苯丙酸类化合物的含量测定

作者:赵志君

【摘要】  主要从实验条件方面综述了目前测定苯丙酸类化合物含量的几种方法，较为常用的有薄层扫描法、高效液相色谱法、分光光度法和高效毛细管电泳法，这些方法稳定可信，测定结果准确可靠。

【关键词】  苯丙酸；含量测定；定量分析

    中图分类号：Ｒ２８４．１   文献标识码：Ａ   文章编号：１６７３－４２９７（２００６）０５－００５２－０３苯丙酸类成分广泛分布于中药中，是重要的简单苯丙素类化合物［１］。许多苯丙酸衍生物及其脂类，具有多方面的生物活性。例如桂皮酸具有抗癌作用［２］；咖啡酸具有抑菌、抗病毒、抗氧化作用；阿魏酸具有抗血栓形成、保护心血管系统、抗氧化、抗过敏、抗癌抗突变、清除自由基及细胞保护作用［３］；绿原酸具有抗菌、抗病毒、利胆、降压、消炎作用［２］；丹参素具有扩张心脑血管、抗血小板聚集、抗炎、抗氧化、清除自由基作用［４］。

    许多此类化合物已在中药质量控制中作为定量分析的指标，为方便广大中药工作者的定量分析工作、提供可靠的参考依据，现将近年来此类化 合物的含量测定方法综述如下。

    １  薄层扫描法

    用该法进行定量分析，方法简便快捷，成本低，特别适宜于中药及其制剂的分析。《药物分析方法与应用》中介绍用薄层扫描法测定川芎中阿魏酸含量［５］，其ＴＬＣ条件为：硅胶Ｇ板，展开剂为氯仿—甲醇—甲酸（１０ ： ０．５ ： ０．５）?熏双波长锯齿扫描λｓ ＝ ３２０ ｎｍ，λＲ ＝ ２５５ ｎｍ，用外标两点法计算，结果准确可靠。任延军等［６］用薄层扫描法测定中成药慈航丸、补血调经丸、妇珍片中阿魏酸含量，结果：阿魏酸斑点荧光强度在展开后３０ ｍｉｎ ～ ２ ｈ内稳定，阿魏酸点样量在０．５ ～５．０ μｇ范围内与面积积分值呈线性关系?熏相关系数０．９９７７，平均加样回收率９８．４６ ％，ＲＳＤ ＝３．９９ ％，ｎ ＝ ５。张玲等?眼７用双波长薄层扫描法测定肉桂中肉桂酸的含量，实验条件为：硅胶ＧＦ薄层板，以石油醚３Ｏ ～ ６０ ℃—甲酸乙酯—甲酸１５ ： ５ ： １的上层溶液和正己烷—乙醚—冰醋酸５ ： ５ ： ０．１为展开剂，紫外灯２５４ ｎｍ下检视，肉桂酸显深兰紫色的斑点，反射式双波长锯齿形扫描，测定波长２７４ ｎｍ，参比波长３７０ ｎｍ，线性参数ＳＸ ＝ ７，狭缝１．２ ｍｍ × １．２ ｍｍ，扫描速度２０ ｍｍ／ｍｉｎ，外标两点法计算。结果：肉桂酸斑点在３　ｈ内稳定，峰面积值的ＲＳＤ在１．２ ％ ～ １．８ ％ 之间，肉桂酸点样量在１～５　μｇ范围内与其峰面积值呈线性关系，测定平均回收率为９９．５ ％，ＲＳＤ ＝  ２．４ ％ ｎ ＝ ３。

    ２  高效液相色谱法

    中药材、中成药及中药制剂中的苯丙酸类化合物均可用该法进行含量测定，一般采用紫外检测器测定。反向色谱系统常用十八烷基硅烷键合硅胶，正向色谱系统常用硅胶，离子交换色谱常用离子交换填充剂［８］。刘高峰等［９］采用反向高效液相色谱法测定乌梅透骨口服液中阿魏酸的含量，色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８?熏流动相为甲醇—水（３０ ： ７０），检测波长为３２４ ｎｍ，流速为１ ｍＬ／ｍｉｎ。结果：阿魏酸线性范围为０．０５ ～ １．０ ｐｇ（ｒ ＝ ０．９９９），平均回收率为９７．０１ ％ ～ １０１．５３ ％，ＲＳＤ ＜ １．７４ ％，ｎ ＝ ３。杨宁莲等［１０］用高效液相色谱法测定生化汤口服液中阿魏酸的含量，以Ｓｈｉｍ?鄄Ｐａｃｋｃｌｃ?鄄ＯＤＳ １５０ ｍｍ ×  ６．０ ｍｍ　ＩＤ为分析柱，以甲醇—水水中含１．０ ％冰乙酸＝ ３７ ∶ ６３为流动相，紫外检测波长为３２２ ｎｍ。结果?押线性范围为０．００５ ～ ０．１０ ｍｇ／ｍＬ，ｒ ＝ ０．９９２５，测得平均回收率为９８．１ ％，ＲＳＤ ＝ １．７ ％，日内ＲＳＤ１．４ ％，日间ＲＳＤ ＜ １．５ ％，可作为该制剂质量控制的有效方法。黄敬群?眼１１建立了改良的ＲＰ?鄄ＨＰＬＣ测定人血清中阿魏酸浓度的分析方法，结果：阿魏酸在９．９４ ～ １５９．０４ ｎｇ／ｍＬｒ ＝ ０．９９２５与峰面积有良好的线性关系。日内和日间ＲＳＤ ＜ １０，平均回收率为９９．７７　％。李宗等［１２］建立了ＨＰＬＣ法测定菊花中绿原酸的含量，色谱柱为Ｎｏｖａ?鄄Ｐａｋ Ｃ１８４ μｍ，４．６ ｍｍ × ２５０ ｍｍ，流动相为磷酸二氢钠ｐＨ ＝ ２．６５—甲醇（７０ ： ３０），检测波长为３２８ ｎｍ，柱温为室温，流速０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量１０ μＬ。结果：绿原酸浓度在０．２０７２ ～ ２．０７２ μｇｒ ＝ ０．９９９９内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为９９．４ ％，ＲＳＤ ＝ ３．５ ％。何心等?眼１３用高效液相色谱法测定双黄连粉针中绿原酸和咖啡酸的含量，结果：绿原酸和咖啡酸分别在０．１ ～ ２ ｍｇ／Ｌｒ ＝ ０．９９７和０．２５ ～ ２ ｍｇ／Ｌ （ｒ ＝ ０．９９９）有良好的线性关系，回收率分别为１００．４± ０．６４，９９．５６ ± ２．１４，ｎ ＝ ５。林佳等［１４］建立高效液相法测定不同地区丹参中丹参素的含量，结果丹参素在０．２５２ ～ １．２６ μｇ内呈良好线性关系，平均回收率为９７．６１ ％（ＲＳＤ ＝ １．３７ ％，ｎ ＝ ５）。吴   峰 等［１５］用ＨＰＬＣ测定复方丹参滴丸中丹参素含量，也取得满意效果。朱海虹等?眼１６用高效液相色谱法测 定金蓝气雾剂中绿原酸含量，以乙腈—０．４ ％磷  酸溶液为流动相（Ｖ ： Ｖ ＝ １３ ： ８７）；ＯＤＳ 色谱柱（２５０．０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ，１０．０ μｍ）为固定相；采用紫外检测器（波长为３２７ ｎｍ）测定?熏结果：线性方程为?押Ａ ＝ １．３０ × １０４ρ － １．３７ × １０４（ｒ ＝ ０．９９９），在给定的质量浓度范围之内，线性良好；稳定性试验８ ｈ 内绿原酸色谱峰面积ＲＳＤ为１．５ ％；样品测定以外标法计算样品中绿原酸的含量，均大于质量标准中的 规定值１．３２ ｇ／Ｌ，含量合格。

    ３  分光光度法

    一般用紫外可见分光光度法和红外分光光度法［８］。化合物经过薄层、柱层分离，显色剂显色后，可采用单波长法、双波长法、导数分光光度法测定苯丙酸类化合物的含量［３］。陆敏仪等［１７］用大孔树脂—导数光谱法测定云香精中苯丙酸衍生物的含量，用日本岛津ＵＶ－２５０，ＵＶ－２１００型紫外分光光度计，国产Ｈｏｕｓｅ?鄄ＰＣ计算机，Ｄ１０１、ＤＡ２０１型大孔树脂，采用分光光度法试验，在３００ ～ ４００ ｎｍ波长范围内，测定导数△ λ ＝ ｌ ｎｍ光谱，按峰—零法， 测定甲基阿魏酸在３４０ ｎｍ波长处的吸收度或振幅值ｍｍ，结果回归方程：Ｙ１（μｇ）＝ １０１３．３２４８Ｘ１＋ ４０．８５５５，ｒ１＝１．００００?熏表明其在９８．４～４９２．０ μｇ／１０ｍＬ范围内线性良好；测定苯丙酸衍生物在３４０ ｎｍ波长处的吸收度或振幅值ｍｍ，结果回归方程：Ｙ２（μｇ）＝５５４４．７２１５Ｘ２ ＋ ２５．８５５５，ｒ２ ＝ ０．９９９９，表明其在５４１．９ ～ ２７０９．４ μｇ／１０ ｍＬ范围内线性良好；平均加样回收率为１００．２８ ％ ｎ ＝ １４，ＲＳＤ ＝ ３．７９ ％。样品洗脱处理后按照分光光度法试验，从回归方程折算出甲基阿魏酸的含量，再乘以５．５ｌ３ｌ换算为苯丙酸衍生物的含量。何报作［１８］用紫外分光光度法测定金银花中绿原酸含量，通过检测条件的改进可使重现性和准确度提高，不需昂贵仪器，操作  简单，适于基层使用。

４  高效毛细管电泳法

    高效毛细管电泳法以其分析效能高、灵敏度高、运作成本低等特点，已用于药物分析，包括成药、原料、中草药成分测定。张艺等?眼１９采用反向毛细管区带电泳的操作模式测定当归饮片中阿魏酸含量，以橙皮苷为内标物，采用ＨＰ３Ｄ全自动毛细管电泳仪在３１３ ｎｍ处测定。电泳条件为：石英毛细管柱（７５ μｍ × ６５ ｃｍ，有效长度５６．５ ｃｍ），缓冲液为２０ ｍｏｌ／Ｌ硼砂溶液，负极进样，位差３０ ｃｍ，虹吸进样１０．０ ｓ，分离电压为２５ ｋＶ，运行方向：负→正， 正极检测，温度为２５ ℃。结果：阿魏酸在５ ～  １００ μｇ／ｍＬ范围内呈良好的线性关系，其回归方程为ｙ ＝ ２６．４７ｘ－３．５２，ｒ ＝ ０．９９９，平均回收率分别为９９．０ ％、９３．８ ％、９６．０ ％；ＲＳＤ为１．５ ％、１．８ ％、１．３ ％（ｎ ＝ ３）。陈缵光等?眼２０研究了反向毛细管电泳分离测定当归中阿魏酸含量的条件，当归饮片用热水提取，电泳缓冲液为Ｔｒｉｓ  Ｈ３ ?鄄 ＢＯ３ ２０：８０ ｍｍｏｌ／Ｌ并加入０．８ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＣＴＡＢ作为电渗流改向剂，分离电压为－１０．０ ｋＶ，用安培检测器检测。分析结果：每克当归饮片含阿魏酸０．４１５ ｍｇ，ＲＳＤ为２．３ ％，回 收率为９７．１ ％。

    ４  其他方法

    （１）酸碱滴定法：一般采用非水溶液滴定法或电位法指示终点的方法测定中药中苯丙酸类成分的含量。周晶等［２１］对马齿苋口服液的制剂学研究样品分离后用中和法测定含量，以桂皮酸计算出含苯丙酸的有机酸总量。（２）荧光分析法：具有灵敏度高、选择性好、试样用量少的优点，一般用于微量或痕量组分的分析。如丹参注射液中丹参素的含量测定?眼３，按荧光分光光度法于λｅｘ ＝ ２８５ ｎｍ、λｅｍ ＝ ３１７ ｎｍ处，以水为空白，测定其荧光强度，得回归方程，由回归方程计算丹参素的含量。（３）气相色谱法：具有挥发性的苯丙酸主要是桂皮 酸含量可用此法测定。

    ５  结论

    苯丙酸类化合物多数具有荧光，薄层分离后，可用薄层扫描荧光法直接测定其含量。与ＨＰＬＣ比较，薄层扫描通过加酸调ｐＨ值，可克服ＨＰＬＣ法提取样品酸碱处理所带来的不可避免的损失而使测定结果低于实际含量的缺点。由于进样方法的限制，目前毛细管电泳的精密度比用定量阀进样的高效液相色谱法要差，故定量测定以采用内标法为宜［８］。用气相色谱法进行定量分析，当采用手工进样时，由于留针时间和室温对进样量的影响，可采用内标法定量；采用自动进样器时，由于进样重复性提高，在保证进样误差的前提下，可采用外标法定量［８］。

【参考文献】  ［１］匡海学． 中药化学?眼Ｍ．第７版． 北京：中国中医药出版 社，２００３：９９．

［２］郭玫．中药成分分析?眼Ｍ． 北京：中国中医药出版社，２００６： ２５－４１．

［３］胡易勇，徐晓玉． 阿魏酸的化学和药理研究进展［Ｊ］． 中 成药，２００６，２８（２）：２５３－２５５．