棕黄色或棕褐色染色，染色明显高于背景的滋养细胞。ER、PR定位于胞核和(或)胞质和(或)胞膜。观察阳性反应采用双盲半定量法，采用显色强度结合阳性百分率判断结果[2]。随机选取 5 个高倍视野(×400)记数每个视野内滋养细胞总数和阳性细胞个数，得出阳性细胞百分率。根据以下标准将染色细胞数量分为4级：0级：即阴性，阳性细胞数0，细胞内无棕黄色颗粒出现;(+)级：即弱阳性，阳性细胞数1%～10%，细胞内出现阳性染色;()级：即中度阳性，阳性细胞数11%～30%介于弱阳性和强阳性标准之间;()级：即强阳性，阳性细胞数>30%。

　　1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行卡方或列联表分析处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 ER在正常绒毛及葡萄胎、GTT中的表达 ER阳性表达主要定位于细胞质，呈棕黄色颗粒状着色，同时有少量细胞核、细胞膜及细胞间质着色。在正常绒毛、GTT组织中，ER主要表达于滋养细胞中，同时有少量细胞间质及平滑肌细胞着色(图1)。结果表明，ER在正常早孕绒毛组织、葡萄胎、GTT中表达阳性细胞率分别是85.00%、83.33%、44.12%。提示ER表达随着滋养细胞恶性程度的增加其染色阳性细胞数及染色强度降低，ER表达与滋养细胞恶性程度相关(P<0.01)。正常早孕绒毛组与GTT组、葡萄胎组与GTT组阳性率之比各组间差异有统计学意义(P<0.01);正常早孕绒毛组与葡萄胎组组间比较差异无统计学意义(P>0.05，表1)。

　　2.2 PR在正常早孕绒毛及葡萄胎、GTT组织中的表达 PR阳性表达主要定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状着色，同时有少量细胞质、细胞膜及细胞间质着色。PR在正常绒毛及GTT组织的细胞间质、蜕膜组织及平滑肌细胞中有强弱不等的表达，在正常绒毛及GTT组织的滋养细胞中无表达,在葡萄胎组织的滋养细胞中有少量表达(图2)。结果表明，PR在正常早孕绒毛组织、葡萄胎、GTT组织中表达阳性细胞率分别是0、3.33%、0。提示PR表达与滋养细胞恶性程度无关，各组阳性率之比差异无统计学意义(P>0.05，表2)。表2 PR在正常绒毛、葡萄胎和GTT中的表达

　　2.3 ER与GTT临床病理特征的关系 我们在ER与GTT临床病理特征的关系研究中,采取了2002年改良FIGO(WHO)GTT高危因素评分标准，≤6分为低危，≥7分属高危，取消中危的分组，血型在评分中不起作用。因GTT临床手术前常规采取化疗，本研究将术前化疗患者分为≤2个疗程组及>2个疗程组进行比较。ER的阳性表达与GTT的临床分期、预后评分、肌层浸润深度、术前化疗明显相关，各组之间差异有统计学意义(P<0.05，表3)。表3 ER的阳性表达率与GTT临床病理特征的关系

　　2.4 ER表达与侵袭性葡萄胎病理组织学分型的关系 ER的阳性表达与侵袭性葡萄胎病理组织学分型明显相关，在Ⅲ型中比Ⅰ+Ⅱ型中显著降低(P<0.01，表4)。表4 ER表达与侵袭性葡萄胎病理组织学分型的关系

　　3 讨 论

　　ER、PR是对雌、孕激素有高度亲和力的蛋白质，均属类固醇激素受体超家族的成员，雌、孕激素的作用可以通过ER、PR表现出来。靶器官组织对雌、孕激素的反应程度与该组织细胞内相应受体含量呈正相关。在分子水平上ER与内源性配体(如雌激素)或其他配体(如抗雌激素和植物雌激素)发生反应,进而活化一系列靶基因,调控靶组织(器官)某些正常生理功能(如维持骨密度、生殖器官的发育)的发挥和某些肿瘤的发生、发展过程。ER能够有效抑制肿瘤细胞增殖，在癌细胞转移、增殖、凋亡等过程中发挥重要作用。PR在孕激素缺乏的状态下，激活与分化有关的靶基因转录，对组织细胞的再生、生长发育，蛋白质合成及DNA的复制起着重要作用。PR蛋白可引起和增强性激素对ER的反应，起到促进和协同作用。对ER、PR的表达位置认识尚有分歧。目前，有些研究认为ER、PR存在于细胞核，但更多研究认为ER、PR存在于细胞核和(或)细胞质和(或)细胞膜[3]。

　　研究发现ER、PR不仅在经典靶器官(如乳腺、子宫内膜、宫颈、卵巢、输卵管、前列腺、睾丸)肿瘤上存在，而且在非靶器官(如口腔、喉、甲状腺、肝、胰腺、结肠、直肠、膀胱等)肿瘤也存在，组织中存在的ER、PR随肿瘤恶性程度的增加其阳性表达减少，且ER、PR的状态又与这些器官恶性肿瘤的分化程度、病理类型、临床分期、预后及对内分泌治疗的反应有着密切联系[4]。在非雌激素靶器官肿瘤中，除胃癌之外，ER阳性的肿瘤在生物学行为及预后一般都有较好的趋势。GAO等[5]发现化疗药物诱导耐药的同时可以使ER表达下调或失表达，而且细胞生长速度减慢，故对以ER为靶点的内分泌治疗不敏感。ER转染耐药乳腺癌细胞后，使其表达ER蛋白，可以部分恢复对化疗药的敏感性。但是，也有一些不同观点。有报道称ER、PR可以促进卵巢癌组织中微血管生成,进而促进肿瘤的临床进展与转移[6]。

　　妊娠滋养细胞肿瘤是细胞滋养细胞、中间滋养细胞以及合体滋养细胞混合性增生的恶性肿瘤，合体滋养细胞是滋养细胞中分化最好的类型，也是一种对雌激素反应敏感的组织。对ER、PR与GTT的关系国内外文献报道不多且有明显争议。JIANG等[7]报道雌二醇能刺激BeWo绒癌细胞的增殖，增加DNA合成期细胞所占的百分率，推测ER有促进人绒癌细胞生长发育的作用。WANG等[8]在对胎盘绒癌细胞BeWo细胞的研究中发现雌二醇能通过ER下调乳腺癌耐药蛋白的表达，孕激素能通过PR上调乳腺癌耐药蛋白的表达，雌孕激素协同能增加乳腺癌耐药蛋白的表达。SHALAKANY等[2]的研究表明妊娠滋养细胞疾病(gestational trophoblastic disease, GTD)患者中按照疾病从良性、低度恶性到恶性的进展过程，ER、PR表达水平有从高到低下降的趋势，在同一种GTT中随细胞分化程度降低，ER、PR表达水平有从高到低下降的趋势;ER、PR的阴性表达与GTT形成相关。这些结果显示妊娠滋养细胞肿瘤的恶性转变及ER、PR的阴性表达密切相关，对其进行检测在GTT评价预后方面有一定价值。

　　本研究提示ER表达在正常早孕绒毛、葡萄胎、GTT组织中随着滋养细胞恶性程度的增加其染色阳性细胞数及染色强度降低，ER表达与GTT的临床分期分型、预后评分、肌层浸润深度、术前化疗明显相关;PR表达与GTT的临床分期分型、预后评分、肌层浸润深度、术前化疗无关。ER表达随着GTT恶性程度的增加表达降低，提示对ER的监测有助于GTT的临床疗效及预后的判断。ER有可能成为一种新型GTT肿瘤分子标记物。通过对ER作用机制的研究，也许可以开发出特异地以ER为作用靶点的更有效更安全的抗癌药物。

　　植物雌激素是指某些能结合并激活哺乳类动物及人类的ER，从而具有雌激素样和(或)抗雌激素活性的植物成分。PLESSOW等[9]的研究显示：低剂量的植物雌激素能够轻度抑制绒癌细胞BeWo和Jeg3的增殖但增加绒毛膜促性腺激素(HCG)的产生，而HCG能够诱导肿瘤新生血管的形成;高剂量的植物雌激素能够明显抑制绒癌细胞的增殖，摄取高剂量的植物雌激素可能对GTT的预防和治疗有很大作用。ABARZUA等[10]的研究显示亚麻根部含有的植物雌激素能够明显抑制绒癌细胞生长。以上结论与我们的研究结果一致，均提示避孕药在GTT中的应用有一定可行性。对甾体激素受体与GTT关系的研究有很大的临床应用空间，值得进一步深入探讨。

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