子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中ARPC2/3蛋白的表达及意义
发表时间：2014-01-15 浏览次数：1084次
子宫颈鳞状细胞癌是全球导致妇女死亡的仅次于乳腺癌的第二大恶性疾病，而且呈逐年增长并年轻化的趋势，对妇女的身心健康产生极大危害，目前已知道HPV感染是宫颈癌发生的重要因素，有报道称95%以上的宫颈癌组织中都有HPV感染，尤以HPV16/18多见。近年来随着基因芯片技术的不断发展，越来越多的肿瘤生物学家应用基因芯片技术来分析比较肿瘤组织与正常组织间不同基因的表达差异，其中肌动蛋白相关蛋白复合体2/3就被认为可能是子宫颈癌的候选基因，笔者现采用免疫组化方法检测子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中ARPC2/3的表达情况来研究ARPC2/3蛋白与子宫颈癌发生、发展的意义。现报告如下。 1材料与方法1．1材料收集：收集揭阳市人民医院2010年2月~2011年8月期间由门诊活检及住院手术切除的宫颈病变组织标本174例，同时另取经病理诊断确诊为良性病变的子宫平滑肌瘤或子宫腺肌症的全宫切除标本36例，取其正常宫颈组织作为对照组。1．2试剂和方法：浓缩型兔抗人多克隆抗体购自美国Millipore公司，SP试剂盒、DNA显色剂盒（上海基因公司），采用免疫组化SP法。所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，3~4 um厚度连续切片3张，一张行常规HE染色，以诊断分类，另2张行免疫组化SP法按试剂盒操作说明步骤进行操作，按一抗1∶500的浓度稀释，用0.1 mmol/L PBS代替一抗做阴性对照。1．3结果判定：ARPC2/3阳性信号表达位于细胞质及细胞核内，呈棕黄色颗粒。免疫组化结果判定经2位病理医生双盲法进行独立评估。显微镜下随机选取4个高倍视野计数，采用阳性细胞面积及染色强度进行综合评分。 按阳性细胞数所占比例来评分：无阳性细胞为0分，阳性细胞占1%~9%为1分，10%~50%为2分，51%~100%为3分；按染色强度进行评分：不着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分，最后将两项得分相乘，即为该病例的免疫组化评分，0~4分为低表达，6~9分为高表达。1．4统计学方法：采用SPSS 13.0统计软件，进行χ2检验。2结果2.1临床特点：210例标本中36例为正常对照组，另174例经2位资深病理医生共同复查确诊，其中CINⅠ级48例，CINⅡ级32例，CINⅢ级38例，SCC56例。患者年龄21~68岁，平均42.1岁，临床症状多以接触性出血、阴道不规则出血及白带异常等常见，其中淋巴结转移8例。2.2ARPC2/3蛋白检测在各组的表达：在正常对照组36例中ARPC2/3蛋白阳性表达占13.8%（5/36）,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组以及SCC组的ARPC2/3蛋白阳性率分别为39.5%（19/48）、40.6%（13/32）、44.7%（17/38）、59%（33/56）。CIN组和SCC组较正常对照组ARPC2/3蛋白阳性率明显增高，差异具有统计学意义（P<0.005）。同时SCC组高于CINⅢ组，差异具有统计学意义（P<0.005）。而CIN三组之间，ARPC2/3蛋白阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。详见表1。表1ARPC2/3在正常组、各级别CIN组和SCC组中的表达分组例数ARPC2/3蛋白阳性［例(%)］ 低表达 高表达 P值正常对照 36 5（13.8） 0 <0.005CINⅠ级 48 12（25） 7（14.5） <0.005CINⅡ级 32 5（15.6） 8（25） <0.005CINⅢ级 38 12（31.5） 5（13.2） <0.005SCC 56 17（30.4） 16（28.6） <0.0053讨论ARPC2/3复合体由7个亚单位组成,在细胞内受到多种核化促进因子的调节,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化。ARPC2/3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义。大量的遗传学证据表明，ARPC2/3复合体及其激活因子如真菌肌球蛋白对于真菌中肌球蛋白微丝的形成是不可或缺的因素［1］，微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程。有研究发现定位于伪足的ARP2/3复合体能帮助建立微丝网络，微丝网络是片状伪足开始出现分枝过程的重要步骤。当只有纯肌动蛋白聚合物时，片状伪足和丝状伪足等的延伸主要倾向于核化形成长细纤维，定位在伪足上的ARPC2/3帮助肌动蛋白纤维网络的形成，肌动蛋白纤维网络的形成对伪足形成的分支启动过程很重要。但尚不清楚伪足的形成是否必须ARPC2/3以及和ARPC2/3是如何影响细胞运动的。有实验表明ARPC2/3复合体结合在微丝侧面的位置与正端十分接近，分支更倾向于母纤丝尾端附近的较新的有ATP结合的部位，这说明了ARPC2/3复合体与微丝侧面结合时，对其结合的位置是有选择的。Zheng等采用免疫组化方法对胃癌不同细胞系进行ARPC2和ARPC3蛋白的检测［2］，发现这两种蛋白在胃癌不同细胞系中的表达均高于慢性胃炎，而且表达程度与肿瘤的大小、侵犯深度、静脉侵犯都有关，这提示ARPC2和ARPC3可能与胃癌发生发展及预后有关。在本研究中，CIN组和SCC组较正常宫颈组ARPC2/3蛋白阳性率明显增高，证实了子宫颈癌组织中ARPC2/3蛋白表达水平高于正常宫颈组织，充分说明ARPC2/3与宫颈癌的发生有密切关系［3］，而且在本研究的CIN三组中，ARPC2/3随着CIN由轻至重，表达逐渐增强，直至SCC的高表达，说明ARPC2/3复合体参与了子宫颈CINⅠ~Ⅲ的发展及SCC癌变的过程，并且其表达强度与宫颈病变的恶性程度呈正比。 4参考文献［1］Higgs H N,Pollard T D.Regulation of actin filament network formation through ARP2/3 complex: activation by a diverse array of proteins［J］. Annu Rev Biochem,2001,70:649 .［2］Zheng HC,Zheng YS,Li XH,et al.Arp2/3 over expression contributed to pathogenesis,growth and invasion of gastric carcinoma［J］.Anticancer Res,2008,28(4B):2225.［3］刘开江，李庭芳，赵峰，等.应用基因芯片筛查维吾尔族妇女子宫颈癌相关基因［J］.中华妇产科杂志，2003，38（6）：325.
