g 2和ER在乳腺良恶性肿瘤中的表达及生物学意义

作者                     作者单位

雷杰    075000 河北省张家口市，河北北方学院附属第一医院普外科

夏登云  075000 河北省张家口市，河北北方学院附属第一医院麻醉科

费建东  075000 河北省张家口市，河北北方学院附属第一医院普外科

薄爱华  河北北方学院实验中心电镜室

张晓丽  河北北方学院实验中心电镜室

赵英　　河北北方学院实验中心电镜室

The expression and biological significance of Ang2 and ER in benign and malignant tumor of breast LEI Jie, XIA Dengyun, FEI Jiandong, et al.Departmant of General Surgery, The First Hospital Affiliated to Hebei North University, Hebei, Zhangjiakou 075000

【Abstract】 Objective To investigate the expression and biological significance of Ang2 and ER in benign and malignant tumor of breast.Methods The expression of Ang2 in 85 specimens of breast carcinoma and 42 specimens of breast fibroadenona were examined by SABC immunohistochemical method, and the relationship between Ang2 as well as ER and the clinical pathology was analyzed.Results The positive rate (68.24%,58/85) of Ang2 in breast carcinoma was significantly higher than that (7.14%,3/42) in breast fibroadenona(P<0.01), and the expression of Ang2 was not associated with patients' age, tumor size, pathological type and ER status(P>0.05). The positive rates of Ang2 in stage Ⅲ and Ⅳ group were significantly higher than those in stage Ⅰ and Ⅱ group(P<0.05). The positive rate of Ang2 in lymph node metastasis group was significantly higher than that in non lymph node metastasis group(P<0.01). The positive rate of ER in breast carcinoma was 58.82%(50/85), ER didn't express in breast fibroadenona.Conclusion There is an abnormal expression of Ang2 in breast carcinoma, and Ang2 is associated with the prognosis of patients.

【Key words】 breast carcinoma; Angiogenin2; estrogen receptor; immunohistochemical method

血管生成素(angiopoietin，Ang)是作用于血管内皮细胞的血管生成促进因子，在肿瘤血管的生成及发展中起着重要的作用[1]。雌激素受体(ER)状况对乳腺癌术后内分泌治疗有指导意义。我们应用免疫组化技术检测Ang2和ER在乳腺癌组织中的表达，并评价其与临床病理学特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集河北北方学院附属第一医院2004年9月至2006年12月手术治疗、资料完整的乳腺癌病例85例，全部病例术前均未行放疗和化疗。患者均为女性;年龄32～74岁，平均年龄50.80岁。病理分型包括浸润性导管癌51例，浸润性小叶癌14例，髓样癌13例，其它类型7例;有腋窝淋巴结转移48例，无淋巴结转移37例;临床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期51例，Ⅲ期15例，Ⅳ期1例。另选择乳腺纤维腺瘤42例作为对照，均为同期手术治疗病例。

1.2 主要试剂 兔抗人Ang2多克隆抗体、兔抗人ER抗血清及SABC免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司，DAB显色剂购自北京中衫金桥生物技术有限公司。

1.3 方法 石蜡切片行HE染色及免疫组化SABC方法染色。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每次实验均以公司提供的阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判断 以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。在光镜下计数10个高倍视野(×400)，平均阳性细胞数≥10%判断为阳性病例，<10%为阴性病例。

1.5 统计学分析 应用SAS 8.0软件行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ang2和ER在乳腺癌及纤维腺瘤组织中的表达 乳腺癌和乳腺纤维腺瘤组织中Ang2阳性率分别为68.24%(58/85)和7.14%(3/42)，2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。ER在乳腺癌中的阳性率为58.82%(50/85),在乳腺纤维腺瘤中无阳性表达。

2.2 Ang2和ER在乳腺癌组织中的表达与生物学特征的关系 Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌者的Ang2表达阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌者(P<0.05)。有淋巴结转移者的Ang2阳性率明显高于无淋巴结转移者(P<0.01)。其他生物学特征比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ang2和ER在乳腺癌组织中的表达与生物学特征的关系例注：与淋巴结转移阳性比较，P<0.01;与临床Ⅰ+Ⅱ期比较，#P<0.05

2.3 Ang2和ER在乳腺癌组织中表达的相关性 Ang2和ER均阳性32例， Ang2和ER均阴性9例， Ang2阳性ER阴性26例，Ang2阴性ER阳性18例。差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

新生血管对实体瘤的生长、侵袭和转移有着十分重要的作用，肿瘤新生血管的存在不但为肿瘤生长提供了营养物质，带走代谢产物，还为肿瘤细胞的转移及浸润提供了通道[2]。

血管生成素是近年来发现的重要的血管生成调控因子，其家族成员Ang1和Ang2分别于1996年及1997年相继被发现，它们的共同受体是Tie2(酪氨酸激酶受体2)。Ang1促进血管内皮细胞出芽，促进血管重塑、成熟，维持血管的完整性，起稳定血管的作用。而Ang2的功能主要是通过竞争性抑制Ang1与受体Tie2结合，使血管内皮细胞同周围的支持细胞发生解离，形成不稳定渗漏性的血管，从而促进肿瘤血管的重构与形成[3-5]。本研究发现，乳腺癌组织中Ang2的阳性率明显高于乳腺纤维腺瘤(P<0.01)，与高冬玲等[6]报道一致。乳腺癌患者血浆中Ang2表达水平明显增高，提示Ang2与乳腺病变的良恶性有关，而且可能成为临床上判断乳腺肿瘤生物学行为的指标之一[7]。

ER阳性病例对内分泌治疗有效，而受体阴性病例对内分泌治疗效果差。本实验提示ER与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、病理分型、淋巴结转移状况及肿瘤临床分期无关，Ang2表达水平与乳腺癌的ER状况也无明显关系(P>0.05)。

患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移状况及肿瘤临床分期为传统的临床病理学因素，对乳腺癌的预后有重要意义。本实验提示Ang2表达水平与患者年龄及肿瘤大小无明显关系(P>0.05)。Sfiligoi等[8]发现高水平Ang2表达的乳腺癌患者易发生腋下淋巴结转移，对预后的判断有重要意义。本研究结果显示Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌者的Ang2表达阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌者(P<0.05),淋巴结转移阳性者的Ang2阳性率明显高于淋巴结转移阴性者(P<0.01)，提示Ang2有对预后的判断有重要意义。

鉴于Ang2与肿瘤的血管新生、发展及转移密切相关，我们可以把Ang2作为靶标进行抗肿瘤治疗，相信会有良好的前景。近年以Ang2为靶标的抗肿瘤实验已经初露端倪，Oliner等[9]以Ang2抗体治疗肿瘤小鼠，发现肿瘤血管内皮细胞增生受到抑制，肿瘤亦明显缩小。除成年女性的生殖系统外，Ang2主要存在于与肿瘤相关的组织内，因此Ang2拮抗剂具有靶向性好、全身副作用小的优点。通过检测乳腺癌组织中Ang2和ER的表达，对临床化疗方案的选择和提示预后有重要意义。

【参考文献】

1 Yancopoulos GD, Davis S, Gale NW, et al.Vascularspecific growth factors and blood vessel formation. Nature,2000，407:242248.

2 Maisonpierre PC, Suri C, Jones PF, et al. Angiopoietin2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis. Science, 1997，277：5560.

3 Kampfer H, Pfeilschifter J, Frank S. Expressional regulation of angiopoietin1 and 2 and the tie1 and 2 receptor tyrosine kinases during cutaneous wound healing: a comparative study of normal and impaired repair. Lab Invest, 2001，81:361373.

4 Lauren J, Gunji Y, Alitalo K. Is angiopoietin2 necessary for the initiation of tumor angiogenesis? Am J Pathol,1998，153:13331339.

5 Beck H, Acker T, Wiessner C, et al. Expression of angiopoietin1, angiopoietin2, and tie receptors after middle cerebral artery occlusion in the rat. Am J Pathol，2000，157: 14731483.

6 高冬玲, 郭克民, 张岚, 等. 人乳癌组织中血管生成素2及其受体Tie2的表达. 郑州大学学报医学版,2006，41: 517519.

7 Caine GJ, Blann AD, Stonelake PS,et al. Plasma angiopoietin1, angiopoietin2 and Tie2 in breast and prostate cancer: a comparison with VEGF and Flt1. Eur J Clin Invest,2003，33:883890.

8 Sfiligoi C, de Luca A, Cascone I, et al. Angiopoietin2 expression in breast cancer correlates with lymph node invasion and short survival. Int J Cancer,2003,103:466474.

9 Oliner J，Min H，Leal J，et al. Suppression of angiogenesis and tumor growth by selective inhibition of angiopoietin2.Cancer Cell,2004，6:507516.