原因不明习惯性流产患者外周血T细胞亚群变化
发表时间：2009-06-08 浏览次数：710次
作者：傅冷西, 马炎辉
作者单位：福建医科大学 附属第一医院,福州 350005 1.中心实验室,2.妇产科
【摘要】 目的 分析外周血T细胞亚群改变在原因不明习惯性流产(UHA)发病中的可能作用。 方法 应用流式细胞术检测60例UHA(非孕期)患者和20例正常非孕(NNP)妇女外周血T细胞亚群表达水平。 结果 UHA较NNP总T细胞和T细胞共刺激分子CD28+表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);细胞毒T细胞亚群(CTL)比例和CD8+CD3-淋巴细胞群UHA组也较NNP组显著升高(P<0.01)。而CD4+CD25+T(Tr)细胞亚群比例显著下降(P<0.01)。CD4+CD29+T(Ti)细胞亚群和CD4/CD8比值,UHA和NNP表达无显著差别(P>0.05)。 结论 UHA患者存在外周血T细胞亚群比例失调,Tr细胞群比例下降可能与UHA发病有一定关联。
【关键词】 流产,习惯性; T淋巴细胞亚群; 流式细胞术
Changes in T-cell Subsets in Peripheral Blood of Women with Unexplained Habitual Abortion
FU Lengxi, MA Yanhui
1. Central Laboratory; 2.Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China
ABSTRACT: Objective To analyze of the role of peripheral blood T-cell subsets in unexplained habitual abortion(UHA). Methods T-cell subsets were measured by flow cytometry(FCM) in the peripheral blood lymphocytes. The samples were taken from 60 non-pregnant UHA women and 20 non-pregnant of healthy women(NNP). Results T cells(65.43％ vs 61.10%, P<0.05), T-cell costimulatory molecule CD28＋(9.51% vs 0.82%, P<0.01), and cytotoxic T lymphocytes(CLT, 1.74% vs 0.02%, P<0.01), CD8+CD3-lymphocytes(28.18% vs 9.87%, P<0.01) were significantly higher in the peripheral blood lymphocytes of UHA than those of NNP, whereas CD4+CD25+T(Tr) cell subsets was significantly lower(8.79% vs 14.83%, P<0.01) in UHA than those in NNP. CD4+CD29+T(Ti) cell subsets and the mean CD4/CD8 ratio showed no significant difference between UHA and NNP(16.60% vs 16.96%, 1.27 vs 1.33, P>0.05). Conclusion The results suggested that there was disproportion of T-cell subsets in the peripheral blood lymphocytes of UHA. Decrease of Tr cell subsets might be associated with UHA.
KEY WORDS: abortion,habitual; T-lymphocyte cell subsets; flow cytometry
习惯性流产的原因可分为遗传和非遗传因素两个方面,非遗传因素包括内分泌、解剖、感染、免疫、心理和环境因素等。据报道,50%~60％习惯性流产与机体免疫功能异常有关。笔者应用流式细胞术分析60例原因不明习惯性流产(UHA)患者和20名正常非孕(NNP)妇女外周血T细胞亚群比例变化,了解T细胞亚群在UHA发病中的可能作用。
1 对象与方法
1.1 对象
收集2005年9月-2007年3月本院门诊就医的UHA患者60例,非孕期,排除染色体、生殖道解剖结构、内分泌异常和生殖道感染,年龄(30.33±3.25)岁(27~34岁)；NNP妇女20例,年龄(28.36±5.23)岁(23~34岁)。
1.2 方法
无菌采集受检者外周肝素抗凝血2 mL,取全血100 μL分别加入鼠抗人CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE、CD25-PE、CD28-FITC、CD29-PE单克隆抗体20 μL(美国贝克曼-库尔特公司),室温(23~28 ℃),避光孵育20~30 min,加红细胞裂解液0.5 mL作用30 min后,应用流式细胞仪(Epics XL型,美国Coulter公司)上机分析,同时设同型对照管。
1.3 统计学处理
数据经SPSS 11.0软件处理,计量资料采用x±s表示，组间分析应用t检验或方差分析。
2 结 果
UHA较NNP组T总细胞明显升高(P<0.05),T28和CTL表达水平显著升高(P<0.01),CD8+CD3-淋巴细胞群UHA组也较NNP组显著升高(P<0.01)。而Tr和Ts亚群均下降,其中Tr比例显著下降(P<0.01)。T4、T8、Ti细胞亚群比例及CD4/CD8比值两组差别无显著意义(P>0.05,表1)。表1 UHA和NNP组外周血T细胞亚群（略）
3 讨 论
目前对UHA的发病机制知之甚少,多数学者认为与机体免疫功能异常有关。邱丽华等报道,正常妊娠与非妊娠妇女外周血Tr细胞亚群差别无统计学意义,而原因不明复发性流产妇女外周血Tr细胞亚群较正常非妊娠妇女显著下降［1］。陈巧英等发现,早孕期正常妊娠者外周血Tr比例显著高于早孕期自然流产患者及黄体期育龄妇女,早孕期自然流产患者外周血CD28＋表达水平显著高于早孕期正常妊娠者和黄体期育龄妇女［2］。本组实验结果,UHA患者外周血T总细胞数、T28和CTL表达水平较NNP妇女显著升高(P<0.05,P<0.01),而Tr细胞群比例显著下降(P<0.01),提示UHA患者外周血T细胞杀伤功能增强。
Tr细胞亚群是体内自然存在的,能分泌白细胞介素4(IL-4)、IL-10、β转化生长因子(TGF-β)、表达白介素-2α受体(IL-2Rα,即CD25受体)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子,对效应性T细胞具有抑制作用,是调节性T细胞的重要亚群,在维持自身免疫耐受中起关键作用。Nishikawa等证实Tr细胞具有强的抑制CD4+CD25-T细胞和T8细胞增殖的活性［3］。Taams等发现Tr细胞与单核细胞/巨噬细胞共培养,单核细胞仅产生最小剂量的细胞因子,而与CD4+CD25-T细胞共培养,则使后者产生大量亲炎症因子(TNF-α,IFN-γ和IL-6)［4］。因此,Tr细胞亚群数量的减少不能正常有效地诱导孕妇免疫耐受,容易发生对异型抗原的免疫排斥反应,乃至影响胚胎着床而流产。董琳等应用环孢素A上调孕鼠外周Tr细胞,诱导母胎免疫耐受,可降低孕鼠自然流产模型胚胎吸收率,改善妊娠预后［5］。杨卉等对原因不明复发性流产妇女实施主动免疫治疗,妊娠成功者Tr细胞显著多于妊娠失败者［6］。由此推测,孕妇体内Tr细胞亚群减少可能是UHA发病重要机制之一,并有望成为临床免疫治疗的靶点和疗效监测指标之一。
本组实验还表明,UHA组CD8+CD3-淋巴细胞亚群较NNP组显著升高(P<0.01)。CD8+CD3-淋巴细胞亚群可能是NK细胞的另一亚群,对异型抗原具有杀伤作用,是否参与UHA发病过程有待进一步研究。
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［4］Taams L S,van Amelsfort J M,Tiemessen M M,et al. Modulation of monocyte/macrophage function by human CD4+CD25+ regulatory T cells［J］. Hum Immunol, 2005,66(3):222-230.
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