人热休克蛋白60及其自身抗体与冠心病的相关性

　　作者：范智文,李志梁,刘映峰,钟文亮,周鹏　　作者单位：南方医科大学附属珠江医院心血管内科，广东，广州 510282

　　【摘要】目的探讨人热休克蛋白60(HSP60)及其自身抗体(HSP60 Ab)与冠心病的关系。方法：从我院2007年1月到2007年8月心内科住院患者中入选96例研究对象，分为冠心病(CHD)组[包括急性冠脉综合征(ACS)组、稳定性心绞痛(SAP)组]、胸痛综合征(CPS)组、正常对照组 (各组性别、年龄,高危因素等匹配)。用ELISA 方法分别测定血清HSP60和HSP60 Ab浓度。结果：HSP60水平：CHD组的明显高于CPS组和对照组(P<0.01);ACS组的明显高于SAP组(P<0.01);SAP组，CPS组和对照组之间差别无显著性(P>0.05);血清 HSP60 Ab 水平：CHD组的明显高于CPS组和对照组(P<0.01)，ACS组明显高于SAP组(P<0.01)，SAP组的明显高于对照组和CPS组(P<0.01)，对照组和CPS组的差别无显著性(P>0.05);血清HSP60 与HSP60 Ab水平呈正相关(r=0.805,P<0.01)，均为预测ACS的独立危险因素(β=0.785，P<0.01)。结论：血清HSP60、HSP60 Ab水平与冠心病有明显相关性,可能在冠心病及急性冠脉综合征的发病过程中起着相互协同作用，是预测急性冠脉综合征的独立危险因素。

　　【关键词】 监控蛋白60,抗体,冠状动脉疾病

　　Abstract：Objective:To investigate the correlation among coronary heart disease(CHD) and serum heat shock protein 60(HSP60) and its autoantibody(HSP60 antibody).Methods:A total of 96 subjects including 40 patients with acute coronary syndrome(ACS),24 patients with stable angina pectoris(SAP),16 patients with chest pain syndrome(CPS) and 16 healthy adult as controls were selected from our hospital (gender,age and other risk factors were parallel in every group).The levels of Hu-HSP60 and HSP60 Ab were determined by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).Results:The serum Hu-HSP60 levels in patients with CHD(including ACS and SAP) were significantly higher than those in CPS group and controls(P<0.01);serum HSP60 level in ACS group was significantly higher than that in SAP group(P<0.01)，whereas there was no significant differences among SAP, CPS and control group(P>0.05).The serum levels of Hu-HSP60 Ab in CHD patients was significantly higher than that in CPS group and control group (P<0.01); The serum HSP60 Ab level in ACS group was significantly higher than that in SAP group(P<0.01) and there was no significant differences between CPS group and control group(P>0.05).There was a positive correlation between the serum HSP60 level and the serum HSP60 Ab level(r=0.805,P<0.01),and they were independent risk factors of ACS respectively(β=0.785，P<0.01).Conclusion:The serum Hu-HSP60 and HSP60 Ab levels are significantly correlated to the severity of CHD, probably participated in the autoimmune response promoting the formation of atherosclerosis and destabilization of plaque.They may be independent risk factors for predicating ACS.

　　Author′s　address：Department of Cardiology,Zhujiang Hospital,Affiliated to Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510282，China

　　Key words：Monitoring proteinum 60;Antibody;Coronary artery disease

　　近年来，人们对冠心病的发病机制及其相关危险因素进行了大量的研究探索，但其发病机制仍不十分清楚，目前一般认为是一种炎症免疫性疾病。

　　在冠心病的免疫机制研究中,热休克蛋白60(HSP60)与冠心病的关系国外已有报道。近年来国外研究认为,人HSP60和HSP60 Ab水平升高与血管疾病的存在和进程相关[1,2]。但目前国内对人HSP60、HSP60 Ab与冠心病的相关性研究尚少,尤其是与冠状动脉粥样斑块的失稳和急性冠脉综合征(ACS)发生的关系还未被证实。本研究通过测量各组的血清HSP60、HSP60 Ab水平,旨在探讨HSP60、HSP60 Ab水平与冠心病的进程及ACS的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　从南方医科大学附属珠江医院2007年1月到2007年8月心内科住院患者中入选96例研究对象，分为ACS组(40例)、稳定性心绞痛(SAP)组(24例)、胸痛综合征(chest pain syndrome，CPS)组(16例)、正常对照组(16例)。ACS组包括急性心肌梗塞(AMI)组(20例)、不稳定型心绞痛(UAP)组(20例)。胸痛综合征组定义为入院主诉为胸痛发作，但心电图及冠脉造影、生化及X线检查等均无异常,无既往冠心病史者。冠心病的诊断是根据典型的临床表现,心电图,心肌酶学,冠状动脉造影等检查结果确定。以预激综合征和室上性心动过速做射频消融术患者(冠脉造影正常)16例为正常对照组。研究对象排除：感染、全身免疫性疾病、恶性肿瘤、肝肾功能不全。所有病例均行冠脉造影检查(各组性别、年龄,高危因素等匹配)。

　　1.2 方法

　　所有患者均于行冠脉造影前经桡或股动脉采血。每例抽血10 ml,以5 000 r/min离心10 min, 提取血清，-20 ℃保存待测。以ELISA方法测血清HSP60 Ab及HSP60浓度。检测试剂购自Stressgen/Assaydesign公司，所有操作严格按照说明书进行。

　　1.3 统计学处理

　　所有数据均采用SPSS 11.5软件处理,计量资料以均数±标准差(±s)表示,各组数据在分析前进行正态检验,呈非正态分布者(血清HSP60及HSP60 Ab浓度水平)进行数据转换(Y=lgX)后成正态分布。多组间比较采用单因素方差分析;计数资料采用卡方检验。血清HSP60 Ab及HSP60水平与CHD的关系用Logistic回归分析, 血清HSP60 Ab及HSP60浓度水平的关系采用Bivariate分析。P<0.05为差异有显著性。

　　2 结 果

　　2.1 各组的年龄、性别比例、吸烟史、血脂、糖尿病史、高血压史及心血管病家族史差异无显著性(P>0.05),见表1。表1 冠心病等各组临床资料比较

　　2.2 血清HSP60、HSP60 Ab 水平

　　(1)HSP60水平：CHD组的明显高于对照组和CPS组(P<0.01)，对照组和CPS组差别无显著性(P>0.05)，见表2;ACS组的血清HSP60水平明显高于SAP组、对照组和CPS组 (P<0.01)，SAP组的与对照组和CPS组差别无显著性(P>0.05);(2)血清HSP60 Ab水平：ACS组的明显高于SAP组(P<0.01)，SAP组的明显高于对照组和CPS组(P<0.01)，对照组和CPS组差别无显著性(P>0.05)，见表3。 表2 三组血清HSP60、HSP60 Ab 水平比较 注： 与对照组及胸痛综合征组比较△△P<0.01。表3 四组间血清HSP60、HSP60 Ab 水平比较注：对照组、胸痛综合征组、稳定型心绞痛组比较△△P<0.01;与对照组、胸痛综合征组比较▲▲P<0.01。

　　2.3 Logistic回归分析

　　以ACS为因变量，以性别、年龄、高血压病、糖尿病、血糖、吸烟、TC、TG、LDL|C、HDL|C、HSP60、HSP60 Ab为自变量进行Logistic回归分析，当所有自变量输入方程时总体预测的准确率为62.5%。结果表明：影响ACS的独立危险因素是血清HSP60及HSP60 Ab浓度水平(β=0.785，P<0.01)。

　　2.4 HSP60与HSP60 Ab 相关性分析

　　96例HSP60 Ab与HSP60血清浓度水平呈正相关,(r=0.805，P<0.01),直线回归方程:

　　lg HSP60 Ab=-0.389+0.900 lg HSP60 (见图1)。

　　图1 Hu-HSP60及Hu-HSP60 Ab关系

　　3 讨 论

　　人Hsp60是一种自身抗原,一方面可提高机体对致病微生物的免疫力,另一方面又是一种危险的自身抗原,与风湿性关节炎、Crohn’s病和多发性硬化症等自身免疫性疾病有关[3]。 美国Wick’s实验室早在1999年就通过大量人体和动物实验研究证实, 人Hu-HSP60参与的一系列免疫反应可能促进动脉粥样硬化(AS)的发生发展[4];2002年芬兰国家大众健康协会和赫尔辛基心脏研究所报导了一项前瞻性巢式对照病例研究,认为HSP60所致自身免疫反应是CHD致病机理之一[5];近年来国外研究认为, HSP60 Ab水平升高与血管疾病的存在和进程相关。但目前国内对HSP60、Hsp60 Ab与冠心病的相关性研究还不多。

　　Zal等[6]认为人HSP60至少是AS的相关抗原之一; Zanin|Zhorov等[7]发现人HSP60在动脉粥样硬化过程中有促炎症作用;Kleindienst 等[8]发现Hu-HSP60作为一种促炎症因子,在不同类型冠心病患者血清中有不同程度表达，血清HSP60水平越高, 发生急性冠脉事件的可能性就越大,并且HSP60水平与急性冠脉事件的严重程度成正比,与粥样硬化程度呈正比。

　　本研究血清HSP60水平：冠心病组的明显高于正常对照组和CPS组 (P<0.01)，表明HSP60可能与冠心病发病有关;ACS组的明显高于SAP组、正常对照组和CPS组(P<0.01)，SAP与正常对照组和CPS组之间差别无显著性(P>0.05)，表明HSP60可能与斑块的失稳及ACS的发生有关。本研究血清HSP60 Ab 水平：CHD组的明显高于正常对照组和CPS组(P<0.01)，表明HSP60 Ab可能与冠心病发病有关，ACS组的明显高于SAP组 (P<0.01)，SAP组的又明显高于正常对照组和CPS组(P<0.01)，表明HSP60 Ab与冠心病的严重程度呈正相关，Zhu等[1]的研究结果相一致。正常对照组和CPS组差别无显著性意义(P>0.05)，表明HSP60 Ab只与心绞痛相关。

　　本研究将冠心病常见的危险因素与血清HSP60、HSP60Ab水平进行对比分析,结果发现血清HSP60、HSP60Ab是ACS的独立危险因素.进一步说明血清HSP60、HSP60 Ab水平可以预测ACS的发生。Xu 等[9，10 ] 早于1993 年就提出HSP60 Ab可作为动脉粥样硬化预后的预测指标。

　　研究显示HSP60与HSP60 Ab呈正相关( r=0.805,P<0.01)，表明二者在冠心病的发病机制中可能起着相互协同作用。有研究显示[11，12], HSP60作为一种高度保守蛋白,常因免疫系统的交叉识别而引起自身免疫反应,AS斑块中包括平滑肌细胞和内皮细胞都有HSP60的表达,通过其分泌作用或细胞死亡释放到血液循环中,血循环中的抗HSP60抗体可与细胞表面的HSP60发生反应,产生抗原-抗体复合物, 调节T 细胞功能，促进炎症介质分泌，损伤血管内皮细胞，产生早期动脉粥样硬化病变。抗体可穿过早期病变处受损的内皮细胞,与巨噬细胞或泡沫细胞、平滑肌细胞表面大量存在的HSP60 结合,使细胞溶解,坏死组织成为进展期动脉粥样硬化核心,使内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞释放大量的细胞因子,这些细胞因子又进一步促进病变处细胞增生、聚集,加速动脉粥样硬化病变的进展。

　　临床上冠心病患者血清HSP60、HSP60 Ab水平较高，可能在急性冠脉事件发生后, 加剧局部血流动力学紊乱, 血栓形成, 各细胞因子, 凝血因子大量释放, 促进血管内皮细胞释放HSP60 [13～15] ，形成恶性循环。

　　总之,冠心病患者血清HSP60、HSP60 Ab水平与其发病进程密切相关,且是预测急性冠脉综合征发生的独立危险因素。

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