不同促排卵方案宫颈黏液中IL6与卵泡发育、排卵的相关性

作者:吕淑兰,张巧利,曹缵孙

作者单位：西安交通大学医学院第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061

  【摘要】  目的： 探讨不同促排卵方案患者宫颈黏液（CM）中IL6水平与卵泡发育及排卵的相关性. 方法： 选择36例不孕妇女为研究对象，15例正常月经周期妇女为对照组. 实验组分三组，分别采用克罗米酚（CC）、尿促性素（HMG）及超促排卵（COH）. 于月经早卵泡期、围排卵期及黄体高峰期收集CM及血清，采用双抗RIA测定IL6水平及FSH, LH, E2, P水平，同时行阴道B型超声监测卵泡发育、子宫内膜厚度及排卵情况. 结果： ① CM中IL6在正常月经周期及促排卵周期中存在周期性变化，卵泡期开始上升，围排卵期达高峰，黄体期下降，三期中围排卵期CM IL6水平最高，差异有统计学意义（P<0.05）. ② CM中IL6与卵泡大小呈正相关（r=0.792, P<0.05），与子宫内膜厚度、宫颈黏液评分无相关. ③ 排卵组与未排卵组CM中IL6比较，排卵组IL6水平明显高于未排卵组，差异有统计学意义（P<0.05）. 结论： ① CM中IL6在正常月经周期及促排卵周期中存在周期性变化，排卵期达高峰，有望作为预测排卵的新指标. ② HMG促排卵组和IVFET COH组CM中IL6水平高于对照组，可能与促性腺激素对IL6的上调作用及激活生殖道局部细胞免疫有关. ③ IL6在卵泡发育及排卵过程中起重要作用.

【关键词】  排卵诱导；宫颈黏液；白细胞介素6；卵泡发育；排卵

      0引言

    　　近年来在世界范围内，不孕症的发病率逐年升高，而其中25%~30%的原因为排卵障碍［1］. 促排卵治疗及监测卵泡的发育、排卵成为该群体治疗的核心内容. 宫颈黏液中IL6与卵泡发育及排卵的关系也是研究的热点. IL6是一种多功能的细胞因子，其对生殖的多个环节产生作用［2］. 本实验以我院不孕患者为研究对象，对不同促排卵方法宫颈黏液中IL6水平，血清性激素水平进行测定. 同时阴道B超监测卵泡发育、子宫内膜厚度及排卵状况. 探讨不促排卵方案中宫颈黏液中IL6水平变化及卵泡发育及排卵的关系，为临床促排卵方案的选择提供一定的理论依据.

     1对象和方法

    1.1对象收集200410/200501在本院生殖内分泌研究室就诊的36例22~36岁不孕妇女为实验组. 实验组分三组，分别采用克罗米酚（clomiphene citrate, CC）、尿促性素（human menopausal gonadotropin, HMG）及超促排卵（controlled ovarian hyperstimulation, COH）. 其中CC促排卵主要为无排卵或稀发排卵的不孕者； HMG促排卵主要针对下丘脑、垂体功能低下的不孕者：COH主要用于女性输卵管梗阻的不孕患者，方法为 GnRHa+ HMG+HCG长方案. 选取同期在我院就诊的23 ~35岁月经周期正常妇女15例为对照组. 两组在年龄、不孕年限和体质量指数上差异无统计学意义. 所有研究对象进入试验前3 mo未使用任何激素类药物.

    1.2方法

    1.2.1血清的采集与分离所有研究对象均于月经周期第2~4日（早卵泡期），第12~14日（围排卵期）及第19~21日（黄体期）晨09：00~11：00点收集空腹肘静脉血5 mL，3000 r/min离心分离血清20 min，-40℃保存. 采用RIA 测定血清FSH, LH, E2, P.

    1.2.2宫颈黏液的采集采血的同日收集宫颈黏液. 用窥器暴露宫颈，灭菌干棉球试净宫颈表面分泌物，用1 mL注射器从宫颈内口处尽量吸净黏液，置于Apendoff管中，放入-40℃冰箱保存. 检测前先行冻融，称质量后加入1 mL生理盐水在-4℃条件下用超声波粉碎机液化，然后以3000 r/min离心20 min，取上清液置入-40℃冰箱保存待测. 采用双抗RIA测定IL6.

    1.2.3监测卵泡及子宫内膜使用EUB500型日立阴道B超监测卵泡发育. 正常对照组及CC促排卵组从月经第8日开始监测卵泡发育（CC M59, 50~100 mg/d, 共5 d）;HMG组（月经周期第2日始，肌注 HMG 2~3支，1次/d）;COH(阿拉瑞林150 μg  iH ，1次/d,M21日至注射HCG日,FSH 2~4支iH ，1次/d， M3日至注射HCG日)组于月经周期第8日监测卵泡发育. 三组均监测有2个卵泡直径≥18 mm时，肌注HCG 5×103~1×104U，COH组36 h后取卵，其余均需监测卵泡破裂情况、时间，并记录.

1.2.3.1子宫内膜厚度测定纵切显示子宫内膜，距宫底1 cm处测量前后子宫肌层与内膜交界面的距离，既自一侧子宫内膜强回声线与声晕交界至另一侧子宫内膜强回声与声晕交界处为子宫内膜厚度.

    1.2.3.2监测卵泡当卵泡发育成优势卵泡时选取卵泡最大切面测量卵泡大小（有多个卵泡时选取最大的卵泡），测其相互垂直的长短径，其均值为卵泡径线.

    1.2.4排卵征象的判断［3］① 卵巢卵泡消失；② 卵泡直径缩小；③ 卵泡形态改变，边缘出血、邹折或不光滑；④ 或伴有Douglas腔液性暗区.

    统计学处理：  计量资料以x±s表示，数据分析采用SPSS 11.5统计分析软件，统计学方法为方差分析和Spearman相关分析法，P<0.05为差别有统计学意义.

    2结果

    2.1各组IL6水平在生殖周期中的变化围排卵期IL6水平最高，各期相比，差异有统计学意义（P<0.05, 表1）. 与对照组相比，各组中COH组IL6水平最高，HMG组次之，差异有统计学意义（P<0.05）.

    表1IL6水平在生殖周期中的变化（ng/L, x±s）

    组别〖〗n〖〗卵泡期〖〗围排卵期〖〗黄体期CC〖〗12〖〗247±130〖〗392±126a〖〗250±110HMG〖〗12〖〗320±162〖〗502±154ab〖〗312±172COH〖〗12〖〗326±180〖〗636±86ab〖〗296±126正常对照〖〗15〖〗226±118〖〗363±132a〖〗262±136aP<0.05 vs卵泡期和黄体期;bP<0.01  vs正常对照和 CC.  CC:克罗米酚；HMG：尿促性素； COH：超促排卵.

    2.2IL6与卵泡大小、子宫内膜厚度及宫颈黏液评分的相关分析CM中IL6与卵泡大小呈正相关（r=0.792, P<0.05），与子宫内膜厚度、宫颈黏液评分无明显相关性（P>0.05）.

    2.3排卵组与未排卵组CM中IL6水平比较排卵组与未排卵组宫颈黏液中IL6比较（本试验将IVFET促排卵组因行穿卵采集卵子而不计其中），共计39人，采用B超监测为排卵组28人，未排卵组11人，进行比较. 结果排卵组IL6水平高于未排卵组［(451±130) ng/L vs ［61±126］ ng/L ］，差异有统计学意义（P<0.05）.

    3讨论

    　　近年来研究发现，免疫系统对女性生殖内分泌有重要的调节作用，但确切机制尚未阐明. IL6与女性生殖关系密切，其主要由单核细胞活化T细胞等多种细胞产生，是介导天然免疫反应的细胞因子，具有多种生物学效应［4-6］. 本研究发现，正常对照组女性月经周期CM中IL6水平在围排卵期最高，与卵泡期和黄体期相比有统计学差异性（P<0.05）. 可能与E2高峰的卵泡破裂时卵泡液刺激单核细胞释放IL6增加、同时IL6 又在排卵时的“免疫性反应”过程中参与卵泡破裂和排卵有关. 另有学者发现，生理浓度的促性腺激素（Gn）可增加外周血单核细胞分泌IL6［7］. 本研究显示三组促排卵方案中，IVFET组及HMG组CM中IL6在围排卵期高于正常对照组及CC组（P<0.05），可能与促排卵时的外源性Gn药物对IL6的上调作用有关，因为FSH和LH能使外周血单核细胞分泌IL6增加，血液中IL6可能渗透至宫颈. 另外，高浓度的FSH和/或LH可能直接作用于宫颈局部的单核巨噬细胞分泌和释放IL6. 三组在生理周期的变化趋势与正常月经周期相一致，在卵泡期开始上升，围排卵期达高峰，至黄体期回落.

    　　卵泡的发育受多种因素调控，如促性腺激素、雌激素、雄激素、胰岛素样生长因子、卵泡刺激素及多种细胞因子等［8］. 动物垂体实验研究发现IL6可通过潜在的旁分泌和自分泌作用刺激FSH, LH和PRL的释放，间接促进卵泡发育［9-10］. 另有研究发现在青春期小鼠卵巢中检测到高水平IL6的mRNA，其主要存在于内皮细胞，因而认为IL6可能与发育卵泡的血管生成有关. 近期有研究认为IVFET促排卵卵泡液中IL6水平较高者，卵母细胞成熟度佳，进一步证明IL6在卵泡发育成熟中发挥重要作用. 我们的研究发现，围排卵期HMG及IVFET促排卵组中IL6水平较正常对照组及CC组高（P<0.05）. 同时，两组围排卵期卵泡发育好，推测可能部分与使用外源性Gn对IL6分泌有上调作用，从而促进卵泡发育.

排卵是一个极其复杂的过程，该过程可以涉及多种卵巢细胞（如颗粒细胞、膜细胞、基质细胞、卵巢表皮细胞等）、多种信息传递途径和多种特定基因的调控性表达. 卵泡破裂发生排卵被认为是一种炎性反应，IL6实为一种炎性因子［11］，在排卵时的“炎症性反应”过程中也可能参与了卵泡破裂. 有研究表明排卵前卵泡液中中性粒细胞的趋化活性增高，IL6可在排卵前卵泡颗粒细胞中表达. 炎症性细胞因子IL6, IL8等可能通过激发“炎症性反应”而促使排卵，排卵后“抗炎症”细胞因子IL1受体拮抗蛋白（IL1ra）则起到抑制“炎症反应”、促进排卵后“炎症”消退的作用. 本研究显示排卵组IL6水平较未排卵组高，差异有显著性，充分证明IL6在排卵时的“炎症性反应”过程中发挥着重要作用.

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