德国 D980半导体激光仪溶脂紧肤的动物实验研究

容貌的改变具体表现在衰老、臃肿、皱纹乃至肤色肤质的改变[1],在一定程度上影响了人们的心理状态,甚至影响了工作学习、社交等正常的生活。在过去的30年中,吸脂手术已经成为最流行的身体轮廓塑形方法[2]。M Shavc1zon(2001年),H Bluman(2001年),K Badin(2002年)及Tldman(2003年)等所进行的对激光溶脂设各的初步研究,均报道了类似的结果。强脉冲光(intcnsc pu1scd hgllt,1PL)[3]是近年来发展起来且广泛用于临床治疗皮肤光老化的一种方法。动物实验中同样发现,IPL照射后刺激胶原蛋白的表达[4]。有研究表明激光辅助溶脂是有积极意义的,包括皮肤回缩作用和术中出血的减少[5]。法国Mrge Mordondcn(2006年)等证明,采用相同能量进行治疗时,980nm半导体激光比1064nm NdAG激光更具优越性。近两年,在欧洲及拉丁美洲半导体激光溶脂技术已经应用于临床。自2012年1月至2012年9月,本实验则旨在定量分析半导体激光D980对大鼠皮肤的影响,以及激光对收缩皮肤和改善弹性的特征性。

1材料与方法

1.1实验动物与仪器随机选取12只清洁级SD大鼠(佳木斯大学动物实验中心提供),雌雄各半,体质量320~360g,12~解个月龄。分笼饲养,正常喂食。德国D980激光治疗仪,波长980nm,操作模式为连续/脉冲模式,激光的输出功率及脉冲数、脉宽的设定、操作模式均可调节。

1.2 实验方法 将12只大鼠两侧背部皮肤在实验前一天用8%硫化钠背部脱毛,面积100px×100px,以5%水合氯醛液行腹腔注射麻醉(3mlkg体质量)。调节∞20治疗参数,囚大鼠皮肤属于∏乜pathckⅣ类皮肤,故选择高能量,能量密度,各平行光纤间距为25px,仪器选择连续发射模式,调节不同功率值。随机分组:4W、8W、⒓W组。局部碘伏消毒。肿胀麻醉液:2%利多卡因1tXXl mg+肾上腺素1mg+每升生理盐水含1O nd碳酸氢钠。预标记区域皮下充分浸润麻醉,光纤放置在套管内,将套管通过小口插入实验组皮下脂肪组织(光纤尖端所在位置初始时用超声仪引导,根据氦-氖红色光来确定光纤尖端所在层次)。当微管插人到组织发射激光,缓慢而均匀移动微管,通过皮下深层到浅层或浅真皮层。相同参数下不同功率作用于实验组,术中红外测温仪监测体表体温,术后背部皮肤涂以冷凝胶,密切观察。

1.3 组织学观察分别在术后1、2、3、4周,每组各处死1只大鼠,处死后于激光作用部位切取背部皮肤组织块约5mm×5mm×5mm皮肤样本。将皮肤立即放入10%甲醛缓冲液中固定3h,梯次浓度乙醇逐级脱水,石蜡包埋,切片。常规进行HE,胶原VG染色,VEGF免疫组化染色。

1.4 VEGF免疫组织化学染色图像半定量分析参照BMR2免疫组化试剂盒的操作方法进行免疫组化染色。每个标本取10张切片,显微镜放大200倍后,随机取10个视野,阳性为黄褐色,计数视野中的阳性细胞总数,计算平均每个视野中的阳性细胞总数,每组5张切片,计算得出各组平均每个高倍视野的阳性细胞数,以表示。采用美国公司版本图像分析软件进行VEGF阳性细胞数量的测量。阳性细胞数目越多说明愈合越好。

1.5 统计学处理计算结果采用配对r检验分析进行统计学处理,统计软件为SPSS16.0软件。P<0.O5为具有统计学意义。

2结果

2.1 HE染色及VG染色结果治疗后第1、2周各实验组皮肤真皮层胶原纤维及弹力纤维未见明显差别,胶原纤维纤细,排列稀疏;治疗后第3周胶原纤维、弹力纤维及成纤维细胞数目增多,纤维致密;治疗后第4周观察皮肤,可以看到胶原纤维的密度和数量增加。4周后4W实验组显示,胶原纤维及弹力纤维间隙减小,纤维致密,但排列紊乱(图1a,图h);8W实验组显示在皮肤结构重塑过程中,胶原纤维及弹力纤维间隙减小,纤维致密,在表皮真皮连接交界处,良好的线性纤维平行排列(图1b,图20);12W实验组显示原纤维及弹力纤维间隙减小,纤维致密,但局部可见真表皮脱离及少量细胞核碎屑(图1.,图9.)。由此可见,功率为8W时效果最好。

2.2免疫组织化学染色结果D980激光作用后刺激了大鼠皮肤VEGF表达增多,在4周时不同功率的作用效果存在明显差异,其中8W实验组表达较其他两组明显增强(P<0.OO1)。同样,阳性产物主要分布在细胞外基质中,真皮浅层、毛囊周围基质中均有更明显的棕黄色染色,皮肤表皮细胞亦出现阳性产物表达,阳性表达区血管内皮细胞也明显增多。

3讨论

随着人们生活水平的提高,皮下脂肪堆积过多的人越来越多,出于对现代审美及健康的要求,形体美塑造技术也随之流行起来。激光作为辅助工具的使用,改进了传统的吸脂技术[6]。在脂肪溶解过程中,脂肪抽吸前激光和脂肪之间相互作用所产生的直接脂肪细胞破坏作用,可以减少出血,增加皮肤的紧致性[19]。有实验证实,经Nd:YAG激光照射后照射部位的皮肤弹性、皮肤中羟脯氨酸含量及真皮胶原纤维含量有明显提高和改善作用[10]。K Badin(2002年)等报道,半导体激光波长在相同的光谱区域,具有提供高效率的优势(通常为30%)和高功率(25W或以上)。证实了人体脂肪在激光治疗区域显示了破坏脂肪细胞的细胞膜、凝固的胶原蛋白纤维和血管的凝血功能及皮肤收缩力,平均降幅为17%。高功率980nm半导体激光器比1064nm更好,能够确定最佳的治疗参数,但这些尚需进一步的临床评估。目前,临床上较先进的技术为“光纤热塑”或“电光内雕”,其本质是用经皮激光光纤在皮下或SMAS筋膜层往复移动激光光纤,导入激光“热能”和“光化学能”双重作用,达到既去除脂肪臃肿,同时又刺激真皮胶原再生,使皮肤收紧。本实验证实在第4周皮肤观察时,8W实验组显示在皮肤结构重塑过程中,胶原纤维及弹力纤维间隙减小,纤维致密,在表皮真皮连接交界处有良好的线性纤维平行排列。

VEGF是一种具有肝素结合的活性生长因子,可特异性地作用于血管内皮细胞,诱导体内血管的形成,具有诱导其内皮细胞增生的相对活性。VEGF的表达受到一系列生长因子的影响,如细胞因子和激素的调节等,其中缺氧是最重要的调节因素之一[12]。唐乾利等[13]推测MEB0可能通过对VEGF促进创面成纤维细胞的分裂增殖及新生毛细血管的增殖,从而促进肉芽组织形成,加速创面愈合。本实验通过组织学观察、VEGF的免疫组织化学染色观察,研究德国D980半导体激光仪在能量密度为50J/cml,各平行光纤间距为25px,仪器选择连续发射模式,调节不同功率值。实验动物随机分组,分为4、8、12W组时,结果显示8W组胶原纤维及弹力纤维数量明显增多,且在表皮与真皮连接交界处,线性纤维平行排列紧密,8W组VEGF的阳性表达细胞数目最多且表达时间最快。说明功率8W时对大鼠皮肤的收缩和弹性的改善明显,导致紧肤效果最佳,值得临床医师操作时借鉴。

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