妊娠高血压综合征患者血清中抗氧化物与胎盘Bax、Bcl-2关系的探讨

作者：姜怡邓

作者单位：宁夏医学院基础学院,银川 750004

【摘要】  目的 探讨妊娠高血压综合征(PIH)患者外周血清中抗氧化物和胎盘组织细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平的关系。方法 检测68例PIH病人(PIH组)和25例正常孕妇(NLP 组)血清中GSH-px、MDA 、SOD 活性,并用免疫组织化学SP法检测胎盘组织Bax、Bcl-2蛋白并进行比较。结果 PIH中、重度组血清GSH-px/ MDA、SOD/ MDA、Bcl-2/Bax 比率明显低于NLP组(P＜0.05);PIH中、重度组胎盘组织细胞凋亡指数、Bax高于NLP组(P＜0.01);各组P53蛋白均未见阳性表达。血清GSH-px/MDA、SOD/MDA与凋亡指数、Bcl-2/Bax呈正相关(P＜ 0.01)。结论 PIH的发生与机体氧化和抗氧化平衡失调及与其引起的胎盘组织细胞凋亡增加有关。

【关键词】 氧化和抗氧化平衡 Bax蛋白 P53蛋白

　　Relationship Between Serum Antioxidants and the Expression of Bcl2、Bax Apoptosis Protein of Placental Tissues with Pregnancyinduced Hypertension Syndrome

　　1.School of Basic Medicine, Ningxia Medical College, Yinchuan 750004; 2.City Health Care Hospital for Women and Children,Yinchuan 750001

　　Abstract: Objective  To explore the relationship between superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSHpx) and malondialdehyde (MDA) in peripheral venous blood of patients and the expression of Bcl2、Bax apoptosis protein of placental tissues with pregnancyinduced hypertension syndrome (PIH). Methods  The activity of SOD, GSHpx and content of MDA in the serum of peripheral blood of  nonpregnant women, normal pregnant women and PIH women were measured and the expression of Bcl2, Bax were assessed by immunolistochemical detection. Results  The ratio of GSHpx/MDA、SOD/MDA、Bcl2/Bax in normal pregnant women was significantly lower than those in nonpregnant women(P＜0.05),apoptosis index (AI)and the expression of Bax in normal pregnant women were significantly higher than those in nonpregnant women(P＜0.05)； there were significantly positive correlation in the ratio between GSHpx/MDA、SOD/MDAand Bcl2/Bax、apoptosis index (P<0.05). Conclusion  The mechanism of PIH  is associated with the disequilibrium of oxidation,anti oxidation and apoptosis overexpression of placental tissues induced by it.

　　Key words: pregnancyinduced hypertension；disequilibrium of oxidation and antioxidation；Bax； P53

　　妊娠高血压综合征(pregnancy-induced hypertension，PIH)是影响母儿围生期发生率和死亡率的重要因素之一,其病因及发病机制至今尚未完全阐明。大量实验证明PIH患者胎盘组织凋亡增加［1］，细胞凋亡由一系列基因调控,其中促凋基因Bax和抑凋基因Bcl-2被认为是非常重要的成员,Bcl-2/Bax的比率决定了细胞对刺激的敏感性。为此,本实验检测PTH 胎盘组织细胞的凋亡、凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白,以及PIH患者血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,旨在探讨SOD、GSH-px、MDA和Bax、Bcl-2的相关性及在PIH发病中的作用，为PIH的防治提供理论依据。

　　1  对象与方法

　　1.1  研究对象

　　2003年11 月至2005年4月银川市妇幼保健院产科收治PIH患者68例，PIH 诊断及分类标准依据乐杰主编的《妇产科学》进行［1］,按病情轻重分为轻、中、重PIH组，其中轻度28 例，年龄(27.86±4.80)岁，平均孕周 (39.01±1.26)周；中度20 例，年龄(28.25±4.62)岁，平均孕周 (38.90±1.50)周；重度20 例，年龄(27.54±5.12)岁，平均孕周 (39.20±0.92)周；随机选取同期住院的血压正常妊娠妇女25 例作为对照组(NLP 组)，年龄(27.06±5.25)岁。所有病例均无其他妊娠合并症及并发症。两组孕妇年龄、孕周及孕次、分娩方式比较,具有可比性。

1.2  方法

　　1.2.1  标本采集：抽取被观察者清晨空腹静脉血6mL,妊娠高血压综合征组于治疗前采血，肝素抗凝，离心,待测。胎盘娩出后,于胎盘母体面的四象限中心取1cm×1cm×1cm组织块40g/L，生理盐水漂洗,立即置于4%多聚甲醛(pH 7.4)中,固定24 h(4℃)，常规石蜡包埋。

　　1.2.2  实验方法：① GSH-px活性测定采用酶偶联法［2］;MDA含量测定采用硫代巴比妥酸比色法; SOD 活性测定采用黄嘌呤氧化酶法,MDA 和SOD 试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

    ②Bcl-2、Bax的检测  以SP免疫组织化学法检测。蛋白表达指数［3］(protein expression index,PEI)=平均吸光度×阳性细胞百分比×100。

    ③凋亡的胎盘组织半定量分析  应用改良的末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的带荧光标记法(TUNEL)测定［4］。凋亡细胞数与总细胞数的比值×100即为凋亡指数(apoptosis index,AI)。

　　1.3  统计学方法  所有测量数据采用prism 3.0进行统计学处理,以均数±标准差(±s)表示，两样本均数间比较采用t检验，组间的两两比较采用Student-Newman-Keuls检验。

　　2  结果

　　2.1  各组患者血清GSH-px、SOD活性和MDA含量测定结果

    轻度PIH组与NLP组比较，GSH-px、SOD活性、MDA含量的差异无统计学意义(P＞0.05)，中、重度PIH 组与NLP组比较各指标间的差异有统计学意义(P＜0.05)，且与病情有关,病情越重MDA水平增加越明显，GSH-px、SOD下降越明显,(P＜0.05)，见表1。表1  各组血清GSH-px、SOD活性和MDA水平测定结果的比较(略)

　　2.2  各组患者胎盘组织中Bcl-2、Bax蛋白表达及细胞凋亡指数(表2)

    轻度PIH组与NLP组比较Bcl-2、Bax、凋亡指数、Bcl-2/Bax指标差异无统计学意义(P＞0.05),而中、重度PIH组的Bcl-2的蛋白表达指数、Bax的蛋白表达指数、凋亡指数明显高于NLP组(P＜0.05)，Bcl-2/Bax明显低于NLP组(P＜0.05)。表2  各组胎盘组织蛋白表达指数和Bcl-2与Bax比值的比较(略)

　　2.3  GSH-px、SOD、MDA与凋亡指数、Bcl-2/Bax的相关性分析

    SOD/MDA及GSH-px/MDA与凋亡指数、Bcl-2/Bax存在着明显的正相关关系(r=0.612、0.735；r=0.712、0.789,P＜0.01)。

　　3  讨论

    本实验结果显示,轻度PIH患者GSH-px、SOD活性增加，但和对照组相比差异无统计学意义，主要是由于妊娠期间随着新陈代谢的增强,有氧代谢途径产生的自由基增加;孕期胎盘的代谢功能旺盛,耗氧量增加,故有氧代谢产生的自由基增加，由此引发的脂质过氧化反应也增强,但人体存在着自由基产生与清除的酶系统,二者处于平衡状态,故并未造成人体的严重损伤［5］。中、重度PIH 患者血浆MDA 水平明显高于正常孕妇,而血浆SOD、GSH-px活性及SOD/MDA 值明显低于正常孕妇，表明中、重度PIH患者自由基的产生和清除处于不衡状态,氧化与抗氧化功能在更高水平上没有达到平衡,机体明显受到脂质过氧化损伤。推测PIH 时血管内皮细胞损伤可能是氧自由基所致。    已有研究表明［6］，生理状态下细胞凋亡的主要基因分为两大类:一类为促进细胞凋亡的基因,如Bax;另一类为抑制凋亡的基因,如Bcl-2、Bcl-2 与Bax比值决定了细胞对凋亡刺激的敏感性和细胞生存与死亡的趋势［7］。本实验检测了凋亡相关基因Bcl-2、Bax和P53蛋白表达，发现与NLP组比较,中度和重度PIH组胎盘组织的Bax 蛋白表达明显增加,而Bcl-2蛋白表达变化不明显,故Bcl-2与Bax比值下降，表明中、重度PIH患者胎盘组织细胞对凋亡刺激敏感。吴琦嫦等［8］对宫内窘迫患者胎盘组织的研究表明，宫内窘迫患者胎盘组织细胞凋亡可能是非p53依赖性的由Bax介导的细胞凋亡，与本实验结果一致，具体机制尚需进一步研究。

在细胞凋亡的调控中，氧化应激也可能是一个重要因素［9］。有研究表明ＳＯＤ、GSH-px水平的增高及自由基形成减少可延缓或抑制细胞凋亡的发生，因而机体氧化能力下降,自由基的增多可增加凋亡的敏感性。本研究发现，GSH-px/MDA、SOD/MDA与凋亡指数、Bcl-2/Bax存在着明显的正相关关系，表明PIH的形成可能与氧化应激直接引起及调节细胞凋亡相关基因Bcl-2等有关。

    综上所述，PIH发生可能与氧化应激有关,机体过氧化引起机体自由基增加，自由基作为信号因子通过信号转导启动细胞凋亡相关基因表达加速了PIH的发生，但其确切机理尚待进一步研究。清除自由基及其产物,提高机体抗氧化能力，已成为预防和治疗妊高征的新途径。

【参考文献】  　　［1］乐杰.妇产科学［M］. 第6版.北京:人民卫生出版社,2004.118.

　　［2］Ossole JO，Groppa MD，Tomaro ML，et al.Relationship between oxidative stress and heme oxygenase induction by coppersulfate［J］. Arch Biochen Biophys，1997，3(37)：332-338.

　　［3］赵明中，高承梅，张宇阳，等.通心络胶囊对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响［J］.中华心血管病杂志，2000，28(3)：206-211.

　　［4］余泽洪,陈林祥,王晋明.伊贝沙坦对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡及相关基因Bax、Bcl22 和P53 表达的影响［J］.中国动脉硬化杂志，2004,(12):415-418.

　　［5］Zhang J，Zeisler J，Hatch MC，et al.Epidemiology of pregnancy-induced hypertension［J］. Epidemiol Rev，1997，1(9):218-222.

　　［6］Mari PT，Voravit S，Kat hleen H，et al.Apoptosis in human term placenta［J］. Gynecol Obstet Invest，2000，50：88291.

　　［7］QiaoS,NagasakaT,HaradaT,et al.p53,Bax and Bcl-2 expression and apoptosis in gestation trophoblast of completehydatid from mole［J］. J Placenta，1998，19 (26)：361-369.

　　［8］吴琦嫦,陈美波.p53、Bcl22和Bax基因表达与宫内窘迫患者胎盘细胞凋亡的相关性研究［J］. 现代妇产科进展,2000，9 (4)：265-267.

　　［9］金惠铭，王建枝.病理生理学［M］. 第6 版.北京:人民卫生出版社,2004.136.