免疫球蛋白的检测及分离技术分析
发表时间：2015-04-29 浏览次数：1801次
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是球蛋白的一种，他具有抗体的活性并能够与相应的抗原发生特异性的结合反应。目前为止，人们共发现了IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五种免疫球蛋白[1]。免疫球蛋白的检测指的是通过一定的技术检测出免疫球蛋白各个成分的含量。免疫球蛋白的分离是根据蛋白质的分子大小、溶解度和免疫学特征等因素从血液中提取免疫球蛋白[2]。本次对3种检测方法、2种分离方法进行阐述，现报告如下。
1资料与方法
1.1临床资料
1.1.1检测样品来源:收集2013年以来我院免疫球蛋白异常血清80例，-20℃保存备检。
1.1.2主要试剂、仪器:彩扩板购自重庆医学院试剂研究所(批号：20050709)，免疫透射比浊法试剂购自伊利康生物技术有限公司(批号：2005 0217)，仪器为ARCO公司生产的BT-2245型全自动生化分析仪(意大利)。
1.2研究方法
1.2.1回顾性样本的数据收集:将用单扩法、免疫透射法、免疫散射法分别测定IgG、IgA、IgM的数据，并采用SPSS软件包进行单因素方差分析。
1.2.2免疫球蛋白的分离:免疫球蛋白的分离技术中，本次盐析法采用硫酸铵盐试剂，有机溶剂沉淀法采用乙醇试剂。
1.3统计学方法:在免疫球蛋白的检测中得到的数据采用SPSS 12.0进行分析，并对测定IgG、IgA、IgM的数据用SPSS软件包分析单因素方差，从而得出各自P值。
2结果
2.1三种检测方法测定IgG、IgA、IgM的异常百分比:据调查我院样本的IgA的异常百分比约为13.5%，单扩法和散射比浊法测定的IgG异常百分比均在实际数值左右，而透射比浊法测定的只有1.5%。
2.2三种方法同时测定免疫球蛋白含量结果:单扩法、免疫透射法和免疫散射法同时测定免疫球蛋白的含量，得到一定的P值，测得IgG值的 P>0.05，表示差异无统计学意义，若P<0.05表示差异有统计学意义。
3讨论
3.1检测结果分析:免〖JP+1〗疫球蛋白的检测在临床上为多种疾病的诊断、疗效观察以及预后的重要指标，特别是骨髓瘤患者血清中免疫球蛋白由于病因以及病程的发展的不同其含量比较差异有统计学意义[2-4]。表1得出透射比浊法值较其他两组小，表2得出IgG的差异无统计学意义，说明透射比浊法测IgA、IgM的误差较大。可能原因有：一是抗原或抗体过剩，出现可溶性复合物，造成测量误差;二是血脂浓度的影响，尤其在低稀释时，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，造成测量假性增高。
3.2分离技术分析
3.2.1盐析法:盐析法是利用抗体与杂质之间对盐浓度不同的敏感度进行的，选一定范围的盐溶液浓度，使一部分杂质呈沉淀状态，抗体成分呈溶解状态。影响盐析的因素有很多种，比如盐析常数(Ks)、盐的分级范围、pH和盐浓度。分离效果好的蛋白质的Ks值一般都很大，而且盐析范围差异明显;分离效果不好一般是Ks值很大，盐析范围差异小。
3.2.2有机溶剂沉淀法:有机溶剂沉淀法广泛用于生产蛋白质剂，最常用的是有机溶剂是乙醇。目前国际上常用的冷乙醇分离法提取免疫球蛋白是低温乙醇Cohn6法(Cohn于1949年提出，用于制备IgG)。利用低温乙醇方法能将血清蛋白分成六个组分(Ⅰ~Ⅵ)，其中免疫球蛋白IgG主要存在与Ⅱ~Ⅲ中，白蛋白A1b主要存在于 Ⅴ中。
4参考文献
[1]刘德祥，纪传珍，邢杰.医学免疫学与病原生物学[M].北京：人民军医出版社，2000：27.
[2]云雯,王晓英,董平,等.基于电化学聚合固定抗体的电化学发光免疫分析法检测人免疫球蛋白[J].分析化学,2009,37(1):8.
[3]庄甜甜,夏海锋,林东强,等.混合模式吸附层析从猪血浆中分离免疫球蛋白[J]. 化工学报,2010,61(2):336.
[4]钱浩,李春蛟,张莹雪,等.嗜硫性顺磁微球的制备及对人血清抗体的分离[J]. 材料研究学报,2009,23(1):93.
[收稿日期：2013-12-08编校：徐强]
