S期激酶相关蛋白2在宫颈上皮内肿瘤和宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

作者:李冰,曹璋,徐丽萍

作者单位：滨州医学院病理学教研室 滨州市 256603

    【摘要】  目的 探讨S期激酶相关蛋白2（Skp2）在正常宫颈上皮、宫颈上皮内肿瘤(CIN)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其在宫颈癌演进过程中作用和意义。方法 用鼠抗人Skp2单克隆抗体，免疫组化两步法标记12例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内肿瘤、30例宫颈鳞状细胞癌组织。结果 正常宫颈组织、宫颈上皮内肿瘤和宫颈鳞状细胞癌Skp2表达阳性率分别为0%、76.6%、83.3%。正常宫颈组织与宫颈上皮内肿瘤、正常宫颈组织与宫颈癌Skp2的表达有显著差异(P＜0.01)。而宫颈上皮内肿瘤与宫颈癌比较Skp2的表达无显著性差异(P＞0.05)。结论 Skp2参与了正常宫颈组织向宫颈上皮内肿瘤的演变, 可能与宫颈鳞状细胞癌的发生和发展有关。

【关键词】  S期激酶相关蛋白2；宫颈上皮内肿瘤；宫颈鳞状细胞癌

    The significance of Skp2 expression in cervical intraepithelial neoplasia and squamous cell carcinoma

    LI Bing1  CAO Zhang1  XU Liping2

    1 Department of Pathology, Binzhou Medical University, Binzhou 256603；

    2 Department of Cardiovasology,Affliated Hospital of Binzhou Medical University

    【Abstract】  Objective  To investigate the expression of Sphase kinase associated proteint 2 Skp2 and its significance in cervical intraepithelial neoplasia and squamous cell carcinoma.Methods  The immunohistochemiscal staining was used to examine the expression level of Skp2 in samples of 12 cases of normal cervix, 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia, and 30 cases of cervcal squamous cell carcinoma. Results  The Skp2 expression rate in normal cervix, cervical intraepithelial neoplasia and cervcal squamous cell carcinoma was  0%,76.6%,83.3%,respectivly. The rate of 76.6% and 83.3% was significantly higher than that of 0% in normal cervix (P＜0.01). But there was no significantly differecne in the expression of Skp2 between cervical intraepithelial neoplasia and cervcal carcinoma. Conclusion  The increasing Skp2 expression involves in the development and progression from normal cervix to cervical intraepithelial neoplasia, and may be correlated to the onset and progress of cervical carcinoma.

    【Key Words】  Sphase kinase associated proteint 2 (Skp2)， cervical intraepithelial neoplasia， cervcal squamous cell carcinoma

    S期激酶相关蛋白2（Sphase kinase associated protein 2, Skp2）作为细胞周期G1期向S期转化的重要物质，在泛素依赖性蛋白水解途径中起特异性识别底物的作用，参与细胞增殖与凋亡的调控［１］。因为它主要存在于恶变细胞的S期，所以Skp2在肿瘤的发生、发展中的作用日益被关注［２］。切断细胞周期中的某一环节，控制肿瘤细胞的异常分裂繁殖，进而治愈肿瘤是人类研究肿瘤的最终目的。因此，Skp2在肿瘤组织中的表达是人们探索肿瘤发生、发展等生物学行为的一种新的渠道。本实验旨在通过观察Skp2在正常宫颈、宫颈上皮内肿瘤(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)、宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况，分析Skp2与宫颈鳞状细胞癌发生、发展及进程的关系。

    1  材料与方法

1.1  材料  收集我院病理科外检2001—2004年标本，正常宫颈组织12例、宫颈上皮内肿瘤组织30例、宫颈鳞状细胞癌组织30例。标本经10%的中性甲醛固定，脱水机处理，石蜡包埋，HE染色光镜观察。CIN分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，宫颈鳞状细胞癌分为高、中、低分化。处理干净的玻片用APES挂片，蜡块作5 μm切片，预作免疫组化用片。

    1.2  试剂与方法  鼠抗人Skp2单克隆抗体、PV9000两步法ImmunoBridge+、DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化方法按试剂购买说明书步骤进行操作。

    1.3  结果判定  参考郑毅祥等［3］ Skp2免疫组化标记前列腺癌细胞阳性标准：阳性部位为细胞核或细胞质；以细胞核（或质）出现均匀棕黄色颗粒为阳性细胞；阳性率＞20%为Skp2高表达，阳性率＜20%为低表达。三组中，每组高表达例数与该组病例总数之比为各组Skp2阳性表达率。

    1.4  统计方法  采用SPSS10.0软件做统计学处理。

    2  结果

    正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞状细胞癌三组病例中Skp2阳性表达的总体比较χ2检验值28.22，P＜0.01，差异有显著性，见图1～4和表1。

　　3  讨论

    细胞周期的运行受细胞分裂的正、负性调节因素所控制，在细胞分裂的间期，尤其是G1期向S期转化的环节，细胞周期蛋白（cyclin）、周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）、周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CKI）等物质发生一系列生化反应，共同调节细胞的增殖与凋亡［４］。目前，已有许多细胞周期调控蛋白被证明通过泛素依赖性蛋白水解途径降解，Skp2在此水解途径中起特异性识别底物的作用，参与细胞的增殖与凋亡。研究表明Skp2介导了cyclinD1、cyclinE、CDK抑制因子、p27KIP1和p21WAF1等的泛素化和降解［1］。在相关因子中， p27是近年新发现的负性调节细胞增殖的G1期检查点相关基因。被研究者认为是一种候选抑癌基因  ［３］。p27的表达与Skp2的表达具有负相关［５，６］。Skp2通过泛素化蛋白水解途径下调p27蛋白水平，p27蛋白水平的下降使细胞凋亡减少，细胞异常的分裂繁殖，导致肿瘤的发生、演进［４］。在相关研究中显示Skp2高表达的肿瘤患者预后明显较差［7～10］。Dowen等用免疫组化分析42例宫颈鳞状细胞癌标本后发现，Skp2表达在高分化标本中呈低水平，随分化程度降低而表达增高，在正常宫颈组织中表达很低 ［１１］。本实验中Skp2在宫颈鳞状细胞癌中的表达与以上研究基本一致。

    在宫颈高分化鳞状细胞癌中，Skp2高表达表现为某一癌巢的表达，而另一癌巢几乎全为阴性。此种现象的出现可能与某一癌巢的细胞克隆增殖进程有关，即Skp2高表达于细胞周期的某一时段。在CINⅢ级的标本中随增生分级的增高Skp2表达加强。正常宫颈组织、宫颈上皮内肿瘤、宫颈鳞状细胞癌三组的Skp2表达与Gstaiger报道口腔正常上皮、上皮异型增生和口腔鳞癌标本中Skp2表达逐步升高的现象一致，与Skp2高表达导致p27水解加速，从而促进上皮异常增生向口腔鳞癌转化的理论一致［１０］。

    实验中 Skp2的表达与其他研究中Skp2表达的不同在于，癌细胞中Skp2虽然高表达（＞40%），但最高的阳性表达在宫颈上皮内肿瘤而不在于宫颈鳞状细胞癌。低分化鳞状细胞癌中细胞质阳性表达明显增加。Skp2蛋白的异常增高是否成为促进宫颈上皮内肿瘤向宫颈鳞状细胞癌演进的因素，尚需进一步研究。

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