HPLC测定八珍袋泡茶中芍药苷的含量
发表时间：2014-05-29 浏览次数：1131次
八珍袋泡茶是由党参、当归、川芎、白术、茯苓、甘草、白芍、熟地黄8味药组成的中药成方制剂,具有补气益血的作用,用于气血两虚、面色萎黄、食欲不振、四肢乏力、月经过多等症。其质量标准依据《卫生部药品标准?中药成方制剂》第五册,自1991年收录后至今未做完善和提高,仅有性状、显微鉴别、干燥失重、装量差异、浸出物及茶剂项下的常规检查等项。2010年重庆市食品药品检验所接受了国家药典委员会“提高八珍袋泡茶质量标准”的任务,着手研究并建立该品种中白芍(以芍药苷计)的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。现将研究结果报道如下。1 仪器与试药高效液相色谱仪：Agilent1100(含DAD检测器),美国安捷伦;Waters2695-2487,美国;超声波清洗器：KQ-500B,昆山市超声仪器有限公司;电子分析天平：SARTORIUS BP221S,德国;METTLER TOLEDO AX205,瑞士。芍药苷对照品(批号 110736-200934供含量测定用),中国药品生物制品检定所提供;八珍袋泡茶(批号100301、100302、100303),重庆希尔安药业有限公司提供。乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)为流动相;流速：1.0 mL/min;检测波长：230 nm;柱温：30 ℃。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精密称定,加稀乙醇制成每1 mL含50 μg的溶液,即得。2.2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物,研细,取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇25 mL,称定重量,超声处理(功率250 W,频率50 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。2.2.3 阴性对照溶液的制备除去白芍,按处方比例,同供试品溶液的制备方法制成缺白芍阴性对照溶液。2.3 专属性考察取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液,按“2.1”项色谱条件各进样10 μL,结果供试品色谱中在与芍药苷对照品色谱相同保留时间处有色谱峰,阴性对照色谱在相应位置处无色谱峰,说明阴性样品的其他成分无干扰,专属性好。见图1。A BC注：A.对照品;B.供试品;C阴性对照图1 八珍袋泡茶HPLC图2.4 线性关系考察分别精密吸取同一对照品溶液(0.051 4 mg/mL) 2、5、10、15、20、25 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积。以芍药苷对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：A=1 189.9C+7.363 3,r=0.999 9(n=6)。表明芍药苷进样量在0.102 8～1.285 μg范围内线性关系良好。2.5 精密度考察取上述对照品溶液,重复进样6次,每次10 μL,测定芍药苷峰面积,测定结果RSD=0.63%。表明本法精密度良好。2.6 重复性考察取同一批号(批号100301)供试品,按供试品溶液制备方法制备6份供试液。按上述含量测定方法,测定每份供试液中芍药苷的含量,结果RSD=0.53%(n=6)。表明本法重复性良好。2.7 稳定性试验取“2.6”项下供试品溶液1份,于常温下放置0、4、8、12、24 h,然后测定其含量,结果RSD=0.26%(n=5)。表明供试品溶液在24 h内稳定。2.8 加样回收率考察取已知含量的同一批号样品(批号100301,含量为2.62 mg/g)约0.25 g,精密称定,共6份,分别精密加入芍药苷对照品溶液(0.025 4 mg/mL)25 mL,按供试品溶液的制备方法自“超声处理30 min……”起,制成加样回收供试品溶液,测定芍药苷峰面积并计算芍药苷含量,结果平均回收率为102.0%,RSD=1.4%(n=6)。结果表明,用本法测定芍药苷的含量,加样回收率在95%～105%,符合有关的技术要求。见表1。表1 芍药苷加样回收率试验结果2.9 样品测定按“2.2.2”项下方法对3批样品进行测定,结果见表2。表2 样品中芍药苷含量测定结果3 讨论参考文献[1]和2010年版《中华人民共和国药典》(一部)白芍[2]含量测定,考察了2种流动相：甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.5)、乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)。预试结果显示,2种流动相都能对芍药苷进行良好的分离,阴性均无干扰,但后者所得到的芍药苷色谱峰峰形更加尖锐、对称性好,故确定以乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)为流动相。同时,用DAD检测器对芍药苷对照品溶液进行光谱扫描,发现其最大吸收波长在230 nm左右,预试验显示当以230 nm为检测波长进行检测时,供试品溶液色谱图中芍药苷峰吸收最强,其余杂质峰吸收相对较弱,故将检测波长定为230 nm。我们查阅文献[3-4]后发现,多数采用稀乙醇为提取溶剂,故分别考察了提取溶剂(30%乙醇、稀乙醇、80%乙醇)、提取溶剂用量(10、25、50 mL)、超声时间(20、30、40 min)。结果显示,当采用稀乙醇25 mL超声提取30 min时,即能将样品中芍药苷提取完全。按拟订的含量测定方法,对同一批号样品(批号100301),采用不同厂家的色谱仪、不同品牌的色谱柱进行测定,结果RSD=0.3%。表明本方法耐用性良好。【参考文献】[1] 李颖.和络舒肝片质量标准研究[J].中国中医药信息杂志,2009, 16(2)：[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社,2010：[3] 管清香,岳峻威,刘昕,等.桂芍镇痫片质量标准研究[J].中国中医药信息杂志,2009,16(1)：[4] 江涛,莫斯.HPLC法测定追风透骨胶囊中芍药苷的含量[J].海峡药学,2010,22(11)：
