黄芪地黄汤对小儿过敏性紫癜肾炎的治疗作用

　　作者：林瑞霞 作者单位：温州医学院附属育英儿童医院 肾内科，浙江 温州 325027

　　【摘要】 目的: 观察黄芪地黄汤治疗小儿过敏性紫癜肾炎(HSPN)的临床疗效和治疗前后患儿血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖的影响及IL-6、TNF-α水平变化。方法: 收集HSPN 80例，随机分成两组，西医组40例，中西医结合组40例(西医组用药基础上加用黄芪地黄汤)，并建立正常儿童对照组30例。用药组治疗疗程均为3个月。疗程结束后，观察患儿缓解率并测定患儿血清IL-6、TNF-α水平，观察治疗前后患儿血清对rGMC增殖的影响。结果: 治疗前，西医组、中西医结合组的IL-6、TNF-α水平与正常儿童对照组比较均明显上升(P <0.05或P <0.01)。3个月疗程后，中西医结合组总缓解率为87.5%，西医组疗效总缓解率为60%，二组差异有显著性(P <0.05);中西医结合组IL-6水平基本降至正常，与正常对照组相比差异无显著性(P >0.05)，TNF-α水平有下降，西医组IL-6及TNF-α水平仅略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P <0.05及P <0.01)。与正常对照组血清体外培养rGMC的OD值相比，治疗前西医组、中西医结合组均有增高(P <0.05)，治疗后中西医结合组无差别，而西医组差异有显著性(P <0.05)。结论:中西医结合治疗可更有效地下调IL-6、TNF-α水平，减少系膜细胞增殖，黄芪地黄汤的疗效可能与减轻系膜细胞增殖有关。

　　【关键词】 黄芪地黄汤 过敏性紫癜肾炎 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α

　　Therapeutic effect of HQDHT on children with Henoch-Schoenlein purpura nephritis LIN Rui-xia，YANG Qing，CHEN Min-guang，ZHUANG Jie-qiu，CHEN Xiao-ying. Department of Nephrology，Yuying Children’s Hospital Affiliated to Wenzhou Medical College，Wenzhou，325027

　　Abstract: Objective: To observe the curative effect of HQDHT on chilren with Henoch-Schoenlein Purpura Nephritis (HSPN)，and to observe the serum levels of IL-6 and TNF-α in the patients after HQDHT treatment and investigate the effect of the patient’s serum after treatment on the proliferation of rat glomerular mesangial cell (rGMC). Methods: Eighty cases with HSPN were collected，and then divided into two groups equally: group 1 (western medicine group) and group 2 (Western medicine with HQDHT group)，the control group was composed of 30 normal children. The course of treatment was 3 months，then compared to the total alleviated rate of the group 1 and group 2，and the patient’s serum levels of IL-6 and TNF-αwere measured. The proliferation of rGMC was investigated. Results: Compared with the control group， the level of IL-6 and TNF-αsignificantly up-regulate in group 1 and group 2 before the treatment (P <0.05 and P <0.01). After 3 month’s treatment courses，the total alleviated rate of group 1 was 60%，and that of group 2 was 87.5% (P <0.05). The level of IL-6 in group 2 basically descended to normal (P >0.05)，the level of TNF-α in group 2 and IL-6，TNF-α in group 1 were only slightly decreased，there also was statistically significance compared with the control group (P <0.05 orP <0.01). Before treatment，the OD value of rGMC proliferation in group 1 and group 2 were statistically increased than that in the control group (P <0.05). After treatment，there was no significant difference between group 2 and the control group (P >0.05)，while there was statistically significance between group 1 and the control group (P <0.05). Conclusion: Western medicine with HQDHT can more effectively downregulate the serum level of IL-6 and TNF-α，reduce the proliferation of GMC，the mechanism of curative effect with HQDHT may relate to the reduction of the proliferation of GMC.

　　Key words: HQDHT;Henoch-Schoenlein Purpura Nephritis;IL-6;TNF-α

　　预防慢性肾功能衰竭是当前全球研究的重点[1]，小儿过敏性紫癜肾炎(henoch-schoenlein purpura nephritis，HSPN)是儿童最常见的继发性肾脏病，虽预后相对较好，但仍有一定风险。据统计，HSPN患儿在美国占小儿肾移植总数的1.4%，在欧洲占儿童终末期肾衰的1.7%，我国小儿2003年调查资料显示占慢肾衰的2.2%。该病病因未明，目前尚无特异治疗方法[2]。中医药在该病防治上已积累了不少经验，但有关机制研究甚少。为此，我们应用黄芪地黄汤治疗HSPN患儿40例，前瞻性观察了治疗前后患儿血清IL-6、TNF-α水平变化及其对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖的影响，从而阐明该方防治作用的主要机制，现将研究结果报告如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 一般资料 收集我院2004年1月至2005年12月HSPN 80例，均符合中华医学会儿科学分会肾脏病学组于2001年制定的HSPN诊断标准[3]。上述HSPN患儿按就诊日期随机分成两组，西医组40例，其中男21例，女19例，平均年龄(7.8±3.3)岁(3～15岁)，病程(6.4±4.9)个月。中西医结合组40例，其中男23例，女17例，平均年龄(7.2±3.4)岁(3～16岁)，病程(6.7±5.9)个月。正常对照组30例，男17例，女13例，平均年龄(6.8±3.1)岁(3～15岁)，均为无尿异常改变的健康体检儿童。各组在性别、年龄等方面差异无显著性(P >0.05)。

　　1.2 药物应用 西医组均应用复方芦丁、潘生丁、维生素E，蛋白尿≥1 g者加用洛丁新，有皮肤紫癜复发加开瑞坦，腹痛、关节肿痛使用短程激素，临床表现肾病型给予激素和(或)雷公藤治疗。中西医结合组在此基础上加用黄芪地黄汤，方剂组成：黄芪、生地、淮山药、萸肉、女贞子、旱莲草、茯苓、泽泻、丹皮、生甘草。按辨证加用水牛角、紫草根、赤芍、茅根等，每周5剂，观察疗程3个月。治疗前及治疗后均行血尿常规、肝肾功能、24 h尿蛋白定量等测定。

　　1.3 细胞因子检测 采用抗体夹心ELISA方法。IL-6、TNF-α试剂盒购自Bender Medsystem(Vienna, Austria)公司。取患儿治疗前后及对照组空腹血清为测量标本。抽血3 ml置入干燥管，静置30 min待其凝血后，3 000 r/min离心10 min，取血清1 ml保留于-80 ℃低温冰箱待检。严格按照各试剂盒说明书进行检测，最后采用酶标仪在450 nm读取OD值，绘制标准曲线，据OD值计算出血清中各细胞因子的浓度。

　　1.4 治疗前后各组血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖的影响

　　1.4.1 血清准备：分别收集HSPN西医组、中西医组治疗前后生化等检测所余血清及对照组血清，每例收集0.1 ml，按组混合，立即置-80 ℃低温冰箱保存。临用时56 ℃水浴30 min，0.22μm一次性滤器过滤，每组加入已配制的无血清RPMI 1640培养液10.8 ml，使成含10% HSPN或正常血清的完全培养液。

　　1.4.2 分组实验：原代培养rGMC，将培养的rGMC用胰蛋白酶消化后，按104个/ml接种在96孔培养板上(0.2 ml/孔)，每组12孔，培养24 h后，改用无血清的RPMI 1640培养液培养24 h，使其生长同步于G0期;分3组换液，分别加入含10%各组血清的完全培养液，于培养24 h后以MTT法在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光值(OD值)。

　　1.5 临床疗效判断标准 按照国家中医药管理局1987年制定的标准，完全缓解：尿蛋白持续阴性，尿红细胞持续消失;显著缓解：尿蛋白持续减少≥50%，尿红细胞减少≥50%;好转：尿蛋白持续减少≥25%，尿红细胞减少≥25%;无效：尿蛋白或红细胞无变化或恶化。

　　1.6 统计学处理方法 分类资料采用x2检验，多组计量资料采用单因素方差分析后进行Dunnet t检验，等级资料采用秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 两组临床分型和病理分级比较 HSPN按临床表现分为4型[2]：单纯血尿型、单纯蛋白尿型、血尿和蛋白尿型、肾病综合征型。两组患儿中共有15例行肾活检，病理分级按国际小儿肾脏病理研究分会分类(ISKDC)分为六级。资料显示两组在临床分型及病理分级上差异无显著性(P >0.05)，详见表1。

　　2.2 治疗前各组血清细胞因子水平 治疗前，与正常儿童对照组比较，西医组和中西医组的IL-6水平上升，差异有显著性(均P <0.05)，TNF-α水平明显上升(均P <0.01)。

　　2.3 两组缓解率比较 3个月疗程后，中西医结合组总缓解率为87.5%，西医组总缓解率60%，中西医组总缓解率高于西医组(P <0.05)。

　　2.4 治疗后各组血清细胞因子水平 3个月疗程后，中西医结合组IL-6水平与正常组相比差异无显著性，TNF-α水平略高于正常对照组。西医组IL-6、TNF-α水平略有下降，中西医组细胞因子逆转水平高于西医组(P <0.05)。

　　2.5 治疗前后各组血清体外培养rGMC的OD值 治疗前，西医组和中西医结合组OD值显著高于对照组(均P <0.05)，3个月疗程后，西医组与对照组差异仍有显著性(P <0.05)，而中西医结合组与对照组差异无显著性(P >0.05)。

　　3 讨论

　　HSPN是以小血管炎症为主要病变的免疫炎症反应性疾病，存在着T辅助细胞即TH1/TH2平衡失调，TH2亢进致B细胞分泌免疫球蛋白持续增加，患儿体内免疫球蛋白分泌和循环复合物形成增多，沉积于小血管壁，引起小血管壁的炎症反应和病理损伤[4]，其主要病理改变为系膜增生性肾炎(MSPGN)[4,5]。在各种慢性肾脏病进展过程中，肾小球系膜细胞(GMC)增生和细胞外基质(ECM)积聚均参与发生和发展过程，并最终导致肾小球硬化。目前已知IL-6和TNF-α是促炎症的细胞因子，分别由TH2及单核细胞、巨噬细胞分泌，二者分泌过多，会促进中性粒细胞、血管内皮细胞黏附，刺激肾脏系膜细胞增生，产生促进肾组织损伤的活性物质，进一步扩大肾组织炎症和损伤[6,7]。

　　本实验结果发现，与正常儿童对照组相比，HSPN患儿血IL-6、TNF-α水平上升，其差异具有显著性，可证明HSPN存在TH2的亢进，IL-6、TNF-α参与者了HSPN免疫炎症反应的过程。经过3个月疗程后，中西医组IL-6水平与正常组比较差异无显著，而西医组IL-6、TNF-α水平与正常对照组比较差异仍有显著性(P <0.05及P <0.01)，表明中西医组能更有效逆转TH2亢进状态，降低炎症因子水平。肾小球系膜细胞增殖是HSPN发展的关键所在，本组资料发现，HSPN组血清体外刺激大鼠系膜细胞后测定的OD值显著高于正常对照组(P <0.01)，3个月疗程后，中西医组对rGMC增殖明显减轻，与西医组测定的OD值比较差异具有显著性(P <0.05)，故推测系膜细胞增殖减轻很可能是通过降低炎症细胞因子水平来实现的。

　　黄芪地黄汤中主要成分近年来国内外已有不少研究，现已证明其有调节免疫功能及减轻系膜细胞增殖的作用。如黄芪利水消肿、降低血小板黏附、促进蛋白合成、降脂，下调IL-6及TNF-α水平。实验研究还证实其主要成分黄芪多糖能抑制GMC和基质增多，抑制IL-6分泌，并下调CD44 mRNA表达，促进GMC凋亡[8]。此外该方中女贞子、萸肉、地黄、茯苓等均具有调节T细胞免疫功能的作用[9,10]。故我们认为该方很可能是通过调节T细胞免疫功能，下调促炎症因子，抑制系膜细胞的增殖，在临床上发挥良好的治疗作用。

　　本组研究疗效结果表明，3个月疗程后，中西医结合组总缓解率为87.5%，西医组疗效总缓解率仅为60%，二者差异有显著性(P <0.05)，结合二组治疗前后血清对rGMC影响比较值及IL-6、TNF-α水平监测结果，证明黄芪地黄汤可较好地调节免疫功能，下调促炎因子水平，从而抑制系膜细胞增殖，因而对HSPN有较良好的防治作用，其抑制系膜细胞增殖可能是治疗HSPN的重要机制之一，此为中西医结合治疗进一步推广提供了更确切的现代理论依据。

　　【参考文献】

　　[1] 王海燕.提高对慢性肾脏病的认识、临床工作和研究水平[J].中华肾脏病杂志,2005,21(1):1-2.

　　[2] 赵丹, 王君, 李惠芳, 等. 儿童过敏性紫癜肾炎药物治疗的Meta分析[J]. 中国循证儿科杂志, 2007,2(2):88-101.

　　[3] 中华医学会儿科学分会肾脏病学组. 小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗[J].中华儿科杂志,2001, 39(12):746-749.

　　[4] 许自川, 曾雪琪. Th1/Th2迁移与紫癜性肾炎的研究进展[J]. 国际病理科学与临床杂志, 2007,27(1):64-67.

　　[5] 莫樱, 陈述枚. 紫癜性肾炎的发病机制与病理诊断[J]. 中国实用儿科杂志,2006,21(6):407-411.

　　[6] Eddy AA. Molecular basis of renal fibrosis[J]. Pediatr Nephrol,2000,15(3-4):290-301.

　　[7] 郝丽,方惠玲,黄家麟.血、尿中白介素-6水平与免疫性肾脏疾病相关性研究[J].临床肾脏病杂志,2002,2(2):75-78.

　　[8] 李智军,魏连波,贺丰,等.黄芪多糖治疗大鼠系膜细胞增生性肾炎的实验研究[J].中国中西医结合肾病杂志,2000,1(4):206-208.

　　[9] Luo WW, Chen XQ. Clinical observation on treatment of.proteinuria in chronic nephritis by astragalus injection[J]. ChinJ Nephrol,2000,16(3):189.

　　[10] 侯凯,李非,陈香美,等.肾怡对狼疮小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用[J].中国免疫学杂志,2003,19(6):393-396.