NF-κBp 65和HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

　　作者：万金华 马生秀 蔺小倩 作者单位：1.青海大学医学院;2.青海大学附属医院妇科

　　【摘要】 目的 探讨宫颈鳞癌组织中NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表达水平及临床病理意义。方法 采用免疫组织化学(PowerVision TM)二步法对56例宫颈鳞癌和25例正常宫颈组织进行NF-κB p65、HIF-1α蛋白检测。 结果 宫颈鳞癌组织NF-κB p65、HIF-1α的表达均高于对照组正常宫颈组织(P<0.01)。NF-κB p65的蛋白表达与患者的病理分级及有无淋巴转移存在相关性(P<0.05);HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移存在相关性(P<0.05)。NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表达呈正相关(r=0.439,P<0.01)。 结论 联合检测NF-κB p65和HIF-1α蛋白表达对诊断宫颈鳞癌的意义优于单纯检测NF-κB p65或HIF-1α蛋白表达。

　　【关键词】 宫颈鳞癌 免疫组织化学 NF-κB p65 HIF-1α

　　EXPRESSIONS OF NF-κBp65 AND HIF-1ΑIN TISSUE

　　OF CERVICAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA AND

　　ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

　　Wan Jinhua1 Ma Shengxiu2 Lin Xiaoqian

　　1.The Medical College of Qinghai University;

　　2.Department of Gynecology, The Affiliated Hospital of Qinghai University

　　Abstract Objective To explore the relationship between expression of NF-κB p65 and HIF-1α in tissue of cervical squamous cell carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of NF-κB p65 and HIF-1α were examined by immuohistochemical staining in 56 specimens of cervical squamous cell carcinoma and 25 specimens of normal cervical tissue. Results The expression rates of NF-κB p65 and HIF-1α in cervical squamous cell carcinoma appeared significantly higher than that in normal cervical tissue ( P < 0. 01) . Expression of NF-κB p65 was correlated with histological grade and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05); Expressions of HIF-1α was correlated with clinical stage and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05). HIF-1αexpression was positively correlated with NF-κB p65 expression (r=0.584, P<0.01). Conclusion The combination of NF-κB p65 and HIF-1α expression in tissue of cervical squamous cell carcinoma shown much more valuable diagnostic indicator than either NF-κB p65 or HIF-1α alone.

　　Key words Cervical carcinoma Immunohistochemistry NF-κB p65 HIF-1α

　　NF-κB(nuclear facter-kappaB， NF-κB)被发现在控制免疫和炎症反应中具有重要作用：能抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤细胞的增殖[1 ]。在人体内，NF-κB多为由p65(RelA)和p50组成的异源二聚体，是能调节多种基因表达的蛋白分子。资料表明人类许多不同组织来源的肿瘤中均有不同程度的NF-κΒ被异常激活[2]。HIF-1α(hypoxia-include factor 1α,HIF-1α)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子,在肿瘤血管生成中起核心调控作用[3]。本研究旨在探讨联合检测NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表达对早期诊断宫颈鳞癌的意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料

　　随机选取2006年10月至2008年4月在青海大学附属医院肿瘤妇科住院治疗的56例宫颈鳞癌患者的手术切除标本(取标本前未行放、化疗)。中位年龄48岁(26～69岁) ; 藏族妇女25例，汉族妇女31例;根据国际妇产科联盟( FIGO) 分期标准判定,其中原位癌(0 期) 5例, I 期17 例, II 期21例，Ⅲ期13例;根据WHO标准组织分级标准判定，Ⅰ级(高分化)16例，Ⅱ级(中分化)21例，Ⅲ级(低分化)19例。正常对照组25例,中位年龄42岁(32～54岁) ,标本为子宫肌瘤患者行手术切除的正常宫颈组织，标本均经组织病理学确诊。

　　1.2 主要试剂

　　NF-κB p65单克隆抗体浓缩液购自Santa Cruze 公司; 鼠抗人HIF-1α单克隆抗体、PV-9000 二步法免疫组化检测试剂及浓缩型DAB 底物试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3 实验方法

　　标本来自青海大学附属医院病理科宫颈癌瘤组织石蜡标本，所有标本连续切片3张，厚4 μm。NF-κB p65、HIF-1α检测均采用PV-9000二步法免疫组织化学方法检测，具体步骤参照说明书进行。NF-κB p65浓缩液稀释100倍使用，HIF-1α为工作液。以正常宫颈组织为阴性对照，以PBS液替代一抗作空白对照。

　　1.4 结果判定

　　NF-κB p65、HIF-1α免疫组化染色均以细胞核或细胞浆染成棕褐色或黄色者为阳性。见图1及图2。双盲法随机选取5个高倍镜(×400)视野进行计数及评分。根据染色显色强度与及阳性细胞比例进行综合评分[4] : ①根据着色深浅评分:无色或蓝色为0 分,浅黄色为1 分,棕黄色为2 分,棕褐色为3 分; ②着色细胞占计数细胞百分率: ≤5 %为0 分, > 5 %～25 %为1分, >25 %～50 %为2 分, > 50 %为3 分; ③染色分值综合判断: 阳性细胞着色深浅分值( ①与②的积) , 结果0 分为阴性,1～3 分为+ ,4～6 分为+ + , 9分为+ + + 。

　　1.5 统计学方法

　　应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，统计推断采用χ2检验和Spearman 等级相关分析，以 P<0.05作为差别有显著意义的检验标准。

　　2 结果

　　2.1 NF-κB p65、HIF-1α在宫颈组织中的表达

　　NF-κB p65、HIF-1α均可在细胞核和细胞浆中呈阳性表达，其表达率分别为69.6%(39/56)，71.4%(40/56)，以上两者与对照组正常宫颈组织相比，差异均有统计学意义(P<0.01)。详细结果见表1。 表1NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌和正常宫颈组织中的表达

　　2.2 NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素的关系

　　NF-κB p65的过表达与宫颈鳞癌的分化程度及盆腔淋巴转移有关，差异有统计学意义，P<0.05;但与年龄、临床分期及民族差异无显著性，P>0.05。而HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移相关，差异有统计学意义，P<0.05;与年龄、组织学分级以及民族差异无显著性，P>0.05。详细结果见表2。表2NF-κB p65、HIF-1α与宫颈鳞癌的临床病理指标关系

　　2.3 宫颈鳞癌组织中NF-κB p65与HIF-1α蛋白表达的相关性

　　Spearman 等级相关分析显示，NF-κB p65的表达与HIF-1α的表达呈明显正相关(rs=0.584,p=0.001)。详细结果见表3。表3NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌组织中表达的相关性分析

　　3 讨论

　　本研究结果显示NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P<0.01)。在高、中、低分化的宫颈鳞癌组织中NF-κB p65的阳性表达率差别有显著性，P<0.05。在有盆腔淋巴结转移的宫颈鳞癌患者的阳性表达率明显高于无转移的宫颈鳞癌患者的阳性表达率，P<0.05。而NF-κB p65的阳性表达与患者的年龄及临床分期无关(P>0.05)，该结果与文献[5， 6]研究结果相似。本研究结果表明NF-κB p65的异常表达与宫颈鳞癌的病理学类型及转移过程相关。

　　HIF-1 在缺氧诱导下激活翻译基因编码血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)、糖酵解酶等多种靶基因的表达，在肿瘤血管生成与侵袭中起重要作用[7]。本研究结果也显示HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率为68.9%，而在对照组正常宫颈组织中无表达，差异有显著性，P<0.01。本实验结果也显示HIF-1α的蛋白阳性表达与患者的临床分期及有无淋巴转移有关(P<0.05);而与患者的年龄和病理分级无关(P>0.05)。该结果与徐军等[8]的研究结果相似。提示HIF-1α的异常表达与宫颈鳞癌的发展及转移相关。

　　本研究对25例藏族及31例汉族宫颈癌患者NF-κB p65的蛋白阳性表达进行比较，其阳性率分别为80.0%、63.1%;而HIF-1α蛋白阳性表达率分别为72.0%、70.9%，均无统计学差异(P>0.05)。暂且考虑在不同民族间NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表达不存在显著性差异，其最终结论有待于进一步扩大样本和进行不同地域的民族之间的研究认定。

　　文献报道NF-κB为HIF-1α的上游基因并对HIF-1α的表达及维持其活性起着重要作用[9]。 本研究对NF-κB p65和HIF-1α在宫颈癌中蛋白表达的相关性研究显示，宫颈癌中NF-κB p65与HIF-1α的蛋白表达呈明显正相关(rs=0.584,P<0.01), 提示NF-κB p65可能调控并促进HIF-1α基因表达，共同参与了宫颈癌的发展及转移过程。

　　【参考文献】

　　[ 1 ]Karin M. NF-kappaB and cancer: mechanisms and targets[J].Mol Carcinog, 2006, 45(6): 355-361

　　[2] Amit S, Ben-Neriah Y. NF-kappaB activation in cancer: a challenge for ubiquitination and proteasome-based therapeutic approach [J]. Semin Cancer Biol, 2003, 13 (1): 15-28

　　[3] Minet E, Michel G，Remacle P, et al.Role of HIF-1 as a transcription factor involved in embryonic development, cancer progression and apoptosis[J].Int J Mol Med,2000,5:253-259

　　[4 ] 林巧爱，陈向敏，夏克栋，等.NF-κB、COX-2在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16感染的关系[J].癌变 畸变突变，2007，19(2)：113-115

　　[5]Nair A, Venkatramanl M, Maliekall TT, et al. NF-κB is constitutively activated in high grade squamous intraepithelial lesions and squamous cell carcinomas of the human uterine cervix[J]. Oncogene, 2003,22(1):50-58

　　[6] 贾海军，谢灵遐，胡丽娜，等.宫颈鳞状上皮癌变过程中Id-1和NF-κB的表达及其相关性[J].华西医学，2008，23(2)：301-303

　　[7]Maxwell P H, Dachs G U, Gleadle J M,et a1.Hypoxia-inducible factor 1 modulates gene expression in solid tumors and influences both angiogenesis and tumor growth[J]. Pro Natl Acad Sci U S A,1997,94: 8104-8109

　　[8]徐　军，施红旗，刘庆伟，等.HIF-1α、VEGF在宫颈鳞癌中的表达及临床意义[J].浙江实用医学，2006，11(1)：6-8

　　[9]van Uden P, Kenneth N S, Rocha S. Regulation of hypoxia-inducible factor-1alpha by NF-kappaB[J]. Biochem J. 2008 Jun 15;412(3):477-484