TGF-β1、TβRII在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义
发表时间：2009-06-23 浏览次数：505次
作者:郑伟
作者单位：泰山医学院，山东 泰安 271000
【摘要】 目的 通过检测TGF-β1、TβRII在子宫内膜组织和子宫内膜样腺癌中的表达，分析其与临床病理因素的关系，进一步探讨子宫内膜样腺癌的发生、发展的分子生物学机制及其能否作为预测子宫内膜样腺癌浸润、转移潜能和预后的分子生物学指标。方法 采用免疫组化SP法对32例子宫内膜样腺癌、10例正常子宫内膜组织、10例单纯性增生内膜组织、10例复杂性增生内膜组织及10例非典型增生内膜组织共计72例石蜡组织进行TGF-β1、TβRII蛋白表达的检测。结果 TGF-β1在子宫内膜样腺癌中的表达显著高于正常子宫内膜组（P﹤0.01）。TGF-β1表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期（P﹤0.01）、肌层浸润深度(P﹤0.01)及淋巴结转移(P﹤0.05)间的差别具有统计学意义。TβRII在子宫内膜样腺癌中的表达显著低于正常子宫内膜组（P﹤0.05）。TβRII表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期（P﹤0.05）、肌层浸润深度(P﹤0.05)及淋巴结转移(P﹤0.05)间的差别具有统计学意义。结论 TGF-β1在正常子宫内膜向内膜癌转变过程中发挥着重要作用。TGF-β1表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关。TGF-β1促进子宫内膜样腺癌的发生、发展可能与TβRII突变有关。
【关键词】 子宫内膜样腺癌 TGF-β1 TβRII 免疫组织化学
Study of the expression and significance of TGFβ1,TβRII in the endometrioid adenocarcinomaZHENG Wei ，WANG Jia-fu， ZHANG Bin， HUANG Qing-yu， JING Fei（1. Taishan Medical College, Taian 271000, China; 2. Grade 2002 of Double Majors of Medicine and English,
Department of Clinical Medicine, Taishan Medical College, Taian 271000, China）
Abstract: Objective: To investigate the expression and significance of TGFβ1, TβRII in the endometrioid adenocarcinoma, analyze the relationship between their expression and clinicopathologic, explore the machinery of molecular biology for endometrioid adenocarcinoma, and determine whether they can be recognized as markers to forcast invasion, metastasis and prognosis of endometrioid adenocarcinoma. Methods: By immunohistochemical SP methods in the use of monoclonal antibodies for TGFβ1, TβRII, we examined 32 cases of endometrioid adenocarcinoma,10 cases normal endometrium,10 cases simple hyperplasia,10 cases complex hyperplasia,10 cases atypical hyperplasia and detected the expression of TGFβ1 and TβRII in paraffin-embeded sections of endometrium tissues. Results: The positive rate of TGFβ1 was significantly higher in endometrioid adenocarcinoma than that in normal endometrium (P﹤0.01). There was a positive relationship of TGFβ1 expression with muscle invasion depth (P﹤0.01), clinical stage (P﹤0.01) and lymph node metastasis (P﹤0.05). The positive rate of TβRII was significantly lower in endometrioid adenocarcinoma than that in normal endometrium (P﹤0.01). There was a negative relationship of TβRII expression with muscles invasion depth (P﹤0.01), clinical stage (P﹤0.01) and lymph node metastasis (P﹤0.05). Conclusion: TGFβ1 plays an important role in the process of cancerization of normal endometrium. The expression of TGFβ1 has correlation with clinical stage, muscles invasion depth or lymph node metastasis in endometrioid adenocarcinoma. It promotes endometrioid adenocarcinoma generation and development of TGFβ1 related with the mutation of TβRII.
Key words :endometrioid adenocarcinoma; TGFβ1 ; TβRII; immunohistochemistry.
肿瘤的发生、发展是多因素、多步骤、多阶段和多基因参与的综合作用的复杂的病理过程。其中癌基因的激活和抑癌基因的失活是其主要机制之一。最近十年左右实验数据显示TGF-β1在恶性肿瘤发展过程中起着两种不同且相反的作用，在肿瘤发生的早期阶段， TGF- β1对肿瘤细胞的增殖起抑制作用，因此TGF-β1被认为是一种抑癌基因。而在进展期和晚期恶性肿瘤细胞却可逃逸TGF-β1的生长抑制而增殖。这可能与其受体或受体后水平缺陷有关。本研究采用免疫组化方法检测32例子宫内膜样腺癌中TGF-β1、TβRII蛋白的表达情况及其与临床病理特征的关系，从而探讨二者在子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用，为子宫内膜癌发病机制研究提供新思路，为子宫内膜癌的预后判断提供分子生物学指标。
1 资料与方法
1.1 材料来源
选用泰山医学院附属医院及泰安市中心医院1999～2005年间子宫内膜样腺癌手术标本且临床资料齐备者32例，患者年龄37～71岁，平均56岁，子宫内膜样腺癌按照1988年FIGO手术一病理分期标准，I～II期23例，III～IV期9例；组织学分级高分化（G1 ）15例，中分化～低分化（G2～G3）17例。 随机选择同期的正常增生期子宫内膜、单纯性增生(不伴有非典型增生）及复杂性增生(不伴有非典型增生）和非典型增生子宫内膜各10例。标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚组织切片。
1.2 实验方法
采用免疫组织化学S－P方法，操作步骤按试剂盒说明书进行。兔抗人PTEN即用型单克隆抗体及鼠抗人TGF-β1即用型单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司。浓缩型鼠抗人TβRII多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，工作浓度1:100。
1.3 结果判定
高倍镜下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量处理。 染色强度评分标准：不着色0分、黄色1分、 棕黄色2分、黄褐色3分。阳性细胞所占比例评定标准：阳性细胞数<10%者0分、10%～40%者1分；40%～70%者2分；≥70%者3分。染色强度评分与阳性细胞评分相加：0～1分为（－）；2分（＋）；3～4分为（＋＋）；5 ～ 6分 为 （＋＋＋）。
1.4 统计学处理
采用SAS 8.1统计软件进行处理，等级资料采用秩和检验，组间比较采用Kruskal-Wallis检验。
2 结 果
2.1 TGF-β1及TβRII在不同子宫内膜组织中的表达
TGF-β1及TβRII的棕黄色颗粒主要出现在子宫内膜腺上皮细胞及内膜样腺癌细胞浆内，TGF-β1在子宫内膜样腺癌中的表达明显高于正常子宫内膜及单纯性增生内膜（P＜0.01）。TβRII在子宫内膜样腺癌中的表达明显低于正常子宫内膜、单纯性增生内膜及复杂性增生内膜（P＜0.01）。见表1。表1 TGF-β1及TβRII在不同子宫内膜组织中的表达注：与子宫内膜样腺癌比较，﹡P＜0.01；与正常子宫内膜比较，# P＜0.05。
2.2 TGF-β1及TβRII与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系
TGF-β1及TβRII表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期、肌层浸润深度显著相关（ P﹤0.01）。9例淋巴结转移者TGF-β1表达全部阳性，与无转移者差异有显著性（P﹤0.05）。淋巴结转移组TβRII表达显著低于无淋巴结转移组，且差别具有显著性（P﹤0.05）。TGF-β1、TβRII表达与病理分级、绝经与否无明显相关性（P﹥0.05）。见表2。表2 TGF-β1及TβRII与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系注：与I～II期比较，aP＜0.01；与无肌层浸润者比较，bP＜0.01 ；与无淋巴结转移比较，cP＜0.01；与I～II期比较，dP＜0.05 ；与无肌层浸润者比较，eP＜0.05；与无淋巴结转移组比较，fP＜0.05。
讨 论
3.1 TGF-β1的性能
TGF-β1是具有双重调节作用的因子，体外实验证明TGF-β1是肿瘤细胞生长的重要负性调控因子，TGF-β1与细胞表面受体结合，通过P53和PRB的低能磷酸化，抑制c-myc的表达，使细胞分裂停止于G1期，从而抑制肿瘤细胞的生长［1］。但近期报道在体内实验中发现TGFβ1在一些中晚期肿瘤中的表达增高，肿瘤细胞丧失对TGF-β1的负性调控作用可能与细胞表面的受体改变和缺失有关，与RB基因、P53基因突变和缺失有关［1］。也有人推测其与免疫抑制有关［2］,TGF－β1有可能通过破坏机体的免疫监视和免疫杀伤作用，或者通过旁分泌作用刺激间质，增強蛋白水解酶活性，增加间质胶原的降解及参与肿瘤血管形成，间接促进肿瘤的生长［3］。本研究结果表明，TGF-β1从正常子宫内膜组、单纯性增生组、复杂性增生组、非典型增生组及子宫内膜样腺癌组的阳性表达率分别为30%、50％、80％、80％、94％，呈逐渐升高趋势，五组间秩和检验表明差别具有显著统计学意义（P﹤0.01）；两组间Wilcoxon检验显示TGF-β1在正常子宫内膜组及单纯性增生组的阳性表达率明显低于子宫内膜样腺癌组，且差异具有显著性（P﹤0.01）；另外显示正常子宫内膜组TGFβ1的蛋白表达明显低于复杂性增生组及非典型增生组（P＜0.05）。此结果表明，TGF-β1对维持正常子宫内膜的生长起重要作用。TGF-β1的高表达可能是正常子宫内膜向子宫内膜样腺癌恶性转化过程中的早期现象。本研究分析了子宫内膜样腺癌中TGF-β1的表达与临床病理特征的关系表明，TGF-β1的蛋白表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期，肌层浸润深度呈正相关（P＜0.01）；且9例淋巴结转移者TGF-β1表达全部阳性，与无转移者差异有统计学意义（P＜0.05）；而与病理分级，绝经与否差异无显著性（P＞0.05）。由此表明，同许多其他肿瘤一样，TGF-β1在于宫内膜癌细胞的生长、浸润和转移中起重要作用，并与预后有密切关系。
3.2 TGF-β1的促癌作用与TβRII的表达的缺失有关
目前的研究表明，许多恶性肿瘤细胞失去对TGF-β1的生长的负性调控，其原因通常归咎于TGF-β I型或II型受体或Smad蛋白突变［4］。在多种肿瘤中研究发现TβRII表达降低，而TGF-β1的高表达可能因为其相应受体表达异常导致了上皮细胞对TGF-β1耐受，反馈性的表达增高［5］。Piestrzeniewicz等［6］ 采用RT-PCR法和ELISA法检测TGF-βI、II型受体mRNA及蛋白在子宫内膜组织中的表达水平，结果发现浸润性子宫内膜癌（肌层浸润＜1/2及＞1/2）中TGFβII型受体蛋白表达明显高于非浸润性子宫内膜癌（P＜0.05），提示TβRII表达失调可能与I型子宫内膜癌肌层浸润有关，从而影响其生物学行为。本研究结果表明，TβRII蛋白表达从正常子宫内膜组、单纯性增生组、复杂性增生组、非典型增生组及子宫内膜样腺癌组，其阳性表达率逐渐降低，阳性率分别为100%、100%、70%、60%、44%，各组间差别有显著性（P﹤0.01）；两组间比较显示，子宫内膜样腺癌组TβRII蛋白的表达显著低于正常组、单纯性增生组及复杂性增生组，且差别有显著性（P﹤0.01）。本结果也证实了子宫内膜样腺癌细胞内TβRII蛋白表达下降或缺失使TGF-β1信号通路受阻，导致上皮细胞对TGF-β1的生长调控的逃逸，使得TGF-β1抑制肿瘤上皮细胞生长的生物学效应难以发挥，从而表现为恶性肿瘤的无限制生长的特性。此外本研究结果还显示，TβRII蛋白表达强度与临床分期、肌层浸润深度呈负相关（P﹤0.05）；且淋巴结转移组的TβRII蛋白表达低于无淋巴结转移组，且差别有统计学意义（P﹤0.05）。可见TβRII转导的生长抑制信号通路的丢失，使得TGF-β1的负性调控作用障碍，最终导致了子宫内膜样腺癌的进展。
对调控细胞生长的TGF-β1的进一步研究将有助于阐明子宫内膜癌癌变的机理,对子宫内膜癌的预后判断和指导临床开展有效的基因治疗具有十分重要的意义。
【参考文献】 ［1］ 张祥生，王子明.TGFβ抑制肿瘤细胞生长的作用及在泌尿系统肿瘤中的研究现状［J］.国外医学泌尿系统分册，1996，16：17－19.
［2］ Torreamione G,Beauchamp RD,Koeppen H,et al.A highly immunogenic tumor transfectedwith a murine transforming growth factor typeβ1 cDNA escapes immune surveillance［J］.Proc Natl Acad Sci USA,1990,87:1486-1490.
［3］ Samuel SK,Hurta RAR,Kondaiah P, et al .Autocrine induction of tumor protease production and invasion by a metallothionein-regulated TGFβ1［J］.EMBOJ,1992,11:1599-1605.
［4］ Teicher BA.Malignant cell. Directors of the malighant process.Role of transforming growth factor-beta［J］. Cancer and Metasasis Rev,2001,20(2):133-43.
［5］ Robert EB,Baldwin RL,Yamada SD,et al,Altered expression of transforming growth factor-b ligands and receptors in primary and recurrent ovarian carcinoma［J］. Cancer,1999,85:216.
［6］ Piestrzeniewicz-Ulanska D,Brys M,Semczuk A,et al.TGF-β signaling is disrupted in endometrioid-type endometrial carcinomas ［J］. Gynecol Oncol,2004, 95(1):173-180.
