小儿传染性单核细胞增多症免疫状况动态观察

　　作者：魏红霞，蒋瑾瑾，郭林芳 作者单位：(解放军第二军医大学附属长海医院 儿科，上海 200433)

　　【摘要】目的 研究小儿传染性单核细胞增多症(IM)免疫功能动态变化，观察EB病毒(EBV)感染对免疫功能影响，为判断预后及治疗提供依据。方法 应用流式细胞术对23例IM患儿急性期及恢复期外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+抗原进行检测，并与30例对照组健康儿童比较。结果 IM患儿急性期外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+抗原分别为(80.74±8.51)%、(17.53±6.08)%、(57.38±14.90)%、(7.35±6.24)%，CD3+、CD8+显著高于对照组[(68.47±7.01)%、(24.10±4.65)%，P<0.01]，CD4+、CD19+较对照组降低[(38.63±6.14)%、(19.00±5.27)%，P<0.01]。恢复期CD8+降低[(34.52±12.28)%]，仍高于对照组(P<0.01);CD4+升高[(26.91±6.24)%]，仍低于对照组(P<0.01)。结论 IM患儿急性期外周血淋巴细胞亚群显著异常，恢复期机体仍处于免疫紊乱状态，CD4+T细胞持续低下可能需免疫调节治疗。

　　【关键词】 传染性单核细胞增多症;EB病毒;T淋巴细胞;B淋巴细胞

　　Dynamic Analysis of Immunity Function in Children with Infectious Mononucleosis

　　Wei Hongxia, Jiang Jinjin, Guo Linfang

　　(Department of Paediatrics, Changhai Hospital of Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

　　Abstract： Objective To analyze the effect of EpsteinBarr virus (EBV) infection on immunity function in children with infectious mononucleosis (IM).Methods Blood samples were examined for expressions of CD3+, CD4+, CD8+, and CD19+ on lymphocytes by flow cytometry (FCM) in 23 children with IM experiencing acute and convalescent phases, and were compared with those of 30 healthy controls.Results The levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ expressions were (80.74±8.51)%, (17.53±6.08)%, (57.38±14.90)% and (7.35±6.24)% in the IM group at acute phase. The levels of CD3+ and CD8+ significantly increased in the IM group compared with those of the healthy controls (P<0.01), while the levels of CD4+ and CD19+ decreased (P<0.01). In comparison with the acute phase, the level of CD8+ (34.52±12.28)% decreased and the level of CD4+ (26.91±6.24)% increased in the convalescent phase (P<0.01)Conclusion It is indicated that the subsets of lymphocytes in peripheral blood are obviously abnormal in children with IM in acute phase. The immunity disorder still exists in convalescent phase. The immunomodulation therapy may be necessary if the level of CD4+ remains lower.

　　Key words： infectious mononucleosis; EpsteinBarr virus; Tlymphocyte; Blymphocyte

　　传染性单核细胞增多症(Infectious mononucleosis，IM)是一种单核巨噬细胞系统急性增生性疾病，小儿时期常见。IM主要由EB病毒(EpsteinBarr virus, EBV)感染引起，EBV属人疱疹病毒家族，主要在淋巴细胞中生长增殖，B细胞增殖失控可能发生免疫母细胞性B细胞肉瘤等恶性淋巴增殖病。本研究通过检测IM患儿急性感染期及恢复期外周血淋巴细胞分化抗原(CD)的表达率，观察EBV感染患儿免疫状态动态变化，为判断预后及治疗提供依据。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象

　　2004年6月—2007年12月在我院儿科住院的IM患儿23例，男13例，女10例，年龄0.8～11岁，平均(5.47±2.95)岁。诊断依据[1]：发热、淋巴结肿大、肝脾肿大;淋巴细胞增多(>50%)，异形淋巴细胞增多(>10%);EBV抗衣壳抗原抗体(VCAIgM)阳性。诊断明确后予阿昔洛韦抗病毒，退热、保肝等对症治疗。对照组30例，为健康体检儿童，男17例，女13例，年龄0.3～13岁，平均(4.59±3.27)岁。对照组年龄、性别与IM组有可比性。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集

　　于清晨分别采集IM急性期(发病第3～5天)和恢复期(发病第25～30天)及对照组空腹静脉血1 ml，置含20 μl 10%EDTAK2抗凝管中，24 h 内检测。

　　1.2.2 流式细胞术

　　取含10%EDTAK2抗凝管的50 μl 血标本，加入美国BD公司生产的FITC CD4+、CD8+及PECD19鼠抗人荧光单克隆抗体各10 μl，室温避光孵育20 min，加入红细胞裂解液1 ml，室温放置10 min，用PBS洗涤2次，加PBS400 μl 上机，采用FACACalibur流式细胞仪检测受检者外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+的表达率。

　　1.3 统计学方法

　　统计分析用SPSS10.0软件。若资料服从正态分布、总体方差齐性，两组比较采用成组t检验;若资料不服从正态分布或者方差不齐，则两组比较采用WILCOXON秩和检验。前后测量设计资料，采用重复测量设计资料的方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 IM患儿急性期免疫状况

　　IM急性期CD3+、CD8+显著高于对照组，CD4+、CD19+降低(P<0.01)。见表1。表1 IM患儿急性期、恢复期及对照组淋巴细胞亚群比较 (略)

　　2.2 IM患儿恢复期免疫状况

　　IM恢复期CD3+、CD8+较急性期降低，CD3+与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，CD8+仍高于对照组(P<0.01)。CD4+、CD19+较急性期升高，CD19+与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，CD4+仍低于对照组(P<0.01)。见表1。

　　3 讨论

　　EBV感染临床症状多变，可表现为IM，大多数免疫功能健全者可终生隐性感染。在体外，EBV具有促进B淋巴细胞转化功能，严重T细胞免疫抑制患者(医源性或HIV感染)有发生不同程度EBV相关淋巴增殖性疾病的危险，包括移植后淋巴增殖性疾病、Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤等。

　　体外研究表明，EBV感染后与B细胞上的受体CD21结合，刺激其配体CD23表达，转化B细胞使其具有不断增殖并复制病毒的能力。正常免疫状态下，B细胞增殖可激活T细胞，发生T细胞介导的免疫反应以清除感染的B细胞。体外实验性EBV感染外周血单核细胞(PBMCs)，来自EBV血清学阳性者培养中可观察到早期B细胞增殖，既而随着记忆T细胞激活出现B细胞退化;来自EBV血清学阴性PBMCs培养中B细胞持续增殖，尽管存在同源性T细胞。EBV抗原特异性、IL2依赖的T细胞对自身淋巴母细胞具有细胞毒作用，抑制EBV诱导的B细胞转化，从而清除病毒。EBV抗原特异性T细胞为HLAI类分子限制，因此认为CD8+T细胞为主要效应细胞[2]。本研究中IM急性期CD8+T细胞显著升高，CD19+T细胞降低，提示IM急性期处于T细胞激活、清除病毒感染B细胞状态。患儿就诊时的发热、肝脾肿大、淋巴结肿大是T细胞免疫反应的结果，而非病毒感染早期，因此未能观察到B细胞增殖现象。恢复期CD8+T细胞逐渐降低，体现了IM呈自限性过程，但仍高于对照组，因此需继续随访观察T抑制细胞功能。有作者研究EBV不同感染状态T细胞受体(TCR)组成成分，认为T细胞大量扩增不总与控制原发性EBV感染有关;虽然无症状的潜伏感染者体内有高水平EBVDNA，但未表现T细胞大量扩增，大部分能维持稳定的T细胞调控及外周血成分的多样性;如果强烈的T细胞反应导致了内环境稳定偏移，T细胞可能具有免疫病理作用[3]。

　　本研究显示IM急性期CD4+T细胞显著减少，与文献报告一致[4]。体外研究认为CD4+T细胞在控制EBV转化B细胞增殖中亦发挥作用。在CD4缺失的PBMCs培养中，抗原特异性CD8+T细胞扩增减少，从而使B细胞退化减弱，外源性补充γIL2可使CD8+T细胞恢复扩增，由此表明CD4+T细胞对CD8+T细胞扩增起辅助作用，至少是提供细胞因子，特别是IL2。在CD8缺失的PBMCs培养中，可观察到B细胞迟发退化，但无抗原特异性CD4+T细胞扩增[5]。另有研究表明，在体外CD4+T细胞可识别并杀灭自身淋巴母细胞[6]，将EBNA1多肽特异性CD4+T细胞加入到近期感染的自身B细胞培养中，可观察到B细胞退化[7]，CD4+T细胞在清除病毒感染B细胞过程中被消耗。EBV抗原特异性CD4+T细胞作为控制EBV诱导淋巴组织增生的主要效应细胞作用尚未明确，在PBMCs培养中其含量仅为CD8+T细胞的1/10[6]。IM恢复期发热、皮疹、肝脾肿大等临床表现已逐渐消失，CD4+T细胞有所升高，但仍低于对照组，提示机体仍处于免疫紊乱状态，易罹患感染。免疫调节治疗能否改善IM患儿恢复期细胞免疫状态，目前国内尚无相关报告。

　　综上所述，IM急性期表现为以CD8+T细胞为主的免疫反应，以控制EBV诱导的B细胞增殖。IM恢复期机体仍处于免疫紊乱状态，需定期随访监测细胞免疫，CD4+T细胞持续低下可能需免疫调节治疗。

　　【参考文献】

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　　[6] Long HM, Haigh TA, Gudgeon NH, et al. CD4+ Tcel1 responses to EpsteinBarr virus(EBV) latent cycle antigens and the recognition of EBVtransformed lymphoblastoid cell lines[J]. J Virol, 2005, 79(8):4896-4907.

　　[7] Nikiforow S, Bottomly K, Miller G, et al. Cytolytic CD4+Tcell clones reactive to EBNA1 inhibit EpsteinBarr virusinduced Bcell proliferation[J]. J Virol, 2003, 77(22):12088-12104.