ACE基因多态性与甘肃人群不同性别原发性高血压的关系

　　作者：曲强,伊琳,杨蓉佳　　作者单位：甘肃省人民医院急诊中心，甘肃 兰州 730000

　　【摘要】目的观察甘肃部分地区原发性高血压(EH)不同性别患者中血管紧张素转化酶(ACE)基因的分布频率，分析EH与ACE基因多态性之间的关系。方法 选择甘肃地区EH患者318例，为EH组，以健康人233例为对照组，通过提取血清DNA，采用PCRRFLP技术进行等位基因分型，研究ACE基因I/D(插入/缺失)多态性与不同性别EH之间的关系。结果 EH组DD、ID和II基因型的频率：男性组分别为21.8%、55.2%、23.0%;女性组分别为15.3%、50.7%、34.0%。对照组DD、ID和II基因型的频率：男性组分别为17.9%、61.2%、20.9%;女性组分别为21.2%、58.6%、20.2%。EH组中女性II基因型的分布频率明显高于男性(P<0.05);ID基因型和DD纯合子在正常对照组及EH组不同性别中均无显著差异。 结论 ACE I/D(插入/缺失)多态性II 基因型可能与女性EH相关联。

　　【关键词】 原发性高血压,血管紧张素转化酶基因多态性,性别

　　原发性高血压(EH)是由多种环境因素、生活方式和遗传因素共同作用引起的一种多基因遗传病。血管紧张素转化酶(ACE)在EH发病机制中具有重要作用。目前认为EH发病是在一定的基因遗传基础上由多因素影响的疾病，具有广泛的年龄，性别，地区和种族的差异，具有较大的遗传异质性〔1-4〕。本研究通过对甘肃部分人群不同性别EH患者的血清ACE基因多态性的分析，试图阐明ACE基因多态性与EH之间是否存在一定的相关性。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 本研究对象为本院住院及门诊EH患者318例，男性174例，年龄37-65(平均51±14 )岁;女性144例，年龄40-64(平均52±12 )岁，为EH组。EH诊断参照2005年高血压防治指南规定的诊断标准，即收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg。排除继发性高血压，心脏病和肾脏病。健康体检人群233例，男性134例，年龄38-64(平均51±13)岁，女性99例，年龄36-64(平均50±14)岁，为对照组。家族一级亲属无糖尿病史，排除糖尿病及其他心血管系统疾病。两组在民族、年龄及性别等方面的差异不显著(P>0.05)。EH组与对照组的样品均为周围静脉血(2 ml/人)，EDTA抗凝，-20℃冻存，分批集中后置-70℃冰冻保存。

　　1.2 研究方法

　　1.2.1 DNA提取 样品均用标准的蛋白酶K及酚氯仿有机抽提法从EDTA抗凝的外周血白细胞中提取，提取的DNA溶于TE缓冲液中，置4℃保存。

　　1.2.2 ACE I/D等位基因分型 采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增ACE基因第16内含子。引物为：正向5′CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3′，反向5′GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3′(上海生工生物工程技术服务有限公司合成)。PCR扩增：在25 μl PCR在混合反应液中，分别含有1.0 mmol/L MgCl2，4种dNTP各120 μmol/L，各种引物分别为0.12 μmol/L，Taq DNA聚合酶1.6 U，模板DNA 20 ng。PCR条件：94℃预变性60 s，94℃变性40 s，58℃退火40 s，72℃延伸50 s，循环30次，再于72℃延伸10 min。 PCR 产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳(0.5 μg/ml溴化乙啶染色，EB染色)，经凝胶成像系统判断基因型。

　　1.3 统计学方法 用SPSS软件进行资料分析，用χ2检验检测HardyWeinberg 平衡。计算各组基因型频率，等位基因频率。单因素分析用χ2检验。各等位基因的频率以及基因型的分布频率用优势比及其95% CI表示相对风险度分析。

　　2 结果

　　2.1 ACE I/D(插入/缺失)多态性检测： 位于ACE基因第16内含子I/D多态性经PCR方法检测可扩增出两种不同长度片段。仅有490 bp一条带者为插入纯合子(II型)，显示190 bp为缺失纯合子(DD型)，同时有490和190 bp的为缺失/插入杂合子(I/D型)。

　　ACE II(第1-3道)，ACE DD(第4道)，以及ACE ID(第5道)。DNA分子量标记：PBR322 DNA/HaeⅢ(第6道)。

　　2.2 ACE I/D(插入/缺失)多态性分布频率 DD纯合子、ID和II基因型在正常对照组男性及女性中的分布频率无显著差异;II基因型在EH组中，女性的分布频率显著高于男性(P<0.05);DD纯合子和ID基因型在男性EH中的比例和在女性EH中均无显著差异。

　　3 讨论

　　研究结果显示〔1-4〕，在研究某个基因与血压的关系时，需要同时考虑基因变异和研究对象的基本特征(如年龄、性别、身高、体重、种族)对血压的影响。在人群具体的特征背景下，分析基因的功能。ACE为一含锌的金属糖蛋白,是AngⅡ生成的限速因素。因此ACE是RAS的关键酶。其定位于17q23，长度为21 kb,包含26个外显子及25个内含子，其内含子16 中有一个287 bp 的Alu序列的插入片段，也有个体缺失此片段，呈现ACE基因的插入(I)缺失(D)多态性。它主要受控于ACE基因。研究发现人类血浆中ACE水平在个体内较为稳定,并且与许多环境因素、代谢、激素水平以及年龄无关,但在个体间却存在显著差异,个体间血浆ACE水平差异可高达2-5倍〔6〕。

　　本研究发现甘肃地区ACE II 基因型在EH组女性的分布频率显著高于男性(P<0.05); 由此推断II 基因型可能与女性EH相关联。曾有报道D等位基因是日本男性EH的一个易感基因〔7〕。但在本研究中，ID，DD基因型在不同性别EH中的分布频率无显著差异，提示ID，DD基因型对不同性别的EH无特殊的选择性。国内还有研究发现D等位基因与藏族女性EH相关〔8〕至于性别间的差异，未发现明确的原因，一种观点认为男女性激素水平差异而导致两性间主动脉等大动脉的弹性减退的程度不同有关，与全身总血容量的多少也有关〔9〕。也曾有说法认为雌激素有保护作用，抵御高血压的产生〔10〕。Fornage〔1〕及O′Donell等〔2〕在美国的研究发现男性ACE 基因与血压水平相关，而女性不存在这种关系。Zee等〔3〕,Morris等〔4〕认为ACE基因I/D多态性同EH相关。同时认为ACE基因I/D多态性同EH的关系与种族、性别、年龄相关。本研究证实了这一观点。

　　本课题通过对甘肃地区EH患者ACE基因型的检测，分析ACE基因多态性在不同性别EH人群中的差异，发现EH与ACE基因多态性之间存在一种特殊的相关性。提示在不同性别人群中检测ACE基因型对于筛查EH高危人群,早期发现及时治疗，以减少EH患者心脑肾血管终末期事件的发生有重要意义。分析ACE基因在不同性别EH患者中分布频率的差别，将会对研究不同性别的疾病特点提供遗传学的帮助。

　　【参考文献】

　　1 Fornage M，Amos CI，Kardia S，et al.Variation in the region of the angiotensinconverting enzyme gene influences interindividual differences in blood pressure levels in young white males〔J〕.Circulation，1998;97: 17739.

　　2 O′Donnell CJ，MD，Lindpaintner K,et al. Evidence for association and genetic linkage of the angiotensinconverting enzyme locus with hypertension and blood pressure in men but not women in the framingham heart study〔J〕.Circulation，1998;97：176672.

　　3 Zee RY，Lou YK，Griffiths LR，et al.Association of a polymorphism of the angiotensin Ⅰconverting enzyme gene with essential hypertension〔J〕. Biochem Biophys Res Commun，1992;184(1):915.

　　4 Morris BJ，Zee RY，Schrader AP.Different frequencies of angiotensinconverting enzyme genotypes in older hypertensive individuals〔J〕.J Clin Invest，1994;94(3):10859.

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　　7 Soubrier F,Cambien F.The angiotensin coverting enzyme gene polymorphism: implication in hypertension and myocardial in farction〔J〕.Curr Opin Nephrol Hypertens，1994;3:25.

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　　9 Sapar ME,Cloarec BL,London GM.Arterial alternations in hypertension with a disproportionate increase in systolicover diastolic blood pressure〔J〕.J Hypertens,1996;14(Suppl2):1039.

　　10 Higaki J，Baba S，Katsuya T,et al. Deletion allele of angiotensinconverting enzyme gene increases risk of essential hypertension in Japanese men:the Suita Study〔J〕.Circulation，2000;101:20605.