PTEN和PCNA在子宫内膜癌组织中的表达

作者:苏联珍,吴静

作者单位：西安交通大学校医院，陕西西安 710061；西安交通大学医学院第二附属医院妇产科，陕西西安 710004

      【摘要】  目的 探讨抑癌基因PTEN及增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测PTEN和PCNA在18例正常增生期子宫内膜(正常组)、21例子宫内膜不典型增生(癌前病变组)和22例子宫内膜腺癌(内膜癌组)中的表达。结果 正常组、癌前病变组及内膜癌组PCNA表达分别为61.1%(11/18)、71.4%(15/21)和95.5%(21/22)，3组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；各组子宫内膜组织中PTEN表达分别为：正常组88.9%(16/18)、癌前病变组71.4%(15/21)、内膜癌组27.3%(6/22)，3组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCNA表达增强可能是子宫内膜癌在分子水平上的早期变化，PTEN表达减弱可能与子宫内膜腺癌的发生、发展密切相关，二者对早期诊断子宫内膜癌有一定意义。

【关键词】  子宫内膜癌；PCNA；PTEN

子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一。肿瘤细胞最基本的生物学特征是无限制的增生,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是细胞DNA合成期必不可少的因子，其表达状况可以反映肿瘤细胞的增殖活性。抑癌基因PTEN突变或缺失及蛋白表达异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。本研究通过检测正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌PTEN、PCNA蛋白的表达水平，探讨其在子宫内膜癌早期诊断中的意义。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本来源及分组

　　实验分3组，均选自西安交通大学第二附属医院2001年9月至2003年9月手术切除并经病理证实的存档蜡块。其中子宫内膜癌组22例，患者年龄37-61岁，平均(46.5±10.9)岁，术前均未接受化疗、放疗及激素治疗；癌前病变组选取子宫内膜不典型增生21例，患者年龄31-50岁，平均(41.9±7.3)岁；正常增殖期子宫内膜组18例，患者年龄30-48岁，平均(40.4±6.4)岁。

　　1.2   试剂及方法

　　PTEN和PCNA多克隆抗体购自北京中杉试剂公司。免疫组化采用SP法。主要实验步骤为：组织切片脱蜡至水，微波抗原修复(100℃，15min)，过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，正常羊血清阻断非特异性染色，依次加Ⅰ抗(PTEN 1∶50；PCNA 1∶100)、生物素标记的Ⅱ抗和酶标链霉亲和素孵育，DABH2O2显色。阴性对照采用PBS缓冲液代替Ⅰ抗；阳性对照PCNA应用已知阳性子宫内膜癌组织，PTEN应用已知阳性的扁桃体组织。

　　1.3  结果判断

　　免疫组化阳性反应产物为棕黄色或黄色颗粒，PCNA和PTEN均以细胞核中有棕黄色或黄色颗粒为阳性细胞。参照McCarty KS的评分标准[1]，对子宫内膜的PCNA和PTEN染色进行组织学评分，组织学评分(H)=染色强度(I)×阳性比例(P)。染色强度分为0-3级：不着色为0 级，黄色为1级，棕黄色为2级，黄褐色为3级，2级以上视为阳性；阳性比例为随机选取10个高倍视野，每个视野随机选取100个腺体细胞，计数棕黄色和黄褐色的细胞占所选腺体细胞总数的比例。

　　1.4  统计学分析

　　实验结果应用美国统计软件SPSS12.0分析，组织学评分用(±s)表示。采用χ2检验分析各组染色强度之间的差异，采用方差分析检验阳性表达率之间及组织学评分之间的差异，P<0.05为有统计学意义。

　　2  结 果

　　2.1  各组子宫内膜组织中PCNA的表达

　　PCNA阳性细胞为细胞核呈棕黄色。PCNA在正常增殖期子宫内膜组织中表达阳性率最低(61.1%；11/18)，在非典型增生组织中增高(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中明显增强(95.5%；21/22)。3组PCNA表达的组织学评分逐渐增大，有显著性意义(P<0.05，表1)。表1   各组子宫内膜组织中PCNA蛋白表达情况（略）

2.2  各组子宫内膜组织中PTEN的表达

　　PTEN阳性细胞为细胞核显示棕黄或棕褐色，PTEN在正常增殖期子宫内膜组织中表达增强，阳性率最高(88.9%；16/18)，在非典型增生组织中表达降低(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中(27.3%；6/22)明显低于正常内膜组(表2)。3组PTEN表达的组织学评分逐渐降低，有显著性意义(P<0.01，表2)。表2   各组子宫内膜组织中PTEN蛋白表达情况（略）

　　3  讨 论

　　细胞的恶性转化是一个多因素影响、多基因调控的复杂过程，其基因突变和表达异常常早于形态学改变。PTEN定位于10号染色体10q23.3区，位于细胞核，可调控细胞周期﹑诱导细胞凋亡﹑调节细胞迁移﹑浸润﹑整合素介导的细胞铺展及局部黏附的形成等。若PTEN基因发生突变﹑基因同源性丢失﹑启动子甲基化﹑表达缺失等可使其功能异常。Mutter等[1]用免疫组化法研究了33例子宫内膜样腺癌，发现97%的病例出现不同程度的PTEN表达降低，其中61%的病例PTEN蛋白表达缺失。说明在子宫内膜癌中，PTEN是突变率最高的一种基因，是子宫内膜癌发生的早期事件。Mutter等也测得PTEN基因的突变率在子宫内膜癌为83%(25/30)，子宫内膜癌前病变为55%(16/29)，正常子宫内膜为0。Kanamori[2]对103例子宫内膜癌患者研究发现，36%PTEN蛋白表达丢失，15%表达下降。本研究发现PTEN蛋白阳性表达率在子宫内膜癌、不典型子宫内膜癌、正常子宫内膜中分别为27.3%、71.4%、88.9%。虽然各家报道有差异，但其规律相一致，推测PTEN蛋白表达可能是调控正常子宫内膜生长的必要因素之一。PTEN蛋白表达的下降或缺失，与子宫内膜癌的发生、发展密切相关，可导致细胞增殖失控，可能是子宫内膜癌发生的早期事件，有望作为预测子宫内膜癌的一种指标。PCNA是DNA多聚酶δ的辅助蛋白，在DNA复制中起重要作用，其表达的强弱可反映细胞增殖的程度。Xie等[3]研究发现子宫内膜复杂性不典型增生的患者，PCNA表达高者发生子宫内膜癌的几率大。Chen等[4]研究发现在子宫内膜增生过长及子宫内膜癌中PCNA的阳性表达率分别为30%和82.4%，PCNA指数有显著差异(P<0.01)。史惠荣等[5]报道，PCNA在子宫内膜癌中阳性表达率为87.9%，高于正常子宫内膜(40%)和子宫内膜增生过长(65%)。本研究结果显示PCNA在正常子宫内膜、不典型增生内膜、子宫内膜癌组织中的表达分别为61.1%、71.4%和95.5%，略高于以上研究结果，可能与样本量较少有关。说明PCNA在子宫内膜癌的发生、发展的早期起着重要作用。

【参考文献】  [1]Mutter GL, Lin MC, Fitzgerald JT, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial precancers [J]. J Natl Cancer Inst, 2000, 92(11):924931.

　　[2]Kanamori Y, Kigawa J, Itamochi H, et al. Correlation between loss of PTEN expression and Akt phosphorylation in endometrial carcinoma [J]. Clin Cancer Res, 2001, 7:892895.

　　[3]Xie X, Lu WG, Ye DF, et al. The value of curettage in diagnosis of endometrial hyperplasia [J]. Gynecol Oncol, 2002, 84(1):135139.

　　[4]Chen YP, Shen M, Chen C. Study on expression of PCNA and estrogen, progesterone receptors in endometrial carcinoma [J]. Hunan Yike Daxue Xuebao, 2001, 26(2):123125.

　　[5]史慧荣，陈志敏，梁爱青. 子宫内膜癌组织中Survivin和PCNA的表达 [J]. 郑州大学学报(医学版), 2005, 3(40):408410.