L-4内含子3VNTR基因多态性与儿童哮喘的相关性研究
发表时间：2011-10-13 浏览次数：445次
作者：李炜,郭春平,黄实方 作者单位：342800江西宁都县人民医院
【关键词】 L-4内含子 3VNTR基因多态性 儿童哮喘 相关性研究
资料与方法
研究对象：按照中华医学会呼吸病分会制定的支气管哮喘防治指南的诊断和分度标准，选择本院2005年3月～2006年10月门诊及住院的符合标准的42例患儿，年龄2～12岁，男27例，女15例。正常对照儿童标本来自本县的幼儿园及小学学生体验标本。年龄4～12岁，男19例，女13人，无哮喘史或家族史。
方法：取全血2ml提取DNA。参照DNA Marker 估算DNA浓度。反应体系为25μl/管，含50～150ng基因组DNA，200nm dNTPs，引物各0.2μM和1.0UTaq聚合酶。用美国PE公司9600型PCR仪扩增。反应条件为94℃预变性5分钟，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，扩增35个循环，最后72℃延伸7分钟。10μl PCR产物在2%含溴化乙锭琼脂糖胶上电泳。183bp和253bp的片段分别认为是等位基因RP1和RP2。
统计学分析：使用SAS6.0软件做统计分析。经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，表明各基因型频率已达遗传平衡。卡方检验分析基因型分布和等位基因频率。P<0.05认为有统计学意义。
结 果
42例哮喘组IL-4 VNTR基因型中，RP1/RP1 32例，RP1/RP2 9例，RP2/RP2 1例。34例正常儿童对照组IL-4 VNTR基因型中，RP1/RP1 18例，RP1/RP2 12例，RP2/RP2 4例，X2=4.513，P<0.005，两组IL-4 VNTR基因型有非常显著差异，哮喘组IL-4 VNTR等位基因RP1和RP2的频率分别为86.9%和13.1%，正常对照儿童等位基因RP1和RP2的频率分别为70.6%和29.4%，哮喘组IL-4 VNTR等位基因RP1的频率比对照儿童组IL-4 VNTR等位基因RP1高，X2=6.262,P<0.005，两组IL-4 VNTR等位基因频率有非常显著差异。
讨 论
变应性哮喘属于Ⅰ型变态反应，患者外周血中IgE含量增高。哮喘发病的重要基础是Th1/Th2细胞平衡失调，朝向Th2极化及Th2细胞的活化。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-r、TNF-b，诱发细胞免疫;Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-6 、IL-10，主要促进体液免疫反应。活化的Th2细胞产生IL-4水平显著升高，能使静止的B细胞活化，转化B细胞合成抗体的类型，即从IgM转换成IgE。在幼稚T细胞向Th2型细胞分化的过程中，IL-4是调控该过程中唯一的重要细胞因子，促进其发育分化，并抑制Th1的效应功能;Th1分泌的干扰素(INF-γ、INF-α)能明显抑制由IL-4诱导的人类B细胞合成的IgE，二者在哮喘发病中相互影响，相互抑制。在气道炎症方面，IL-4可使VCAM-1的表达上调，从而使炎性细胞向炎症部位聚集。许多研究证明了IL-4 VNTR RP1等位基因较RP2等位基因诱导了更高水平的IL-4表达。本研究提示小儿哮喘与IL-4内含子3 VNTR 基因型多态性及等位基因频率相关。哮喘组IL-4 VNTR 等位基因RP1的频率较正常的对照儿童组IL-4 VNTR等位基因RP1高，可能等位基因RP1调控IL-4的表达，使IL-4在体液的水平升高，而参与了哮喘的发生。这些结果还需要更大的样本量来进一步证实。
【参考文献】
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