儿童紫癜性肾炎肾组织VCAM-1的表达及其意义

　　作者：卢立肖,陈晓英,林瑞霞,杨青,陈敏广　　作者单位：温州医学院附属育英儿童医院 肾内科，浙江 温州 325027

　　【摘要】目的 ：探讨紫癜性肾炎(HSPN)患儿肾活检组织血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达情况及其意义。方法 ：应用免疫组化技术检测8例HSPN和7例薄基底膜病(对照组)通过肾穿刺活检术获得的肾组织VCAM-1表达情况(用IOD值表示)，分析其与肾脏病理、主要临床指标(包括24 h尿蛋白、尿红细胞)的关系。结果：对照组的肾组织仅少量表达VCAM-1;HSPN患儿的肾小管、肾间质及肾小球中VCAM-1表达均增加，以小管间质部位为著，并随ISKDC肾病理级别的增加而增强;平均肾组织VCAM-1表达的IOD值在Ⅲ-Ⅳ级组为(6.54±2.02)×105，在Ⅰ-Ⅱ级组为(2.45±0.07)×105，对照组为(0.76±0.12)×105，Ⅲ-Ⅳ级组与Ⅰ-Ⅱ级组均明显高于对照组(均P <0.01)，且Ⅲ-Ⅳ级组高于Ⅰ-Ⅱ级组(P <0.05)。HSPN患儿的肾组织VCAM-1表达的IOD值与其ISKDC肾病理分级呈显著正相关(r =0.866，P <0.01)，与IgA和C3沉积量均无显著性相关(r分别为0.339、-0.436，均P >0.05)，与24 h尿蛋白量呈显著正相关(r =0.755，P <0.05)，而与尿沉渣红细胞量无显著性相关(r =-0.626，P >0.05)。结论 ：VCAM-1参与了HSPN的发生、发展过程，其肾组织的VCAM-1表达可反映其病情的严重程度。

　　【关键词】 紫癜性肾炎;血管细胞黏附分子-1;肾组织;儿童

　　紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN)作为儿科最常见的继发性肾小球疾病之一，虽然其大多预后良好，但约15%的患者会有活动性肾脏病，约3%～20%的患者会发展到肾衰竭[1-2]，然而它的确切病因和发病机制至今尚未完全清楚。近几年来血管细胞黏附分子-1(vascular cellular adhesion molecule-1，VCAM-1)在HSPN发病中的作用也引起研究者的重视[3-4]，但对其肾组织VCAM-1表达的研究甚少，为了探讨VCAM-1在儿童HSPN肾组织的表达情况及其可能起的作用，我们对8例HSPN患儿及7例病理学改变为薄基底膜病的患儿肾组织VCAM-1表达进行检测，现报告如下。

　　1 对象和方法

　　1.1 研究对象 病例来源于2006年1月至2007年4月间住院于我科并行过肾穿刺活检术的8例HSPN患儿(HSPN组)，年龄7～12岁，其中男5例，女3例;均符合中华医学会儿科学分会肾脏病学组于2001年制定的HSPN诊断标准[5]。对照组标本来自我科住院的7例病理学改变为薄基底膜病的患儿，年龄7～13岁，其中男4例，女3例。两组在性别构成及年龄上差异无显著性(P均>0.05)。

　　1.2 检测指标和方法

　　1.2.1 生物学指标：所有HSPN病例均于肾活检当日送检24 h尿蛋白定量和新鲜尿沉渣红细胞半定量。

　　1.2.2 肾组织VCAM-1的检测：一抗采用武汉博士德公司的兔抗人VCAM-1多克隆抗体，二抗采用北京中杉公司试剂盒，检测方法按试剂盒说明书进行。封片后，自然晾干，尽快观察，并使用自动显微照相装置在显微镜下摄取图像。肾组织的VCAM-1表达采用 Image-Pro Plus5.0 医学图像分析软件，400×光镜下计数每张切片单位视野内的累积光密度(IOD)，IOD为经标准灰密度校正后，在同等条件下测得的阳性物质的平均总分减去平均背景积分。IOD能反映选定区域的蛋白表达总量，是阳性面积与阳性平均光密度的乘积。图片放大倍数表示物镜倍数乘目镜放大倍数。在统一放大倍数(40×10)下，每张切片随机选取4个视野，取其平均值。

　　1.2.3 肾组织病理检测：分别行光镜、免疫荧光及电镜检查。光镜行HE染色，PAS染色，Masson染色，PASM染色;免疫荧光行IgA、IgG、IgM、C3、C4、Clq等检查。病理诊断分级按中华医学会儿科学分会肾脏病学组修订的国际儿童肾脏病研究中心(ISKDC)分类标准[5]，分为6级。

　　1.3 统计学处理方法 多组样本均数比较进行方差齐性检验，组间比较比较采用单因素方差分析，方差齐者两两比较采用LSD法，方差不齐者进行Dunnett’s T3检验。相关分析采用Bivariate过程的Spearman等级相关分析。

　　2 结果

　　2.1 HSPN患儿肾组织病理检查结果 8例HSPN患儿的肾组织病理诊断及ISKDC分级的结果为：Ⅱ级2例，Ⅲ级5例，Ⅳ级1例。免疫病理分型：单纯IgA沉积型5例;IgA+IgG沉积型1例;IgA+IgM沉积型1例;1例免疫病理呈阴性反应。

　　2.2 HSPN患儿肾组织VCAM-1表达特点 对照组的肾小球、肾小管和肾间质VCAM-1的表达多为阴性，仅在个别肾小球球囊壁层上皮细胞、近曲肾小管上皮细胞及肾间质血管内皮见到散在点状VCAM-1阳性信号。HSPN患儿的肾小球、肾小管及肾间质中可见较多斑点状分布的VCAM-1阳性信号，以小管间质部位为著，且随着系膜细胞的增殖，VCAM-1在上述部位表达增加，并随病理分级增加阳性信号表达明显增强(见图1)。

　　2.3 HSPN患儿肾组织VCAM-1表达与肾组织病理之间的关系

　　2.3.1 与ISKDC肾病理分级的关系：随着ISKDC肾病理分级的增加，肾小球和肾小管间质区域的VCAM-1表达增多，Ⅲ-Ⅳ级和Ⅰ-Ⅱ级病理改变的肾组织VCAM-1表达的IOD值均明显高于对照组，差异有显著性(P <0.01、P <0.05)，而Ⅲ-Ⅳ级病理改变的肾组织VCAM-1表达的IOD值高于Ⅰ-Ⅱ级，差异亦有显著性(P <0.05)，见表1。

　　2.3.2 与肾组织病理学改变特点的相关性分析 HSPN患儿肾组织的VCAM-1表达的IOD值与其ISKDC肾病理分级呈显著性等级正相关(r =0.866，P<0.01)，与IgA沉积量无显著性相关(r=0.339，P >0.05)，与C3沉积量亦无显著性相关(r=-0.436，P >0.05)。

　　2.4 HSPN患儿肾组织VCAM-1表达与尿蛋白、尿红细胞的相关性分析 HSPN患儿肾组织VCAM-1表达的IOD值与其24 h尿蛋白量呈显著正相关(r =0.755，P <0.05)，而与尿沉渣红细胞量无显著性相关(r =-0.626，P >0.05)。

　　3 讨论

　　VCAM-1作为一种黏附分子，主要由激活的内皮细胞产生。在正常肾脏，VCAM-1仅少量表达于部分包曼氏囊壁层上皮细胞、肾小管上皮细胞和间质树突状细胞，而不表达于肾小球。由于薄基底膜病是一种与遗传相关的肾小球基底膜发育障碍性疾病，并不涉及炎症、免疫等因素，故我们推测其肾脏的VCAM-1表达情况应与正常肾脏相似，而且本研究结果证实了这点。在肾小球肾炎时，不管是人还是动物模型，其肾小球内皮细胞的VCAM-1表达均增多，而且它还可表达在炎症肾小球的其他部位，包括新月体细胞和系膜细胞[6-7]。Seron等[8]观察了50例肾小球疾病和小管间质性疾病肾组织中VCAM-1表达，发现新月体肾炎、血管炎、狼疮性肾炎和IgA肾病患者的肾小管上皮细胞VCAM-1表达均有不同程度的增加，其中以血管炎者增加最为明显。HSPN作为儿科常见的小血管炎所致的继发性肾小球肾炎，本研究发现其近曲肾小管、肾小球及肾间质中可见斑点状分布的VCAM-1呈阳性信号，以肾小管及肾间质为著，随着系膜细胞的增殖，VCAM-1在上述部位表达增加，并随ISKDC病理分级增加阳性信号表达增强，且肾组织VCAM-1表达与ISKDC肾病理分级间呈显著正相关，而与肾脏IgA和C3沉积情况无显著相关，提示肾组织VCAM-1的表达情况可以直接反映肾脏病变的严重程度，同时也说明VCAM-1可能参与了HSPN的发病过程。

　　众所周知，尿蛋白水平是临床上评估HSPN患儿病情严重程度和判断其预后的一个常用的良好指标，它的增加往往提示病情的恶化。本研究显示HSPN患儿的肾组织VCAM-1表达与24 h尿蛋白量呈显著性正相关，这可进一步说明HSPN患儿的肾组织VCAM-1表达与病情严重程度存在密切关系，其机制可能如下：①炎症细胞黏附于血管内皮，导致肾小球与基底膜之间的黏附改变出现蛋白尿;②黏附分子与其受体结合促进炎症细胞浸润，同时高表达的VCAM-1作为抗原提呈细胞造成细胞免疫肾损伤;③肾小球的炎症细胞释放一些因子如转化生长因子-β、血小板源生长因子，导致细胞外基质扩张、蛋白尿和肾小球硬化[9]。

　　【参考文献】

　　[1] Rigante D,Candelli M,Federico G,et al.Predictive factors of renal involvement or relapsing disease in children with　Henoch-Schonlein purpura[J].Rheumatol Int,2005,25(1):45-48.

　　[2] Kawasaki Y,Suzuki J,Sakai N,et al.Clinical and pathological　features of children with Henoch-Schoenlein purpura　nephritis: risk factors associated with poor prognosis[J].　Clin Nephrol,2003,60(3):153-160.

　　[3] Mrowka C,Heintz B,Sieberth HG.VCAM-1,ICAM-1,and E-　selectin in IgA nephropathy and Schonlein-Henoch　syndrome:differences between tissue expression and serum　concentration[J].Nephron,1999,81(3):256-263.

　　[4] Pall AA,Howie AJ,Adu D,et al.Glomerular vascular cell ad-hesion molecule-1 expression in renal vasculitis[J].J Clin　Pathol,1996,49(3):238-342.

　　[5] 中华医学会儿科学分会肾脏病学组.小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗[J].中华儿科杂志,2001,39(12):746-　749.

　　[6] Ogawa T,Yorioka N,Ito T,et al.Ultrastructural localization　of vascular cell adhesion molecule-1 in proliferative and　crescentic glomerulonephritis[J]. Virchows Arch,1996,429　(4-5):283-291.

　　[7] Mulligan MS,Johnson KJ,Todd RF 3rd,et al.Requirements　for leukocyte adhesion molecules in nephrotoxic nephritis　[J].J Clin Invest,1993,91(2):577-587.

　　[8] Seron D,Cameron JS,Haskard DO.Expression of VCAM-1　in the normal and diseased kidney[J].Nephrol Dial　Transplant,1991,6(12):917-922.

　　[9] Park CW, Kim JH, Lee JH, et al.High glucose-induced inter-　cellular adhesion molecule-1(ICAM-1) expression through　an osmotic effect in rat mesangial cells is PKC-NF-kappa　B-dependent[J].Diabetologia,2000,43(12):1544-1553.