弓形虫感染家兔精液中果糖含量的动态变化

作者              作者单位

兰春伟   新乡医学院本科2004级,河南,新乡,453003

乔卿均   新乡医学院本科2003级,河南,新乡,453003

张海珠   新乡医学院寄生虫学教研室,河南,新乡,453003

Dynamic change of content of fructose in semen of male rabbits infected with Toxoplasma gondii LAN Chunwei1,QIAO Qingjun2,ZHANG Haizhu3 (1.Grade 2004,Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,China;2.Grade 2003,Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,China;3.Department of Parasitology,Xinxiang 453003,China)

Abstract: Objective To observe the dynamic change of content of fructose in semen of male rabbits infected with Toxoplasma gondii(T.gondii).Methods Sixteen male rabbits were infected with 1×105 RH strain tachyzoites of T.gondii by intraperitoneal infection.Semen of the rabbits was collected before infection and after infection from 1st to 13th week respectively.The collected semen was stored at -40 ℃ until assayed.The content of fructose in semen was assayed by resorcinol method and dynamic change curve of content of fructose was drew pre and postinfection.Results The level of fructose in semen of infected rabbits reduced gradually,and in the 7th week the content of fructose was at the lowest level.Then it risen gradually from 8th to 13th week postinfenction but lower than preinfenction.Conclusion Infecting T.gondii could partly lead to the dysfunction of seminal vesicle of rabbits.

Key words: Toxoplasma gondii;rabbit;semen;fructose

弓形虫是一种细胞内寄生原虫,它可侵入人和温血类动物的各种有核细胞[1]。弓形虫感染除对生殖细胞造成损害外尚可累及雄性生殖系统附属性腺,引起精浆生化指标的特征性变化[2]。由于精浆果糖含量是反映精囊腺功能的标志物之一，以果糖作为研究对象间接反映精囊腺的功能，有利于揭示弓形虫感染对精囊腺的影响作用，并为弓形虫感染所引起的男性不育的发病机制提供更为详尽的研究资料。目前，对弓形虫感染后精液中果糖的变化研究较少且主要为临床病例观察和间断性研究，缺乏对其的连续观察。作者通过建立雄兔弓形虫感染的动物模型,采集到雄兔感染前后不同时期的精液标本，采用间苯二酚法检测了精液中果糖浓度的变化情况,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 16只成年健康新西兰家兔，由新乡医学院实验动物中心提供。感染前经弓形虫间接红细胞凝集试验检测均为阴性。体质量(3.05±0.30) kg,雄性生殖系统发育正常并具有自然交配能力。

1.2 家兔感染 收集RH株弓形虫感染的小白鼠腹水,胰蛋白酶消化后计数腹水中弓形虫速殖子浓度。用无菌生理盐水稀释虫液至1×108个/L,虫液中添加青霉素和链霉素各1×106 U•L-1,将虫液在4 ℃存放4 d后,家兔腹腔内注射1 mL虫液，即每只家兔感染弓形虫速殖子1×105个。16只雄性家兔在感染弓形虫后体温升高 、食欲减退、精神萎靡,其中8只感染后8～10 d内不进食先后死亡，尸检见肺炎症状明显。

1.3 标本采集 用雌性家兔作为诱饵，采用假阴道法在家兔弓形虫感染前数周内多次采集家兔精液作为感染前正常对照，在家兔弓形虫感染后1～13周分别采集雄兔精液,-40 ℃冻存备用。在存活的8只雄兔中,由于雄兔感染后性反应下降,能连续采集到精液的仅有5只。在这5只家兔中，由于采精困难，个别周次未能将所有家兔精液采集到，其中第12周未采集到精液。

1.4 精液中果糖含量测定

1.4.1 仪器设备及化学试剂 TGL16G型台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)，化学试剂间苯二酚、硫酸锌、氢氧化钡、盐酸、果糖等均为国产分析纯。

1.4.2 精液中果糖含量的检测 取出冻存精液，36 ℃水浴溶化后以3 000 r•min-1离心后留取精浆，采用间苯二酚法，按文献[3]方法对精浆果糖进行检测。

1.5 统计学处理 使用SPSS 10.0统计软件进行分析。 试验资料为计量资料，以均值±标准差(±s)表示。组间差异的比较采用方差分析法多个样本均数的两两比较。

2 结果

5只雄兔精浆果糖浓度感染前均值为(2.16±0.30)g•L-1，感染后1～11周精液中果糖含量均值分别为(1.63±0.56)g•L-1、(1.58±0.58)g•L-1、(1.43±0.23)g•L-1、(1.24±0.44)g•L-1、(1.15±0.30)g•L-1、(1.16±0.13)g•L-1、(1.03±0.29)g•L-1、(1.37±0.33)g•L-1、(1.36±0.31)g•L-1、(1.33±0.28)g•L-1、(1.43±0.14)g•L-1，感染后第13周果糖含量为(1.39±0.13)g•L-1。对各周次果糖浓度进行方差分析,感染前和感染后7 周精液中果糖含量有统计学意义(P<0.05),其余各周次果糖含量虽较感染前降低但均无统计学意义(P>0.05)。雄兔在感染1×105个弓形虫速殖子后精液中果糖浓度逐渐下降，7周左右达到最低值,在感染后8～13周精浆果糖含量略有所回升，但均低于感染前水平。

3 讨论

弓形虫对男性生殖系统的感染，最早在肾移植患者的睾丸中发现，后分别在弓形虫疾病患者的前列腺、附睾中发现弓形虫，但迄今为止尚未见在精囊腺中发现该虫的报道。弓形虫对男性生殖系统的损伤已在临床工作及动物实验中得到证实[46]，但在弓形虫感染过程中，睾丸及其附属性腺的功能会出现什么样的动态变化，尚缺乏实验资料。本研究以家兔作为实验对象，通过精浆果糖的动态变化，间接考察弓形虫感染对精囊腺的影响以及在感染过程中的变化规律。结果显示在感染第1周，精浆果糖即开始下降，第7周下降到最低峰值，与感染前精浆果糖水平比较差异有统计学意义。在感染后第8周，果糖含量开始逐渐上升，并最终稳定在较低水平。由此提示弓形虫感染后家兔精囊腺功能可能受到一定影响，但在感染后期有所恢复。

有研究表明，弓形虫感染家兔精液中弓形虫虫体数量在感染后第7周达到最高水平，感染后第9周虫体密度降低，并在一定时间内持续稳定在较低水平[78]。本研究中果糖含量最低峰值时间也出现在感染后第7周，由此推测弓形虫感染对精囊腺的损伤作用与虫体密度呈正相关。在感染的急性期，由于虫体的逐渐增多，使精囊腺分泌的果糖量逐渐下降并达到最低峰值。随后由于机体免疫力的产生[9]，弓形虫的繁殖被抑制,从而使机体进入弓形虫感染的慢性期。在慢性期，一方面弓形虫虫体对精囊腺的损伤作用得到抑制，再者精囊腺逐渐修复和增生代偿使精囊腺的分泌功能逐渐恢复,精液中果糖含量也随之有所恢复并维持稳定状态。

周永华等[10]曾对男性不育患者精浆抗弓形虫抗体阳性和阴性患者精浆果糖检测结果进行比较，结果显示两者差异无显著性，其原因可能系研究对象(不孕症男性和男性不育)的不同所致：不育患者求医时机体已处于弓形虫感染的慢性期，精囊腺的功能已基本恢复，以致出现精浆果糖检测结果差异无显著性的结果。

本实验结果显示弓形虫感染家兔精浆果糖含量随感染时间动态变化。弓形虫感染的急性期可对精囊腺造成严重影响，从而引起精浆果糖含量的大幅下降。由于果糖含量下降直接影响精子存活率和活动力，从而引起不育。本研究进一步丰富了弓形虫性男性不育的研究资料，并为今后进一步探讨弓形虫致男性生殖系统损伤机制奠定了基础。由于实验中未能对弓形虫感染家兔精囊腺进行病理切片观察，其病理变化情况还有待将来对其进行探讨。

【参考文献】

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[10] 周永华,陆永娟,刁 文,等.男性不育精浆弓形虫IgG与精液质量及精子运动参数关系研究[J].中国血吸虫病防治杂志,2005,17(1):4548.