新生儿溶血病三项试验在临床中的应用

新生儿溶血病(HDN)是有一种因胎儿红细胞表面抗原与母亲体内相应免疫抗体结合出现免疫反应造成新生儿出现溶血的免疫疾病[1]。HDN 发病与母亲体内IgG 血型免疫抗体种类和胎儿红细胞表面抗原密切相关[2]。本研究通过回顾性分析溶血病患儿的HDN 血型检测结果及血清三项试验阳性结果对其进行探讨，现将报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料　采集2010年12月到2012年12月本院母婴室和新生儿科高胆红素血症患儿血标本400份。患儿出生1～10d，其中男性236 例，女性164 例。所有患儿在性别、年龄、病情等方面比较差异无统计学意义(p>0.05)。

1.2　仪器与试剂　微柱凝胶卡：江阴力博医药生物技术有限公司提供ABO/RhD 血型定型检测试剂卡。ABO 试剂红细胞：合肥晨光医疗用品有限公司提供的人ABO 血型反定型用红细胞试剂盒。

1.3　方法

1.3.1　血型鉴定[3]　患儿及其父母ABO/Rh 血型采用新生儿及父母亲抗凝血做ABO/Rh血型鉴定。

1.3.2　ABO HDN 检测[4]　直接试验：取新生儿溶血病检测卡1张，滴加患儿3%红细胞悬液50μL 后在专用离心机中离心8min。离心后，取出检测卡观察后判定结果并记录。游离试验：取新生儿溶血病检测卡1张，前3孔分别标记A、B、O 三种血型。将A、B、O 三种血型的标准红细胞50μL 加入对应孔中。放散试验：结合试剂盒说明书进行操作处理红细胞后，先后将患儿放散液50μL 和A、B、O 红细胞悬液试剂50μL 加入游离试验所用微柱凝胶卡的4～6孔。37 ℃恒温孵育10min，离心6min后取出观察结果。1～3 孔为游离试验结果，4～6孔为放散试验结果。

1.4　疗效评定标准[56]　观察试验结果时，直抗试验，游离和放散试验均以检测出红细胞分布在微柱上端或凝胶中为试验结果阳性，若红细胞离心后附着在微柱底部为阴性。其中，游离试验和放散试验均以在微柱凝胶中检测出与新生儿红细胞相结合的抗体为阳性，并以此为确诊标准。若放散试验检测结果为阴性，且直抗试验或游离试验中有任意一种为阳性则结果为疑似ABO HDN。三项试验检测均为阴性则，排除ABOHDN。1.5　统计学处理　采用SPSS18.0 软件进行统计学处理，计数资料采用卡方检验，计量资料狓±狊表示，计量资料采用狋检验，以p<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1　患儿HDN 血型检测结果　400例新生儿中，患儿血型分类为A 型和B 型的分别有240 例(56.25%)、135 例(33.75%)，Rh型血为25例(6.25%)。

2.2　血清三项试验阳性结果　400 例新生儿中共54 例确诊为HDN，其中A 型血35例，B 型血16例及Rh型3例对应血型比例为14.58%、11.85% 及12.00%，差异有统计学意义 (p<0.05)。血清三项试验中游离抗体试验呈阳性的为27例(25.71%)，放散试验呈阳性的为69例(65.72%)，直接抗人球蛋白试验阳性为9例(8.57%)。

2.3　确诊患儿血清三项试验结果　400例高胆红素血症患儿中，54例确诊为HDN，总阳性率为13.5%。其中，直抗试验和游离抗体试验均阴性12例(22.22%)，仅游离试验阴性14 例(25.93%)，仅直接抗人球蛋白试验阴性21例(38.89%)，三项者均阳性7例(12.96%)。

3　讨　　论

HDN 为临床造成新生儿死亡的一大重要原因，可导致胎儿出现发育停滞、畸形、流产及新生儿高胆红素血症[7]。其主要发病机制为患儿与母亲血型不合，造成母体免疫系统产生抗体与患儿红细胞表面抗原相结合，致使新生儿出现红细胞凝集并破裂出现溶血。HDN 可破坏患儿体内红细胞，增加肝脏和脾脏负担，导致患儿出现肝脾肿大、黄疸等症状。同时，患儿在溶血过程中失去红细胞，血液供氧能力降低，其供氧无法满足自身生理功能正常运转，出现缺血性贫血、发育迟缓等症状。若溶血继续发展恶化，将引起胎儿畸形、死胎、流产等严重后果。对新生儿进行早期HDN 检查，尤其是血清三项指标试验可较高程度的检测出新生儿发生HDN 的情况，有利于临床对新生儿的诊疗和提高新生儿存活率[8]。HDN 发病率在很大程度上与患儿血型和母亲血型相关。有研究显示，我国HDN 发病率在母亲为O 型血、胎儿为A 型血或B型血时最高[910]。此外，Rh 血型系统中出现HDN 的比例一般在15% ～20%，且D 抗原在其发病总数中占多数[11]。临床诊疗中，通常以母亲血清IgG 抗A 及IgG 抗B 效价大于或等于64为判断是否可能引起HDN 的标准。当效价大于或等于128时，HDN 发生率明显增高，对新生儿的健康造成较大威胁[12]。此时较大可能引起新生儿黄疸、死胎等，应适当选择药物以降低孕妇血清抗体效价，保证母婴健康。本研究中，新生儿直接抗人球蛋白试验阳性例数仅为9 例(8.57%)，游离抗体阳性例数为27 例(25.71%)，差异有统计学意义(p<0.05)，表明其体内存在抗体，但并不一定致敏出现溶血。与相关研究中直抗试验阳性和游离试验阳性疑似HDN 相符。直接抗体试验阳性或放散抗体试验阳性中任何一个均可确诊，但只有可直接反映致敏红细胞状况的释放抗体试验阳性才可保证诊断可靠性。近年来，随着母婴血型与HDN 发病率的关系研究成果不断更新，HDN 的检测方法日趋完善。利用机体IgG 抗A(B)效价状况，通过Rh系统与ABO 系统对HDN 可能性进行诊断将更加准确。此外，本研究结果显示54例HDN患儿血型检测结果中，A 型血35例，B型血16例及Rh型3例对应血型比例为14.58%，11.85% 及12.00%(p<0.05)。这说明，在高胆红素血症新生儿中，A 型血患儿发生HDN 的概率明显较B型血患儿和Rh 型血患儿高，且B 型血患儿出现HDN 概率相对较低。综上所述，本研究中共54 例确诊为HDN，总阳性率为13.5%(54/400)，其中仅直接抗人球蛋白试验阴性和三项者均阳性分别为占38.89%和12.96%(p<0.05)。表明新生儿血清三项检测对新生儿溶血病诊断具有重要意义，直接抗人球蛋白试验阳性结果是区别ABO 和Rh 溶血病的重要标志。同时，A 型血患儿发生HDN 的概率明显高于B 型血患儿，可根据患儿与母亲血型做出相应防治措施，对于临床关于新生儿HDN 的诊疗和防治具有重要意义。

参考文献

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(收稿日期：20131215)