习惯性自发性流产女性的染色体结构稳定性研究
发表时间:2010-01-12 浏览次数:447次
作者:宋文沁,孙璐,穆灵敏,崔磊,关慧丹,王海,罗德钦,冯随忠,任太芳,赵会玲 作者单位:1.新乡医学院基础医学院本科2005级,河南 新乡 453003; 2.新乡医学院形态学实验室,河南 新乡 453003; 3.新乡医学院护理学院本科2004级,河南 新乡 453003; 4.新乡医学院心理系本科2005级,河南 新乡 453003; 5.新乡医学院第三附属医院妇产科,河南 新乡 453003; 6.新乡市中心医院妇产科,河南 新乡 453000 【摘要】 目的 分析习惯性自发性流产女性和正常女性的染色体结构稳定性的不同,为提高生育质量提供理论依据。方法 随机选择习惯性自发性流产的女性20人为观察组及正常的育龄女性20人为对照组,对其外周血淋巴细胞按姐妹染色单体互换(SCE)检测方法、微核检测方法及染色体断裂检测方法进行培养检测,分别记数SCE发生率、微核出现率及染色体断裂发生率。结果 观察组的外周血淋巴细胞SCE发生率和微核出现率明显高于对照组(P<0.05);观察组的外周血淋巴细胞的染色体断裂发生率与对照组比较差异不明显(P>0.05)。结论 SCE发生率和微核出现率可以作为经常暴露在易致DNA损伤的环境下发生习惯性自发性流产女性染色体结构稳定性的检测指标。
【关键词】 习惯性自发性流产;姐妹染色单体互换;微核出现率;染色体断裂发生率
Study the stability of chromosome structures in women with recurrent spontaneous abortions
SONG Wen-qin,SUN Lu,MU Ling-min,et al
(1.Grade 2005,Basic Medical College of Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,China;2.Morphologial Laboratory,Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,China)
Abstract: Objective To analyze the difference of stability of chromosomic structure between women with recurrent respontaneous abortions and normal women at childbearing age in order to provide the theory basis for the enhancement birth quality.Methods Twenty women with recurrent spontaneous abortions and twenty normal women with childbearing age were selected randomly as observation group and control group respectively.The peripheral blood lymphocytes from them were cultivated and detected by sister chromatid exchanges(SCE) micronucleus test method and chromosome breakage test method.And the incidence of SCE,the frequency of micronucleus and the incidence of chromosome breakage were recorded.Results The incidence of SCE and the frequency of micronucleus in observation group were higher than that in control group(P<0.05),but there was no significant difference in the incidence of chromosome breakage between two groups(P>0.05).Conclusion The incidence of SCE and the frequency of micronucleus can be used as the detective index of chromosome′s structural stability of women with recurrent spontaneous abortions who are exposed to the environment which can results in DNA damage. Key words: recurrent spontaneous abortions;sister chromatid exchange;micronucleus;chromosomal breakage 多次在22周以前发生流产,胎儿体质量小于500 g,称为习惯性自发性流产。本病是妇科常见病,其原因除感染、免疫反应外,染色体畸形引起者占5%~6%,其发生率为存活新生儿染色体畸变率的10倍[1]。引起染色体畸变的因素较多,包括物理胁迫因子(如射线、噪音等)、化学胁迫因子(如重金属、非诱变剂等)、生物胁迫因子(如病毒)等[2]。对流产、死产和一般群体染色体异常的流行病学调查发现,早期流产者染色体异常发生率为61.5%,晚期流产者染色体异常率为5%,在死产和新生儿死亡者中染色体异常发生率为6.2%,在一般人群中染色体异常占0.5%[3]。鉴于此,作者通过分析习惯性自发性流产女性和正常女性染色体结构稳定性的不同,以期为提高生育质量提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2007年3月至2008年3月新乡医学院第三附属医院和新乡市中心医院就诊的习惯性自发性流产女性20例为观察组,均符合2次以上在22周以前发生流产且胎儿体质量小于500g的诊断标准[1],平均年龄(26.7±3.23)岁,孕龄(12.2±4.2)周,其中收银员8例,广告设计6例,制鞋厂工人3例,电子厂工人2例,文字编辑员1例。随机选择新乡地区健康的育孕期女性20例为对照组,平均年龄(26.6±3.79)岁,孕龄(10.6±4.9)周,其中农民9例,教师5例,餐馆服务员3例,推销员2例,公务员1例。2组研究对象均身体健康,无遗传家族史,无传染病、肿瘤、严重感染等器质性病变,不嗜烟酒。2组平均年龄和孕龄比较无显著差异(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 人外周血的制备
用已抽0.2 mL肝素的注射器取观察组和对照组的肘静脉血各5 mL,与肝素混匀备用。
1.2.2 人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换(sister chromatid exchanges,SCE)检测
取抗凝血,按常规外周血淋巴细胞染色体培养法培养,收获细胞并制片,放在隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂生产,型号:PYXDHS40X50BS)中老化后进行紫外分色,最后染色,然后油镜下镜检并统计SCE发生率[4]。
1.2.3 人外周血淋巴细胞微核出现率检测
取抗凝血0.5 mL,加入含RPMI Medium1640(Invitrogen corporation生产)培养液中,培养约66 h收细胞,用0.075 mol·L-1 KCl于37 ℃温箱中低渗3 min后取出,用甲醇:冰乙酸固定液(21)6 mL固定3次,于2~3 cm高处滴片。在40倍镜下镜检,每例标本分析约2 000个胞浆完整的细胞,统计微核出现率。
1.2.4 人外周血淋巴细胞染色体断裂发生率检测
取抗凝血,按常规外周血淋巴细胞染色体培养法培养细胞、收获细胞、制片、老化并G显带,然后油镜下镜检,每例标本分析30个核型,计数每个核型的染色体断裂出现的次数[4]并统计断裂发生率。
1.3 统计学处理
用SPSS 13.0统计学软件处理,数据采用均数±标准差(±s)表示,2组间比较采用t检验。
2 结果 观察组外周血淋巴细胞SCE发生率和微核出现率明显高于对照组(P<0.05);观察组外周血淋巴细胞的染色体断裂发生率与对照组比较无明显差异(P>0.05)。见表1。表1 对照组与观察组SCE发生率、微核出现率和染色体断裂发生率的比较(略)
3 讨论 SCE指1条染色体中2条姐妹染色单体间同源片段的交换,这种交换是完全性的、对称性的。SCE的形成与DNA的稳定性有关,SCE发生率是检测遗传不稳定性和早期染色体DNA损伤极为灵敏的指标。正常人的异常SCE发生率往往预示着潜在疾病的发生,也可以反映不良生活习惯对身体造成的遗传性损伤[5]。微核是细胞分裂后期的延滞染色质。在细胞有丝分裂末期,这种染色质包含在1个子细胞中,形成1个或多个次级核,这些次级核比重较小,称为微核。延滞的原因主要是诱变因素引发的染色体断裂和纺锤体机能障碍。所以依据微核率可以了解机体DNA损伤程度,微核越多提示DNA损伤程度越重[6]。在正常情况下,染色体可以发生断裂,但发生率低。在某些因子,如辐射、病毒、化学物质等作用下,可以发生较多的断裂。断端具有黏性,可以与其他断端黏合而发生染色体结构的重排。重排的染色体结构可以是稳定的,也可以是不稳定的,而不稳定的染色体在下次细胞分裂中丢失或发生变化而最后丢失。断裂出现次数越多,提示DNA损伤程度越重[7]。 DNA有自身修复能力,可以使损伤的DNA得以复原[8]。在正常情况下,生物体内的基因是稳定的,但在环境污染下,DNA易受伤害[9]。受损伤的DNA是不稳定的,虽然其可依靠自身的修复能力复原,但并非都能修复成原来的结构,此时易致染色体畸变。在环境胁迫因子减少的情况下,DNA损伤相对减少,修复能力相对增强,也就减少了染色体畸变的概率。SCE发生率、微核出现率、染色体断裂率都是检测DNA损伤的灵敏指标。本研究发现,观察组SCE发生率和微核出现率均明显高于对照组,其原因可能是由于观察组职业环境中有大量的辐射、噪音、有害气体及重金属等环境胁迫因子,从而导致SCE发生率和微核出现率较高。所以,对于经常暴露在环境胁迫因子中的女性在妊娠前应该检测SCE发生率和微核出现率,以观察其染色体稳定性来判断是否适合妊娠,这对提高生育质量有一定的价值。
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