从江牛带绦虫感染家猪后血清IL-4和IL-10含量的动态变化

作者               作者单位

刘元忠   黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558003

杨鹏     黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558003

谢洪书   黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558003

Examination of the serum IL-4 and IL-10 in domestic

pigs infecteted with taenia saginata asiatica

LIU Yuan-zhong,YANG Peng,XIE Hong-shu

(Qiannan Medical College, Duyun 558003,China)

【Abstract】Objective：To detect chanism of immune response of domestic pigs against Taenia Saginata asiatica infection through oberserving change of serum IL-4 and IL-10 in domestic pigs experientially infected with Taenai Saginata asiatica. Methods：Five healthy pigs were fed with eggs of Taenai Saginata asiatica,and reared isolately in animal center,to establish Taenai Saginata asiatica infection model ,and normal controls.Vein blood of pigs were adopted at day 7,15, 45and 60 after infection and collected serum.Serum IL-4 and IL-10 were detected by ELISA Results：The level of serum IL-4 and IL-10 of normal group maintained relatively be stable through out the experiment.The serum IL-4 and IL-10 level of infection group began to rise at day 7 , the highest at day 15, and increasing again.Compared with the normal group ,infected group IL-4 and IL-10 showed a great increase at day 7 and day 60. Conclusion：Serum IL-4 and IL-10 level showed biphasic difference among difference infection stage. High level of Sera IL-4 and IL-10 at early infected stage suggested that immune response was very important role against Taenia Saginata asiatica at early infected stage.Constant level of IL-4and IL-10 at day suggested that immune response-associated antigen deceased.IL-4 and IL-10 might be one important factor in induced liver fibrous in late infection stage.

【Kek words】Taenia saginata asiatica;cvtokine;expermental animal infection; domestic pigs

目前对牛带绦虫的研究仅局限于形态学、生物学等方面，有关宿主抗牛带绦虫感染的研究报道少见。本研究拟用从江牛带绦虫实验感染乳猪，动态观察感染从江牛带绦虫的家猪血清IL-4和IL-10含量变化，从细胞因子角度探讨家猪抗从江牛带绦虫感染免疫应答机制，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验虫体的来源 用槟榔、南瓜子对贵州省从江县绦虫病流行区的2例已确诊的绦虫病患者进行驱虫，获得两条完整虫体经形态学鉴定为从江牛带绦虫。

1.1.2 虫卵悬液制备 将上述驱出的绦虫用两套细小针头剖开孕节子宫，离心收集虫卵，3 000 r/min×15 min,用生理盐水离心洗涤4次，调节虫卵浓度至15万/ml。

1.1.3 实验动物 20 d龄三元杂交猪10头，雌雄并用，由贵阳市种猪繁殖场提供。经粪检、驱虫和间接血凝实验证明无在囊尾蚴感染。

1.1.4 试剂 IL-4和IL-10的试剂盒，由浙大生物基因工程有限公司(系美国Rapid BioLab.公司进口分装)提供。

1.2 方法

1.2.1 分组及处理 将20 d龄三元杂交猪随机分为实验组和正常组各5头。实验组每头灌胃1 ml(15万/ml)，对照组不感染。两组乳猪均使用专用膨化颗粒饲养，隔离圈养，防止自然感染。

1.2.2 血清细胞因子含量测定 实验组及正常组分别于感染后第7、15、45和75天分别抽取5 ml静脉血，离心取血清，置-20℃冰箱保存，用ELISA法测定血清IL-4和IL-10的含量。

1.2.3 统计学处理 数据用SPSS13.0统计软件进行处理，数据用x±s表示，两组均数的比较采用方差分析。

2 结果

2.1 家猪感染从江牛带绦虫后血清IL-4含量的动态变化 用ELISA法检测家猪血清IL-4含量水平，正常组血清IL-4含量基本处于稳定水平。实验组血清IL-4含量在感染第7天升高，第15天达高峰，第45天与正常水平相当，第60天再次升高。与正常组相比，实验组血清IL-4含量在感染第7、15和60天时显著升高(P<0.01)，见表1。表1 家猪感染从江牛带绦虫后血清IL-4含量注：*与对照组比较，P<0.01。

2.2 家猪感染从江牛带绦虫后血清IL-10含量的动态变化 ILESA 法检测家猪血清IL-10含量水平，正常组血清IL-10含量，基本处于稳定水平。实验组血清IL-10含量在感染第7天升高，之后迅速下降略高于或低于正常组，第75天时再度升高。与正常组相比，实验组血清IL-10含量在感染第7和15和75天时显著升高(P<0.01)，见表2。表2 家猪感染从江牛带绦虫后血清IL-10含量注：*与对照组比较，P<0.01。

3 讨论

在寄生虫感染免疫中，细胞因子作为介质，既参与体液免疫应答也参与细胞免疫应答，宿主的免疫防御病理损害都受到细胞因子调控。许多研究结果[1-2]显示宿主免疫力在从江牛带绦虫六钩蚴感染中发挥着重要作用。本研究通过观察感染从江牛带绦虫的家猪血清IL-4和IL-10含量的变化，发现从江牛带绦虫感染家猪第7天和15天，IL-4和IL-10含量远高于正常组，高含量的IL-4和IL-10可以促进Th0向Th2转化，Th2细胞偏向于分泌IL-4、IL-5和IL-10等，与B细胞的增殖、成熟和促进抗体生成有关[3]。由此可见，在家猪感染从江牛带绦虫早期，以Th2细胞应答优势为主。Th2细胞应答优势主要表现血清抗体含量增加，特异性体液免疫应答增强。

家猪感染从江牛带绦虫第45天，从江牛带绦虫六钩蚴在肝脏已发育成熟，由于大量新抗原的出现，宿主应处于较高免疫应答。本研究显示，此时血清IL-4和IL-10含量与正常组区别不大，提示特异性体液免疫应答处于正常水平。其原因可能是从江牛带绦虫六钩蚴在形成囊尾蚴的过程中释放一种可溶性蛋白诱导宿主产生免疫耐受有关。徐宏秀等[4]在脑囊尾蚴病患者Th2型细胞因子的研究发现，脑囊尾蚴病患者血清IL-4和IL-10含量明显升高。由于脑囊尾蚴病患者体内虫体以囊尾蚴形式存在，从理论上说应该与从江牛带绦虫感染家猪中期的实验结果一致，但实验结果差异较大，这种差异是否为带绦虫寄生的中间宿主不同所造成?还有待于进一步研究。

汪敏等[5]在研究从江牛带绦虫感染家猪病理学观察中发现，家猪感染从江牛带绦虫第75天后，囊尾蚴已经全面钙化，肝组织以肉芽肿和肝纤维化损害为特征。此时，血清IL-4和IL-10细胞因子含量再次异常增高，高表达IL-4和IL-10，究竟有何意义?它的存在是否与肝纤维化形成有关?Cheerer 等[6]在感染日本血吸虫小鼠体外实验研究中发现，IL-4与纤维化形成密切相关。朱华斌等[7]在Th2细胞因子在日本血吸虫小鼠肝脏中的变化及其与纤维化的比较中发现，IL-4和IL-10在血吸虫肝脏肉芽肿及纤维化形成中起重要作用。由此我们推测，高表达的IL-4和IL-10可能在诱导肝组织形成肉芽肿和肝纤维化过程中发挥着重要作用。但也有报道显示，脑囊尾蚴病变组织的坏死和炎症反应以完整死虫组最显著，伴有纤维组织增生时，病变组织的坏死和炎症反应更为严重，推测起原因可能是虫体死亡后释放大量新抗原有关[8]。

【参考文献】

[1] Ito A,Fan pc,Chung WC ,et al.Cross protection against Taenia taeinaefrom is in rats vaccinated with non-viable oncosphere of Asian Taenia or T.saginata [J]. Journal of Helminthology,1994，68(4)：83-85.

[2] 朱武军，令狐艳，包怀恩，等. 贵州都匀、从江两地牛带绦虫感染家猪的比较研究[J]. 中国人兽共患病学报，2007，23(8)：788-791.

[3] 何维，高晓明，曹雪涛，等.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2005：280.

[4] 汪敏，包怀恩，戎聚全，等 .亚洲牛带绦虫感染家猪的病理学观察[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2005，21(6)：479-480.

[5] 徐洪秀，贾凤菊，刘玉冰，等.脑囊尾蚴病患者Th2型细胞因子的研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2002，20(6)：348-350.

[6] Chever A W,Williams M E ,Wynon T A，et al. Anti-IL-4 treatment of Schistosoma mansoni-infected mice inhibits development of Tcells and non-B non-Tcells expressing Th2 cytokines while descreasing egg-induced hepatic-fibrosis[J]. Immunnol,1994，153：753.

[7] 朱华斌，曾令兰，罗端德，等.Th2 细胞因子在日本血吸虫小鼠肝脏中的变化及其与肝纤维化的比较[J].同济医科大学学报，2000，29(6)：518-521.

[8] 焦炳忠，刘庆银，猛宪饮，等.52例囊虫性脑小脓肿的病理观察[J].中国寄生虫病防治杂志，1993，6(3)：184-185.