子宫内膜异位症患者VEGF的检测及意义
发表时间：2009-06-23 浏览次数：545次
作者:陈晓燕,李玉芳,魏萍
作者单位：广东省深圳市龙岗中心医院妇产科，广东深圳 518116
【摘要】 目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)发生发展中的作用。方法 采用免疫组织化学SP方法检测16例EMs患者异位内膜组织（A组）、在位内膜组织（B组）中VEGF的表达，并与16例同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者的正常子宫内膜组织（对照组）作对照。结果 A组、B组和对照组的VEGF表达率分别为93.75%(15/16)、56.25%(9/16)、25.00%(3/16)，3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。结论 VEGF作为诱导血管形成的重要因子，它可直接而特异作用于血管内皮细胞，导致新生血管形成，EMs患者在位及异位内膜VEGF的高表达，提示其在发病机制中起一定的作用。
【关键词】 子宫内膜异位症；血管内皮生长因子；免疫组织化学
子宫内膜异位症(EMs)是一种妇科常见病，育龄妇女的发病率约占10%～15%，不孕妇女则高达40%～50%，且发病率呈逐年上升趋势，其发病机制尚不清楚。目前认为异位子宫内膜却具有类似于恶性肿瘤转移、种植、侵袭等生物学特性, 而此过程均依赖于新生血管的形成。血管内皮生长因子（VEGF）作为一种主要的血管生成因子以其促进血管内皮细胞增殖、迁移，增加微血管通透性，促进血管形成的生物学特性参与了子宫内膜生理以及病理血管生成。本研究通过检测16例EMs患者子宫内膜、异位内膜及16例子宫肌瘤患者正常子宫内膜中VEGF的表达,观察VEGF在EMs发生发展中的作用。 1 资料与方法 1.1 病例与分组 选择2006年9月至2007年11月在我院经腹腔镜或开腹手术，手术后病理检查确诊为EMs的16例患者为研究组，年龄24～48岁，分为异位内膜组(A组)及在位内膜组(B组)；选择同期因子宫肌瘤行子宫切除术的16例患者正常子宫内膜为对照组，年龄35～48岁。两组患者均月经周期规则(28～30 d)，术前3个月内均未用过内分泌药物治疗，无合并其它内外科疾病。 1.2 方法
1.2.1 标本采集 研究组及对照组患者均选择月经周期的卵泡期(6～14 d)取材,于术中无菌操作，研究组同时取在位及异位内膜。对照组只取在位内膜，术中立即取材,经10%(体积分数)中性甲醛溶液固定,石蜡包埋，5μｍ连续切片5张，1张行常规HE染色进行病理形态学观察，其余用于免疫组织化学染色。
1.2.2 主要试剂 鼠抗人VEGF单克隆抗体、SP免疫试剂盒和山羊血清、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.2.3 SP法检测VEGF 切片常规二甲苯脱蜡,梯度乙醇至水。采用SP法进行免疫组织化学染色,实验操作严格按说明书进行。阳性对照选用VEGF免疫染色阳性的组织切片，0.01 MPBS代替一抗作为阴性对照。试验步骤严格按试剂盒操作步骤进行。
1.2.4 免疫组化阳性判断标准 以细胞胞质中出现棕黄色颗粒为判断标准，按FDA推荐的染色强度分级：阴性(－)；细胞无着色或阳性细胞数<5%；弱阳性(+)：细胞轻度着色呈淡黄色，阳性细胞数5%～25%；阳性()：细胞着色呈深黄色,阳性细胞数25%～50%；强阳性()：细胞明显着色，呈棕黄色，阳性细胞数>50%。 1.3 统计学处理 对数据资料进行秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 结果详见表1。 表1 各组内膜VEGF的表达 （略）
3组间两两比较均P<0.01或0.05。 3 讨论
EMs真正的病因及发病机制至今未明。目前经血逆流种植学说为大家所接受，然而已知多数妇女经期均有经血逆流现象，却仅10%左右发病。因此，经血逆流可能只是发病的基础，而近来研究表明患者的内膜具有转移、种植、生长等类似恶性肿瘤细胞生物学行为的能力可能才是发病的关键。目前研究证实，恶性肿瘤的转移、种植及生长均依赖于新生血管的形成，而脱落的子宫内膜附着于腹膜或其他部位时，异位的子宫内膜及其周围组织新的血供的建立与维持，亦是子宫内膜异位种植存活和发生的基本条件。 VEGF是一种重要的选择性的促血管生成因子，以旁分泌方式作用于血管内皮细胞，促进其增殖并诱导血管生成［1］。大量的实验研究证实,几乎所有的恶性肿瘤VEGF 表达都呈较高水平，而在周围正常组织中无或仅有极低水平的表达［2］。高表达的VEGF与其相应的受体特异性结合后，诱发肿瘤血管生成；持续和广泛的新生血管生成满足了肿瘤细胞生长所需的营养成分，促进了肿瘤细胞的恶性增殖和侵袭性生长。VEGF还是已知最强的血管通透剂。肿瘤新生血管本身结构缺乏完整性，管壁薄弱，这使它们比正常成熟血管更容易被肿瘤细胞穿透，VEGF导致的血管通透性增加进一步促进了肿瘤的侵袭性生长和转移。 EMs的发生有赖于血管的生成。金海燕等［3］通过对VEGF在子宫内膜异位症患者中的检测，发现在分泌期，EMs在位子宫内膜腺上皮细胞中VEGF的表达强度明显高于正常子宫内膜。本研究显示，A组、B组和对照组的VEGF表达率分别为93.75%、56.25%和25.00%，3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)，这可能与逆流经血中的内膜在盆腔中的种植有关，经血逆流入腹腔，带入VEGF表达增强的子宫内膜碎屑细胞，VEGF刺激毛细血管增生，并增加血管的通透性，使血管内皮细胞及成纤维细胞能够向内迁移。迁移的成纤维细胞合成并分泌基质蛋白、蛋白聚糖，而血管内皮细胞则分裂增殖成为新的血管，促使腹膜下的血管网形成，为异位生长的腺上皮细胞提供赖以生存的物质基础，促进异位内膜增殖和浸润入盆腔。由此推测，高水平的VEGF可促进血管网的增生，从而有利于异位内膜的种植与生长，是引起异位病灶不断扩散的重要机制。 本研究样本量较少，仅对VEGF与EMs的关系进行了初步探讨。研究VEGF与EMs的关系,有助于为临床提供理论基础，从而设计出相应的药物，更有效抑制血管形成，为治疗EMs开辟新途径。
【参考文献】 ［1］ 徐红, 况燕, 欧奇志, 等.血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的作用［J］.广西医科大学学报, 2005, 22（3）：339341.
［2］ 赵颖海, 苟新敏, 陈小毅, 等.VEGF、MMP2、MMP9在乳腺癌组织中的表达及其对侵袭和转移的影响［J］.广东医学院学报, 2005,23(1):15.
［3］ 金海燕, 王自能, 卢凤昕, 等. 血管内皮生长因子在子宫内膜异位症发病中的作用［J］. 基础医学与临床, 2005, 25（3）：257260.
