老年宫颈癌E2-EPF表达与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移关系的研究

宫颈癌是世界范围内女性最常见的三大肿瘤之一,78%的病例发生于发展中国家,在中国宫颈癌的发病率仍然居高不下[l]。随着人口的老龄化,老年宫颈癌发病相应增加,并且其病程晚,预后差。淋巴结转移是宫颈癌发生侵袭转移的重要途径,同时也是影响患者预后的重要因素。因此,研究宫颈癌的发病与转移机制,寻找新的治疗方法依然是目前宫颈癌治疗中的一个重要课题。E2EPF泛素结合是E2泛素结合酶家族成员之一,分子量为24KD,在多种肿瘤组织中高表达,最近研究表明:E2EPF可能参与宫颈癌的增殖过程[2]。E2EPF是否参与老年宫颈癌转移尚未明了。因此,本研究旨在了解老年宫颈癌E2EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系,为老年宫颈癌防治、阻断其淋巴转移和寻求干预新靶点提供实验依据。

1资料与方法

1.1资料

1.1.1研究对象收集201O年1月至2012年1月在解放军第422医院妇产科住院手术治疗的36例年龄>60岁的宫颈癌病例,病例均符合以下标准:(1)经病理确诊为宫颈浸润癌;(2)接受广泛性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术治疗。

1.1.2临床病例资料36例患者年龄60~75岁,中位年龄66岁。临床分期参照2009年国际妇产科联盟(∏GO)标准[3],病理分型号包括鳞癌、腺癌、腺鳞癌。肿瘤直径测量根据妇科检查,结合阴道B超检查结果确定。深肌层浸润为显微镜下见宫颈外1/2肌层受肿瘤侵犯。所有病理切片均由两位高年资病理医生确诊。本研究标本采集及用途均取得患者本人书面同意。

1.2方法

1.2.1取材方法及分组所有患者均接受广泛性全子宫切除+盆腔淋巴清扫术,术后所有组织送交病理检查。根据病理资料,将全部病例分别按有无深肌层浸润和有无盆腔淋巴结转移进行分组研究。

1.2.2 RNA提取及cDNA制备用Isogen试剂按说明提取临床病理标本总RNA,以分光光度计Ultraspec3000测定A260/280波长进行RNA定量,并采用电泳进一步进行抽提RNA的质量分析,以电泳条带完整和A260/280值在1.8~2.0之间作为RNA抽提良好的标准,用于总RNA的逆转录,逆转录实验按试剂盒(High Capaoty cDNAReverse Transcription Kit,Apphed Biosystems,USA)说明书稍加改进进行操作。

1.2.3实时荧光定量PCR(RT-PCR)

测定E2-EPF mRNA表达水平。E2-EPF引物:fowa.rd:5′—CGACCTCCAGGTCACCAT-3′,产物长度59bp.GAPDH引物:bward:5′CACCATCTTCCAGG AGCGAG3′;reverse:5′CCTTCTCCATGGTGGTG AAGAG3′,产物长度101bp。PCR反应试剂盒为飞qMan Gene Expressionhster R/Ilx(Applied Blosystems USA),于⒏eponePlus red time PCR仪中进行扩增。以GAPDH作为内参,共同扩增条件是:95℃,10min变;95℃,15s,50℃,10s,6o℃,1min共40个循环。通过进行定量分析。

1.3统计学方法

数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS13,0统计分析软件进行数据的统计学处理,组间计量资料比较采用r检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1临床病理资料分析结果36例宫颈癌患者一般临床病理资料分析结果见表1。

2.2 E2-EPF在深肌层浸润组与无深肌层浸润组癌组织中的表达水平比较目的基因E2EPF扩增曲线和溶解曲线见图1和图2。36例宫颈癌中,发现肿瘤深肌层浸润19例,占52.8%,无肿瘤深肌层浸润17例,占47,2%。用荧光实时定量PCR检测病理标本中E2EPF mRNA表达结果发现:深肌层浸润组E2 EPF mRNA平均表达水平为无深肌层浸润组的2,14倍(见图3)。

2.3 E2-EPF在盆腔淋巴结转移组与无盆腔淋巴结转移组癌组织中的表达水平比较36例宫颈癌中,发现盆腔淋巴结转移10例,占27,8%,无盆腔淋巴结转移26例,占72,2%。用荧光实时定量PCR检测病理标本中E2EPF mRNA表达结果发现:盆腔淋巴结转移组E2-EPF mRNA平均表达水平为无盆腔淋巴结转移组的1,72倍(见图)。

3讨论

E2EPF是一种被长久忽视的泛素家族成员。近年来研究表明:E2EPF很可能在肿瘤的发生发展中起重要作用,但其具体机制尚不明确。本研究观察了E2EPF在老年宫颈癌中表达差异,并分析了其表达与肿瘤转移的关系,为进一步深入探讨老年宫颈癌的防治提供了临床依据。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌,在全球女性恶性肿瘤中其发病率排列第二,在发展中国家则居首位,严重威胁妇女生命。虽然通过宫颈癌脱落细胞学普查的广泛开展,有效地提高了宫颈癌的早期检出率,但目前的疗效仍难令人满意。治疗失败的主要原因是肿瘤局部未控或复发。因此,研究宫颈癌的发病与转移机制,寻找新的治疗方法依然是目前宫颈癌治疗中的一个重要课题。E2EPF在癌组织中的高表达,提示该基因很可能参与了肿瘤的发生与发展过程。近年研究认为,其可能参与肿癌发生发展的机制有:(1)E2EPF被归为M/G1期高表达基因组,可能是参与细胞周期调控的重要成员,而与肿瘤细胞的增殖有关;(2)E2-PF通过促进抑癌因子pVHI的降解,提高低氧诱导因子的水平,从而激活系列与肿瘤增殖、侵袭和转移相关的基因[31;(3)EPF通过稳定IR1α表达,激活P13K/Akt通路,可能对于肿瘤细胞的维持、发育、增殖具有重要的作用。肿瘤转移往往是导致治疗困难和患者死亡的重要原因。手术是宫颈浸润癌的主要治疗手段,术前加用放疗或辅助化疗,术后放疗和化疗应用于具有高危因素的患者,能降低盆腔复发率和延长复发时间,但老年宫颈癌的疾病特殊性,体质差导致手术耐受性差,放疗和化疗并发症多。因而深入探索宫颈癌转移的机制,努力寻找更好的治疗靶点与治疗方案,是亟待解决的问题。E2EPF信号通道与肿瘤转移机制的深入研究有可能为阻断宫颈癌的转移提供新的线索。

参考文献

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